發(fā)布時間：2020-09-01 20:21

　　 第一部分 文獻綜述圍繞RA滑膜血管新生與lncRNA HOTAIR的關系的相關研究進展及“從絡治痹”對RA的認識、治療和中醫(yī)藥對RA預后的影響等做以詳細論述。第二部分 臨床研究目的:對接受過溫經(jīng)通絡法治療的RA寒濕痹阻證患者進行隨訪,分析患者預后情況,考察溫經(jīng)通絡法的遠期有效性及影響RA預后的因素。方法:對參加過北京中醫(yī)藥大學自主選題項目(2013-ZYLC-010)的84例患者進行隨訪,對患者疾病活動度、中醫(yī)證候積分、HAQ評分進行評估,并記錄患者隨訪期限內(nèi)的診治及用藥、合并癥、關節(jié)鍛煉等情況,采用logistic回歸法分析與RA預后相關的因素。結(jié)果:治療組患者的ESR、RF、壓痛關節(jié)數(shù)、VAS評分、DAS28水平、中醫(yī)證候積分及HAQ評分低于對照組(P0.05),兩組間CRP、腫脹關節(jié)數(shù)、晨僵時間方面相比無統(tǒng)計學差異;兩組患者在既往病史、新發(fā)疾患、BMI、不良生活習慣方面無顯著差異,但治療組口服中藥及中醫(yī)外治的應用較對照組為多,定期門診、規(guī)律復查、關節(jié)鍛煉等情況優(yōu)于對照組(P0.05)。Logistic回歸法檢驗發(fā)現(xiàn),采用以溫經(jīng)通絡法為主的中藥治療及關節(jié)鍛煉進入回歸方程(P0.05),對RA臨床緩解及低疾病活動度的維持具有保護性意義。結(jié)論:溫經(jīng)通絡法能通過良好療效提高患者依從性,對RA預后起到了積極的作用;以溫經(jīng)通絡為法的中醫(yī)治療和關節(jié)鍛煉能改善RA寒濕痹阻證患者的遠期預后。第三部分 實驗研究實驗一目的:構(gòu)建并篩選過表達HOTAIR及陰性對照穩(wěn)定株,為后續(xù)溫經(jīng)通絡法干預研究提供實驗材料。方法:經(jīng)過慢病毒載體的構(gòu)建、包裝、純化、滴度測定構(gòu)建過表達HOTAIR質(zhì)粒,選擇最適感染復數(shù)(MOI)后轉(zhuǎn)染HFLS-RA細胞,經(jīng)嘌呤霉素篩選2周,最后對得到的穩(wěn)定株HOTAIR表達情況進行qPCR驗證。結(jié)果:構(gòu)建好的過表達HOTAIR慢病毒滴度為1.54×108IU/mL,經(jīng)轉(zhuǎn)染并篩選后,倒置顯微鏡下觀察可見過表達HOTAIR和陰性對照穩(wěn)轉(zhuǎn)株的EGFP熒光率均達到98%以上,嘌呤霉素抗性明顯,空白組無熒光表達,qPCR結(jié)果顯示過表達組與陰性對照及空白組相比HOTAIR相對表達量顯著升高(P0.05)。結(jié)論:過表達HOTAIR及陰性對照穩(wěn)定株(分別記為HOTAIR(+)和HOTAIR-NC細胞)構(gòu)建成功。實驗二目的:探討HOTAIR在RA發(fā)病中的作用以及溫經(jīng)通絡法對RA滑膜血管新生的干預機制,豐富溫經(jīng)通絡法治療寒濕痹阻型RA的理論依據(jù)。方法:Il-1β誘導構(gòu)建好的HOTAIR(+)和HOTAIR-NC細胞造模,分空白組、誘導組、雷公藤組、芍甘附子湯加味小、中、大劑量組含藥血清干預;采用CCK-8法檢測細胞增殖,qPCR法和WB法檢測細胞內(nèi)HIF-1α、VEGF、VEGFR-2、Ang-1、Ang-2mRNA相對表達量和蛋白表達量,ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清液中HIF-1α、VEGF、VEGFR-2、Ang-1、Ang-2的含量。結(jié)果:誘導后HOTAIR(+)組細胞較HOTAIR-NC組細胞具有更高的增殖率,與誘導組相比,兩種細胞各劑量治療組均表現(xiàn)出了對細胞增殖的抑制作用,其中大劑量組與雷公藤組效果類似,但差異不顯著(P0.05);QPCR結(jié)果顯示,隨HOTAIR水平升高,誘導組HIF-1α、VEGFA、VEGFR-2、Ang-1、Ang-2mRNA表達水平均有顯著升高(P0.05),HOTAIR(+)細胞更為顯著,治療后各因子表達量均有所下降,各中藥含藥血清治療組的效果基本呈劑量依賴性,HOTAIR(+)和HOTAIR-NC細胞除Ang-2外,其余各血管生成相關因子mRNA及HOTAIR的表達差異不顯著(P0.05);蛋白表達結(jié)果顯示,HOTAIR(+)誘導組HIF-1α、VEGFR-2、Ang-2蛋白表達水平顯著增高(P0.05),而HOTAIR-NC細胞僅Ang-2的結(jié)果具有統(tǒng)計學差異(P0.05);與誘導組相比,兩種細胞大劑量組對Ang-2蛋白表達水平具有顯著抑制作用(P0.05),各中藥治療組在Ang-2蛋白表達水平的抑制方面效果較明顯,結(jié)果與藥物血清濃度呈正相關(P0.05);NC組VEGFA水平高于過表達組(P0.0.05),而IL-1β誘導后VEGFR-2、Ang-1、Ang-2水平則低于HOTAIR(+)細胞,這一情況在Ang-1組的對比中較為顯著(P0.05);誘導組經(jīng)IL-1β刺激后,上清液均中可檢出顯著高于空白組的HIF-1α、VEGFA、VEGFR-2、Ang-1、Ang-2濃度(P0.05),各治療組含藥血清干預后各因子水平均有減低(P0.05),各中藥干預組間的療效基本呈劑量依賴性,劑量越高改善越明顯;兩種細胞經(jīng)刺激后,HOTAIR-NC細胞上清內(nèi)VEGFA、VEGFR-2、Ang-1含量低于過表達組(P0.05)。結(jié)論:HOTAIR可能通過促進HIF-VEGF-Ang軸相關血管新生因子的表達,促進RA滑膜成纖維細胞增殖,影響RA的預后;加味芍甘附子湯作為溫經(jīng)通絡法的代表,可能是通過下調(diào)細胞內(nèi)HOTAIR的表達,抑制HIF-VEGF-Ang軸相關血管新生因子和RA滑膜成纖維細胞的增殖以發(fā)揮其改善預后的效果,其中大劑量藥物的干預作用最為顯著。
【學位單位】：北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R259
【部分圖文】：

