【摘要】：目的:觀察艾灸梁門(雙)、足三里(雙)對(duì)急性胃黏膜損傷大鼠模型胃黏膜組織形態(tài)與病理的動(dòng)態(tài)變化,運(yùn)用代謝組學(xué)技術(shù)從不同時(shí)間點(diǎn)探討艾灸胃經(jīng)穴對(duì)大鼠急性胃黏膜損傷發(fā)生發(fā)展過(guò)程中腦胃組織代謝的影響,尋找代謝標(biāo)志物及代謝通路,為艾灸治療胃黏膜損傷性疾病的臨床應(yīng)用提供部分實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:72只SD雄性大鼠隨機(jī)分為4組:正常組(A組)、模型組(B組)、模型+艾灸穴位組(C組)、模型+艾灸對(duì)照點(diǎn)組(D組),每組18只。根據(jù)觀察時(shí)間:1、4、7天,每組大鼠又隨機(jī)分成3個(gè)亞組,每個(gè)亞組6只。除A組外,BCD組大鼠采用乙醇灌胃法造急性胃黏膜損傷模型。造模后,C和D組大鼠用鼠板固定,進(jìn)行艾灸胃經(jīng)穴或?qū)φ拯c(diǎn)操作,30min/次,1次/日。A和B組大鼠不進(jìn)行干預(yù),其他處理同C和D組。ABCD四組的三個(gè)亞組分別予1、4、7天的處理,并對(duì)大鼠進(jìn)行一般行為學(xué)觀察。實(shí)驗(yàn)后取胃黏膜組織進(jìn)行肉眼觀察、黏膜損傷指數(shù)測(cè)量和HE染色病理觀察。采用核磁共振氫譜技術(shù)(~1H-NMR)檢測(cè)各組大鼠胃組織、腦皮質(zhì)和延髓,利用模式識(shí)別分析篩選代謝標(biāo)志物。運(yùn)用MetaboAnalyst對(duì)所獲得的代謝標(biāo)志物進(jìn)行代謝通路的分析。結(jié)果:1.大鼠一般行為學(xué)觀察:與正常組比較,模型組大鼠精神萎靡,反應(yīng)靈活性較差,活動(dòng)減少,在實(shí)驗(yàn)后期有一定程度的恢復(fù);與模型組比較,艾灸組大鼠精神狀態(tài)恢復(fù)較快,其中艾灸胃經(jīng)穴組比對(duì)照點(diǎn)組狀態(tài)恢復(fù)較好。2.大鼠胃黏膜組織形態(tài)觀察:與正常組相比,模型組、艾灸胃經(jīng)穴組和艾灸對(duì)照點(diǎn)組在第1、4天,大鼠胃黏膜表面肉眼觀察有不同程度的充血點(diǎn),胃壁褶皺消失,胃黏膜損傷指數(shù)顯著上升(均P0.01 or P0.05),光鏡下組織形態(tài)發(fā)生顯著病理改變;第7天三組大鼠胃黏膜表面肉眼觀察基本無(wú)明顯充血點(diǎn),光鏡下黏膜病理改變有不同程度的改善。其中艾灸胃經(jīng)穴、對(duì)照點(diǎn)4天組大鼠胃黏膜組織結(jié)構(gòu)比模型4天組恢復(fù)較完整,大鼠黏膜損傷指數(shù)皆有降低(P0.01,P0.05),此外,艾灸胃經(jīng)穴4天組亦低于艾灸對(duì)照點(diǎn)4天組(P0.05),說(shuō)明艾灸胃經(jīng)穴組大鼠胃黏膜組織損傷改善最明顯,恢復(fù)程度最好。3.大鼠腦胃代謝輪廓比較:(1)胃組織:1、4天中,模型組、兩種艾灸組均與正常組有較為明顯的分離。而艾灸胃經(jīng)穴組與艾灸對(duì)照點(diǎn)組在1、4、7天中的分離度均比較差。(2)腦皮質(zhì):1、4天中,模型組、兩種艾灸組均與正常組有明顯的區(qū)分,第7天有不同程度趨近正常組,其中兩種艾灸組更接近正常水平。此外,艾灸胃經(jīng)穴組和艾灸對(duì)照點(diǎn)組在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均有明顯區(qū)分。