【摘要】：目的:觀察電針治療后局灶性腦梗死大鼠健側(cè)大腦腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、突起坍塌蛋白(Semaphorin3A,Sema3A)、神經(jīng)纖毛蛋白1(Neuropilin-1,NRP-1)表達(dá)的變化及運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)情況,探討電針調(diào)節(jié)健側(cè)大腦促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)的可能機(jī)制。方法:將SPF級(jí)雄性SD大鼠隨機(jī)分為手術(shù)組(n=99)、假手術(shù)組(n=48),手術(shù)組大鼠采用Longa改良線栓法制備右側(cè)大腦中動(dòng)脈(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,參照Bederson4分5級(jí)法對(duì)MCAO大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分,選取評(píng)分在2-3分者進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn),死亡或不符合評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)的大鼠按數(shù)量補(bǔ)齊。術(shù)后24小時(shí)在手術(shù)組MCAO大鼠中隨機(jī)選取3只,進(jìn)行TTC染色,觀察腦梗死灶位置。余手術(shù)組大鼠隨機(jī)分為模型組(n=48),電針組(n=48),假手術(shù)組、模型組、電針組按時(shí)間點(diǎn)分為3天、7天、14天、28天四個(gè)亞組(n=12)。電針組大鼠取雙側(cè)肢體內(nèi)關(guān)(PC6)、足三里(ST36)行電針治療,模型組、手術(shù)組同時(shí)間做捆綁處理。電針28d組、模型28d組各選取6只大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分和腳步錯(cuò)誤試驗(yàn)評(píng)估;在4個(gè)取材時(shí)間點(diǎn),每亞組隨機(jī)取6只大鼠,使用4%多聚甲醛灌注后分離取出腦組織并固定,行HE染色、尼氏染色觀察腦梗死大鼠健側(cè)腦組織結(jié)構(gòu)、神經(jīng)元、尼氏小體變化;免疫組化法檢測(cè)健側(cè)大腦皮層BDNF、Sema3A、NRP-1表達(dá)變化;其余取新鮮腦組織,進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative Real-time QT-PCR)檢測(cè)健側(cè)大腦皮層BDNF、Sema3A、NRP-1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果:(1)神經(jīng)功能、運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分顯示,電針組與模型組術(shù)后第3天無明顯差異(P0.05),術(shù)后第7、14、28天電針組、模型組神經(jīng)功能和腳步錯(cuò)誤實(shí)驗(yàn)評(píng)分逐漸降低,且電針組明顯低于模型組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)TTC染色:可見右側(cè)大腦皮質(zhì)區(qū)梗死灶明顯,包括了感覺運(yùn)動(dòng)區(qū),左側(cè)大腦未見梗死灶。(3)HE染色:與假手術(shù)組比較模型組和電針組大鼠健側(cè)大腦皮質(zhì)在術(shù)后第3天,神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量減少,部分固縮呈三角形,細(xì)胞核染色較深,細(xì)胞間距增大,排列出現(xiàn)紊亂。第7天至28天,神經(jīng)細(xì)胞逐漸多,形態(tài)基本恢復(fù)正常,排列有序,電針組神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)增加較模型組快。(4)尼氏染色:模型組、電針組大鼠術(shù)后第3天,健側(cè)大腦皮質(zhì)尼氏小體有輕微裂解現(xiàn)象;術(shù)后7天時(shí),尼氏小體數(shù)量減少,神經(jīng)細(xì)胞輕微腫脹,模型組較電針組明顯。術(shù)后14天至28天,尼氏小體數(shù)目逐漸恢復(fù)正常。(5)免疫組化:術(shù)后第3天,電針組與模型組BDNF平均光密度值無明顯差異(P0.05);術(shù)后第7、14、28天電針組平均光密度值明顯高于模型組(P0.05)。電針組術(shù)后第3天Sema3A、NRP-1與模型組平均觀密度值比較無明顯差異(P0.05),第7、14、28天明顯低于模型組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(6)實(shí)時(shí)熒光定量PCR:術(shù)后第3天,電針組與模型組BDNFmRNA相對(duì)表達(dá)量無明顯差異(P0.05);術(shù)后第7、14、28天電針組表達(dá)量明顯高于模型組(P0.05)。電針組術(shù)后第3天Sema3A、NRP-1mRNA相對(duì)表達(dá)量與模型組比較無明顯差異(P0.05),第7、14、28天表達(dá)量明顯低于模型組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:健側(cè)大腦皮層參與腦梗死后的神經(jīng)功能重塑,電針可通過調(diào)節(jié)健側(cè)大腦皮層來實(shí)現(xiàn)部分功能代償,改善大鼠神經(jīng)功能缺損癥狀及運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù),其機(jī)制可能與上調(diào)BDNF,促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞生長,下調(diào)Sema3A、NRP-1,減輕對(duì)軸突再生的抑制作用有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R245.97
【圖文】：

2019 屆碩士學(xué)位論文 電針對(duì)局灶性腦梗死大鼠健側(cè)大腦皮層 BDNF、Sema3A、NRP-1 表達(dá)的影響結(jié) 果1.TTC 染色如圖 1 所示，TTC 染色后可見由右側(cè)大腦中動(dòng)脈供血的額葉、頂葉、顳葉、枕葉皮層以及少部分皮下組織可見呈蒼白色的梗死灶，其梗死范圍大面積覆蓋了大腦感覺運(yùn)動(dòng)皮層區(qū)域。左側(cè)大腦顏色鮮紅、結(jié)構(gòu)完整，未見白色梗死灶。（圖 3-1）

圖 3-2 假手術(shù)組及手術(shù)組大鼠 3d、7d、14d、28d 時(shí)健側(cè)大腦皮層 HE 病理染色（ ×400）Fig.3-2 The HE pathological staining of the cerebral cortex in the sham operation group and the operationgroup at 3d, 7d, 14d and 28d (×400)A: sham-operated group; B: model group at 3d;C: electrocacupuncture group at 3d;D: model group at 7d;Emodel group at 14d;F: model group at 28d;G: electrocacupuncture group at 7d;H: electrocacupuncturegroup at 14d;I: electrocacupuncture group at 28d.3.2 尼氏染色假手術(shù)組神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)正常，胞漿染色深藍(lán)，核仁清晰，呈淡藍(lán)色，尼氏小體數(shù)量較多，細(xì)胞排列整齊有序。模型組、電針組術(shù)后 3 天，健側(cè)大腦皮質(zhì)部分部分神經(jīng)細(xì)胞胞漿顏色變淡，核仁輕微固縮，顏色變深，尼氏小體有輕微裂解現(xiàn)象；術(shù)后 7 天時(shí)，尼氏小體數(shù)量減少，神經(jīng)細(xì)胞輕微腫脹，模型組較電針組明顯。術(shù)后 14 天電針組較模型組尼氏小體增多，神

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