【摘要】：目的:觀察針刺“大椎”、“腎俞”、“足三里”穴對(duì)多發(fā)性硬化(multiple sclerosis,MS)經(jīng)典動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(experimentalautoimmune cephalomyelitis,EAE)小鼠神經(jīng)系統(tǒng)損傷癥狀的改善程度和其對(duì)脊髓磷酸化絲裂原活化蛋白激酶p-p38MAPK及血清IL-1β的影響,驗(yàn)證針刺對(duì)MS的治療作用,探究針刺干預(yù)EAE小鼠的相關(guān)機(jī)制,為臨床針刺治療MS提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:將40只C57BL/6小鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、模型+針刺組(針刺組)、模型+激素組(激素組),每組10只。除空白組外,其余各組小鼠采用髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白 33-55(myelin oligodendrocyte glycoprotein 33-55,MOG33-55)與完全弗氏佐劑(complete freund's adjuvant,CFA)誘導(dǎo)建立EAE模型。各組自造模第14天(明顯發(fā)病)開始,每日上午同一時(shí)間干預(yù)治療�？瞻捉M和模型組每日抓取、固定,并用生理鹽水[0.1mL/(10g·d)]灌胃;針刺組應(yīng)用針刺干預(yù)小鼠“大椎”、雙側(cè)“足三里”穴、雙側(cè)“腎俞”穴15分鐘;激素組用醋酸潑尼松龍藥液(0.6mg/mL)灌胃[0.1mL/(10g·d)]治療;以上各組均連續(xù)干預(yù)治療15天。從造模當(dāng)天開始,采用隔天測量體質(zhì)量和神經(jīng)功能評(píng)分評(píng)價(jià)小鼠行為學(xué)變化;于免疫第28天對(duì)各組小鼠進(jìn)行眼球采血并留取脊髓組織,采用LFB染色技術(shù)檢測小鼠脊髓脫髓鞘損傷程度;分別采用酶聯(lián)免疫吸附法和蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測小鼠血清IL-1β的含量及脊髓組織p-p38MAPK蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:(1)小鼠體質(zhì)量變化:與空白組相比,免疫第12天后,模型各組小鼠平均體質(zhì)量明顯下降;與模型組相比,免疫第20天后,針刺組與激素組小鼠平均體質(zhì)量明顯升高(P0.05);而與激素組相比,免疫第22天后,針刺組小鼠的平均體質(zhì)量明顯下降(P0.05)。(2)小鼠行為學(xué)變化:實(shí)驗(yàn)過程中空白組小鼠未出現(xiàn)臨床癥狀和行為學(xué)異常改變。在免疫第10天后,模型各組小鼠均先后發(fā)病,表現(xiàn)為精神疲倦、毛色晦暗、蜷縮扎堆及不同程度的神經(jīng)功能缺損癥狀。與空白組相比,模型各組自免疫第14天開始,平均神經(jīng)功能評(píng)分明顯升高(P0.05);與模型組相比,病程高峰期時(shí)(免疫后第20天),針刺組與激素組小鼠平均神經(jīng)功能評(píng)分明顯下降(P0.05);高峰期過后,模型各組小鼠癥狀略有緩解趨勢,但與EAE模型組相比,至免疫第28天時(shí),針刺組與激素組小鼠平均神經(jīng)功能評(píng)分均明顯下降(P0.05),而針刺組與激素組兩組之間無明顯差異(P0.05)。(3)LFB染色結(jié)果:正常組小鼠脊髓組織的髓鞘致密,排列整齊。模型組EAE小鼠脊髓組織出現(xiàn)多個(gè)部位髓鞘脫失,以侵犯白質(zhì)為主。脊髓組織白質(zhì)疏松,可見多個(gè)大小不一的片狀脫髓鞘區(qū),呈“空泡樣”改變。針刺組和激素組EAE小鼠多部位脫髓鞘程度明顯減輕,髓鞘脫失部位明顯減少。(4)IL-1β的檢測結(jié)果:發(fā)病28天時(shí),與空白組相比,模型組小鼠血清IL-1β表達(dá)增高(P0.05);與模型組相比,針刺組與激素組小鼠血清IL-1β表達(dá)均降低(P0.05);而針刺組與激素組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(5)p-p38MAPK的檢測結(jié)果:發(fā)病28天時(shí),與空白組相比,模型組小鼠脊髓磷酸化p38MAPK蛋白p-p38MAPK表達(dá)增高(P0.05);與模型組相比,針刺組與激素組小鼠脊髓p-p38MAPK蛋白表達(dá)均降低(P0.05);而針刺組與激素組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:(1)針刺能明顯改善EAE小鼠神經(jīng)功能損傷癥狀;(2)針刺能下調(diào)EAE小鼠脊髓中p-p38MAPK的蛋白含量,提示針刺對(duì)p38MAPK信號(hào)通路的激活有抑制作用;(3)針刺能明顯下調(diào)EAE小鼠血清IL-1β蛋白的表達(dá),且其調(diào)節(jié)作用與激素相當(dāng);(4)本研究驗(yàn)證了針刺對(duì)EAE小鼠有治療作用,其作用機(jī)制可能與p38MAPK蛋白磷酸化受抑制及血清IL-1β表達(dá)的下調(diào)有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R245;R-332
【圖文】：

逑３．邋４各組小鼠脊髓ＬＦＢ染色結(jié)果逡逑如圖３空白組小鼠脊髓組織的髓鞘致密，排列整齊。模型組ＥＡＥ小鼠脊髓組織出逡逑現(xiàn)多個(gè)部位髓鞘脫失，以侵犯白質(zhì)為主。脊髓組織白質(zhì)疏松，可見多個(gè)大小不一的片狀逡逑脫髓鞘區(qū)，呈“空泡樣”改變。針刺組和激素組ＥＡＥ小鼠多部位脫髓鞘程度明顯減輕，逡逑髓鞘脫失部位明顯減少。逡逑Ｈ１ＨＩ逡逑注：Ａ空白組；Ｂ模型組；Ｃ針刺組；Ｄ激素組逡逑圖３各組小鼠脊髓染色切片圖（ＬＦＢ，邋Ｘ４００）逡逑３．５各組小鼠血清ＩＬ－丨卩蛋白表達(dá)水平逡逑發(fā)病２８天時(shí)，與空白組相比，模型組小鼠血清ＩＬ－ｉｐ蛋白表達(dá)水平明顯上調(diào)（Ｐ＜０．０５）；逡逑與模型組比較，激素組與針刺組小鼠血清ＩＬ－１（３蛋白表達(dá)水平均明顯下調(diào)（Ｐ＜０．０５）；但逡逑針刺組與激素組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＞０．０５）。見表５，圖４。逡逑５３逡逑

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本文編號(hào)：2730818