(3)延髓:第1天中,模型組、兩個(gè)艾灸組均與正常組有較好的分離,第4、7天逐漸靠近正常水平,其中艾灸胃經(jīng)穴組優(yōu)先趨于正常水平。此外,艾灸胃經(jīng)穴組和艾灸對(duì)照點(diǎn)組在第4天區(qū)分較為明顯。提示在急性胃黏膜損傷發(fā)生發(fā)展早中期大鼠腦、胃組織的代謝物譜均出現(xiàn)較為劇烈的變化,并隨自我修復(fù)發(fā)展而發(fā)生的有一定程度恢復(fù)。兩種艾灸治療均有不同程度地促進(jìn)急性胃黏膜損傷大鼠腦胃組織的代謝輪廓趨于正常水平,其中艾灸胃經(jīng)穴能更早促進(jìn)延髓代謝水平的恢復(fù)。4.艾灸治療GML大鼠相關(guān)代謝標(biāo)志物:(1)胃組織有15種,包括:β-葡萄糖、α-葡萄糖、乙酸、檸檬酸、丙酮酸、草酰乙酸、異亮氨酸、亮氨酸、纈氨酸、賴氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天門冬氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸。(2)腦皮質(zhì)有8種,包括:琥珀酸、α-酮戊二酸、肌酸、甘油磷酸膽堿、富馬酸、牛磺酸、谷氨酸和谷氨酰胺。(3)延髓有7種,包括:乳酸、檸檬酸、甲硫氨酸、甘氨酸、絲氨酸、谷胱甘肽和苯丙氨酸。這些代謝標(biāo)志物在艾灸治療大鼠急性胃黏膜損傷1、4、7天中存在動(dòng)態(tài)變化,提示大鼠急性胃黏膜損傷發(fā)生發(fā)展中出現(xiàn)能量代謝、抗氧化免疫能力、細(xì)胞活性和神經(jīng)遞質(zhì)功能的紊亂,并隨自我修復(fù)發(fā)展而發(fā)生了動(dòng)態(tài)變化。兩種艾灸治療對(duì)代謝標(biāo)志物皆有不同程度的調(diào)節(jié)作用,其中艾灸胃經(jīng)穴比艾灸對(duì)照點(diǎn)對(duì)部分代謝標(biāo)志調(diào)節(jié)作用時(shí)間早、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。5.艾灸對(duì)GML模型大鼠各組織代謝通路及腦-胃整體代謝通路的影響:(1)艾灸調(diào)節(jié)GML大鼠胃組織內(nèi)代謝標(biāo)志物共涉及13條代謝通路,以參與能量代謝、氨基酸及酰胺類代謝為主。(2)艾灸調(diào)節(jié)GML大鼠大腦皮質(zhì)內(nèi)代謝標(biāo)志物共涉及8條通路,以參與氨基酸及酰胺類代謝為主。(3)艾灸調(diào)節(jié)GML大鼠延髓內(nèi)代謝標(biāo)志物共涉及8條通路,以參與氨基酸及酰胺類代謝為主。(4)艾灸調(diào)節(jié)GML大鼠腦-胃整體代謝共涉及20條代謝通路,以參與能力代謝、氨基酸及酰胺類代謝為主。結(jié)論:1.大鼠胃黏膜組織的肉眼觀察、病理觀察和胃黏膜損傷指數(shù)的結(jié)果表明:大鼠胃黏膜組織對(duì)急性黏膜損傷有一定的自我修復(fù)能力,艾灸可促進(jìn)胃黏膜組織損傷的修復(fù)、改善損傷的組織形態(tài)。并且艾灸胃經(jīng)穴比艾灸對(duì)照點(diǎn)的治療起效時(shí)間更快,黏膜損傷愈合更好。2.基于~1H-NMR代謝組學(xué)技術(shù),揭示了大鼠在急性胃黏膜損傷過(guò)程中腦、胃組織的代謝物譜的動(dòng)態(tài)變化。不同時(shí)間點(diǎn)中相關(guān)代謝標(biāo)志物的變化,表明急性胃黏膜損傷修復(fù)過(guò)程中大鼠腦、胃組織可出現(xiàn)能量代謝、抗氧化免疫能力、細(xì)胞活性和神經(jīng)遞質(zhì)功能的紊亂,以及隨自我修復(fù)而發(fā)生部分自我調(diào)節(jié)的動(dòng)態(tài)變化。