發(fā)布時間：2020-07-19 18:11

【摘要】：目的:探討艾條懸灸對皮質(zhì)酮腎陽虛大鼠海馬及杏仁核中鹽皮質(zhì)激素受體(mineralocorticoid receptor,MR)和糖皮質(zhì)激素受體(glucocorticoid receptor,GR)基因及蛋白表達(dá)的影響,揭示艾條懸灸改善腎陽虛證的可能分子機(jī)制。方法:將70只Sprague-Dawley雄性大鼠,體重200±25g,由江西中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供,借助隨機(jī)數(shù)字表分為空白對照組(n=20)和造模組(n=50)。造模組大鼠依據(jù)每克體重給予0.03mg劑量的氫化可的松注射液于雙后肢肌注(左右后肢交替注射)每日1次,連續(xù)14天建立腎陽虛大鼠模型。造模完成后,剔除不符合要求及死亡的大鼠,剩下造模成功的40只大鼠同樣按隨機(jī)數(shù)字表分成2組,分別是模型對照組(20只),艾條懸灸組(20只)。艾條懸灸組從實驗第15天起開始介入艾條懸灸,懸灸前預(yù)先剪去穴位處的毛發(fā),用江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院特制的艾條(直徑8mm,長12mm)懸于關(guān)元穴、腎俞穴(雙)上,先回旋灸2min預(yù)熱局部皮膚,再固定于上述穴位施行溫和灸,實施者將食指放于穴位四周,以有溫?zé)岣袨橐�。艾條懸灸20min,每日一次,7次為一療程,療程間隔休息2日,再進(jìn)行第二療程,共治療14次。其他兩組大鼠進(jìn)行與艾條懸灸組大鼠同樣的捆綁固定及備皮操作。兩個療程結(jié)束后,取材。采用ELISA法檢測大鼠血清中ACTH、CRH、CORT指標(biāo)含量,采用RT-PCR技術(shù),Western blot技術(shù)檢測觀察各組大鼠海馬和杏仁核中MR和GR mRNA及蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1.體重比較:(1)造模前各組大鼠體重相比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)具有可比性;(2)造模14天,與模型對照組比較,空白對照組大鼠增長明顯,有顯著性差異(P0.01)。2.血清指標(biāo)檢測:(1)與空白對照組比較,模型對照組大鼠血清ACTH、CRH、CORT表達(dá)均下降,均有顯著性差異(P0.01);(2)與模型對照組比較,艾條懸灸組大鼠血清CRH、CORT表達(dá)均有不同程度的上升,有顯著性差異(P0.01),血清ACTH的表達(dá)也具有顯著性差異(P0.05);(3)艾條懸灸組與空白對照組比較,上述各指標(biāo)均無顯著性差異(P0.05)。3.基因(mRNA)表達(dá):(1)海馬:(1)與空白對照組比較,模型對照組海馬MR mRNA表達(dá)雖有下降但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而GR mRNA表達(dá)下降,差異有顯著性意義(P0.05);(2)與模型對照組相比較,艾條懸灸組海馬MR、GRmRNA表達(dá)雖有不同程度的上升,但是差異未達(dá)至統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);(2)杏仁核:(1)與空白對照組比較,模型對照組杏仁核MR、GR mRNA表達(dá)下降,極具顯著性差異(P0.01);(2)與模型對照組比較,艾條懸灸組杏仁核MR mRNA表達(dá)上升,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),GR mRNA表達(dá)升高,具有顯著性差異(P0.05);(3)與空白對照組比較,艾條懸灸組杏仁核MR、GR mRNA表達(dá)無顯著性差異(P0.05)。4.蛋白表達(dá):(1)海馬:(1)與空白對照組比較,各組大鼠海馬MR蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),但模型對照組大鼠海馬GR蛋白表達(dá)明顯下調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),艾條懸灸組大鼠海馬GR蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);(2)與模型對照組比較,艾條懸灸組大鼠海馬GR蛋白表達(dá)上調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);(2)杏仁核:(1)與空白對照組相比,模型對照組大鼠杏仁核MR、GR的蛋白表達(dá)明顯下降,均有顯著性差異(P0.05),艾條懸灸組大鼠杏仁核MR、GR蛋白表達(dá)基本達(dá)至正常水平并無顯著性差異(P0.05);(2)與模型對照組比較,艾條懸灸組杏仁核MR、GR蛋白表達(dá)上升,有顯著性差異(P0.05)。結(jié)論:1.本實驗在查閱各類腎陽虛大鼠造模方法文獻(xiàn)后,選用肌注氫化可的松注射液方法成功建立皮質(zhì)酮腎陽虛大鼠模型,為本實驗的展開奠定良好基礎(chǔ)。2.艾條懸灸腎俞穴(雙)、關(guān)元穴能有效改善腎陽虛大鼠的陽虛癥狀,在艾灸的溫?zé)岽碳ず吞囟ㄑㄎ恍?yīng)干預(yù)下HPA軸上ACTH、CRH、CORT的激素水平升高,HPA軸相關(guān)調(diào)節(jié)功能漸趨正常。3.艾條懸灸使海馬、杏仁核GR mRNA及蛋白表達(dá)上調(diào),同樣幫助杏仁核的MR mRNA及蛋白表達(dá)水平上調(diào),從而參與到HPA軸的負(fù)反饋調(diào)控中,這可能是艾灸改善腎陽虛證的分子機(jī)制之一。
【學(xué)位授予單位】：江西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R245
【圖文】：

圖 1 造模圖（給大鼠注射氫化可的松）ig.1 Modeling diagram (injection of hydrocortisone物模型成功的判斷者通過動物實驗研究證實，采用氫化可的松注射液對大鼠

圖 3 血清 ACTH 檢測步驟Fig.3 Serum ACTH Detection step的實際濃度：我們先用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度以及 OD 值計算出標(biāo)式，再將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，最樣品的實際濃度。：加樣過程中盡量不要碰觸孔壁，應(yīng)直接加于孔底；濃洗，在稀釋時可在水浴中加溫助溶；加樣操作中應(yīng)使用加控制在 5 分鐘內(nèi)，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，避免誤差；每線，最好做復(fù)孔；封板膜只限一次性使用，以避免交叉洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

總RNA提取步驟Fig.4RNAextractionstep

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本文編號：2762775