兩組共有男性患者１２例，女性患者５０例，男女比例為１：４．１，其中治療組男性５例，女逡逑性２７例，對照組男性７例，女性２３例。對兩組納入患者的性別進行比較，經(jīng)卡方檢驗無顯逡逑著組間差異（Ｐ＞０．０５），具有可比性，見表２、圖２。逡逑表２兩組患者性別比較（單位：例）逡逑組別邐ｎ邐男邐女邐ｘ２邐Ｐ逡逑治療組邐３２邐５邋（１５．６３％）邐２７邋（８４．３７％）逡逑０．５８９邐０．４４３逡逑對照組邐３０邐７邋（２３．３３％）邐２３邋（７６．６７％）逡逑４０－｜邐ＣＺ３邋女逡逑口見逡逑ｃｚｚ逡逑｜邋－Ｐ曑逡逑ＪｆｌＪｒａｉ邐對照織逡逑圖２兩組患者性別比較（單位：例）逡逑１．４兩組隨訪時年齡及分布情況逡逑經(jīng)統(tǒng)計，治療組及對照組納入患者的平均年齡分別為５７．５９±１０．４５歲和６０．８７±１０．５０逡逑歲，其中治療組忠者年齡最�。常稓q，最大８３歲，對照組患者年齡最小３４歲，最大８０歲，逡逑兩組患者年齡比較經(jīng)檢驗無明顯組間差異（Ｐ＞０．0５）；按２０－４０歲、４１－６０歲、６］－８０歲和逡逑大于８０歲對患者年齡進行分層分析顯示，兩組患者年齡主要分布于４１－６０歲和６１－８０歲，逡逑分別占９０．６３％和９３．３３％，卡方檢驗顯示兩組間在年齡分層上差異不明顯（廣ｆｔ５Ｖ９＞０．０５），逡逑具有可比性

大于８０歲對患者年齡進行分層分析顯示，兩組患者年齡主要分布于４１－６０歲和６１－８０歲，逡逑分別占９０．６３％和９３．３３％，卡方檢驗顯示兩組間在年齡分層上差異不明顯（廣ｆｔ５Ｖ９＞０．０５），逡逑具有可比性，見表３，圖３、４。逡逑４７逡逑

邐溫經(jīng)通絡法治療類風濕關節(jié)炎的預后分析及對滑膜血管新生的干預機制研宄邐逡逑表３兩組患者年齡比較（單位：歲）逡逑ｎ邐各年齡段ｎ邋（％）逡逑組別邐邐邐邐邋ｘ±ｙ邐ｔ邋Ｐ逡逑（例）邐２０－４０邐４１－６０邐６１－８０邐＞８０逡逑治療組邐３２邐２邋（６．２５）邐１７邋（５３．１３）邐１２邋（３７．５０）邐１邋（３．１２）邐５７．５９±１０．４５逡逑－１．２２９邐０．２２４逡逑對照組邐３０邐２邋（６．６７）邐１２邋（４０．００）邐１６邋（５３．３３）邐０邋（０．００）邐６０．８７±１０．５０逡逑８0ｉ邐２０－１逡逑

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