3.運(yùn)用~1H-NMR代謝組學(xué)技術(shù)結(jié)合多元數(shù)據(jù)分析方法,揭示了艾灸治療大鼠急性胃黏膜損傷可通過(guò)早期并較長(zhǎng)期促進(jìn)病灶局部能量的釋放,提高細(xì)胞活性,增強(qiáng)腦組織抗氧化、免疫功能和能量代謝,以及調(diào)節(jié)腦-胃整體神經(jīng)遞質(zhì)功能相關(guān)的代謝物及通路,進(jìn)而對(duì)大鼠急性胃黏膜損傷組織修復(fù)產(chǎn)生有益的影響。4.兩種艾灸治療對(duì)代謝標(biāo)志物皆有不同程度的調(diào)節(jié)作用,艾灸胃經(jīng)穴對(duì)GML大鼠腦-胃標(biāo)志物代謝調(diào)節(jié)總體優(yōu)于艾灸對(duì)照點(diǎn),艾灸胃經(jīng)穴在調(diào)節(jié)腦-胃能量代謝、細(xì)胞活性方面作用時(shí)間更快,療效時(shí)間更持久,具有穴位特異性。
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R245.81
【圖文】：

4. 各組大鼠胃黏膜組織的病理形態(tài)學(xué)結(jié)果如圖 3、圖 4 所示，光鏡下正常組 1、4、7 天亞組大鼠：胃黏膜上皮結(jié)構(gòu)完整，黏膜細(xì)胞及腺體排列整齊，黏膜下層和肌層無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。與此相反，模型 1 天組、兩個(gè)艾灸 1 天組大鼠：100 倍光鏡下顯示皆出現(xiàn)嚴(yán)重受損的胃黏膜上皮結(jié)構(gòu)，大量黏膜細(xì)胞壞死和脫落，黏膜下層和肌層有明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，毛細(xì)血管增生及出血。400 倍光鏡下可見(jiàn)黏膜細(xì)胞稀疏甚至出現(xiàn)空洞，腺體排列紊亂，細(xì)胞內(nèi)見(jiàn)水腫，胞核胞質(zhì)模糊。實(shí)驗(yàn)干預(yù) 4 天后，模型 4 天組大鼠黏膜層結(jié)構(gòu)仍不太完整，黏膜細(xì)胞排列比較紊亂稀疏，黏膜下層仍可見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，毛細(xì)血管增生及出血；艾灸胃經(jīng)穴4 天組和對(duì)照點(diǎn) 4 天組大鼠在黏膜結(jié)構(gòu)和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)方面均有不同程度的改善。其中艾灸胃經(jīng)穴4天組比對(duì)照點(diǎn)4天組大鼠胃黏膜上皮結(jié)構(gòu)及黏膜細(xì)胞恢復(fù)較為

黏膜細(xì)胞排列仍比較稀疏，血管形態(tài)恢復(fù)正常，偶見(jiàn)炎性細(xì)胞。艾灸胃經(jīng)穴 7天組較模型組 7 天組、對(duì)照點(diǎn) 7 天組大鼠胃黏膜組織改善程度顯著。提示 GML大鼠有一定的自我修復(fù)能力，而艾灸有良好促進(jìn) GML 大鼠胃黏膜修復(fù)的治療作用，并且艾灸胃經(jīng)穴治療 GML 大鼠效果優(yōu)于艾灸對(duì)照點(diǎn)。

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本文編號(hào)：2728598