發(fā)布時間：2020-06-19 15:39

【摘要】：背景:肝內(nèi)膽汁淤積(intrahepatic cholestasis,IC),是一種由于肝細(xì)胞或毛細(xì)膽管結(jié)構(gòu)與功能障礙,導(dǎo)致膽汁酸在肝臟內(nèi)蓄積,從而引發(fā)肝臟病變的臨床綜合征。目前治療IC的藥物十分有限,且存在嚴(yán)重不良反應(yīng)。特色藏藥“亞吉瑪”(裸莖金腰Chrysosplenium nudicaule Bunge)是藏醫(yī)臨床治療肝膽疾病的良藥,但目前尚未見現(xiàn)代藥效學(xué)評價和相關(guān)作用機制的研究報道。目的:評價裸莖金腰對IC型肝損傷的影響并探討其相關(guān)機制,為藏藥“亞吉瑪”的臨床應(yīng)用提供現(xiàn)代藥理學(xué)證據(jù),奠定其進一步開發(fā)利用的基礎(chǔ)。方法:采用α-萘異硫氰酸酯(ANIT)誘導(dǎo)法建立小鼠IC型肝損傷模型;采用全自動生化分析儀,檢測裸莖金腰提取物(Extract of C.nudicaule,ECN)干預(yù)后小鼠血清AST、ALT、ALP、DBIL、TBIL、TBA水平;采用比色法檢測ECN干預(yù)后小鼠肝組織勻漿SOD、GSH、MDA活性;病理切片觀察ECN干預(yù)后小鼠小鼠肝組織病理變化;采用RT-PCR法測定ECN干預(yù)后小鼠肝組織中Bsep、Cyp7a1、Fxr、Mrp2、Shp、Ntcp等基因的mRNA表達(dá)評價;采用western-blot法測定ECN不同極性部位干預(yù)對小鼠肝臟BSEP、CYP7A1、FXR、MRP2、SHP、NTCP蛋白表達(dá)。結(jié)果:(1)ECN能劑量依賴性的降低模型小鼠血清中AST、ALT、ALP、DBIL、TBIL、TBA的含量水平、升高小鼠肝組織勻漿SOD和GSH的活性(P0.01,P0.05),同時降低MDA的含量(P0.01,P0.05)。小鼠肝臟病理切片顯示,ECN可改善模型小鼠肝臟病理變化;(2)ECN不同極性萃取部位的活性評價結(jié)果表明,其乙酸乙酯部位、正丁醇部位能劑量依賴性的降低模型小鼠血清中AST、ALT、ALP、DBIL、TBIL、TBA的含量水平(P0.01,P0.05);(3)mRNA分析結(jié)果表明,ECN能顯著改變膽汁酸代謝相關(guān)基因的表達(dá)水平,如Bsep、Fxr、Mrp2的mRNA表達(dá)顯著上調(diào)(P0.01,P0.05),同時Cyp7a1的表達(dá)顯著下調(diào)(P0.01,P0.05)。其乙酸乙酯部位、正丁醇部能顯著升高模型小鼠肝組織Shp、Ntcp的mRNA表達(dá);(4)蛋白表達(dá)結(jié)果表明,ECN的乙酸乙酯部位、正丁醇部位能顯著改變模型小鼠的膽汁酸代謝相關(guān)蛋白的表達(dá)水平,如BSEP、FXR、MRP2、SHP、NTCP的蛋白表達(dá)顯著上調(diào)(P0.01,P0.05),同時CYP7A1的表達(dá)顯著下調(diào)(P0.01,P0.05)。結(jié)論:裸莖金腰提取物具有逆轉(zhuǎn)肝內(nèi)膽汁淤積的作用,其有效部位為乙酸乙酯部位和正丁醇部位,其作用機制可能與抑制脂質(zhì)過氧化,減少肝細(xì)胞損傷,激活FXR及其靶蛋白,減少膽汁酸的合成,增加膽汁酸的排泄有關(guān)。本研究為特色藏藥亞吉瑪在藏醫(yī)藥中的臨床應(yīng)用提供了現(xiàn)代藥理學(xué)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：江西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R29
【圖文】：

1. 空白組 2. 模型組 3. 聯(lián)苯雙酯組 4. ECN 低劑量組 5. ECN 中劑量組 6.ECN 高劑量組 7.未造模組 。圖 1 ECN 對 ANIT 致肝內(nèi)膽汁淤積小鼠血清生化指標(biāo)的變化(χˉ±s)Figure1 Effect of ECN on serum biochemical parameters inANIT induced liver injury mice3.2 ECN 對 ANIT 致肝內(nèi)膽汁淤積小鼠 SOD、MDA、GSH 含量的影響與空白組比較，模型組小鼠肝組織勻漿中 SOD 活性和 GSH 含量極顯著降低(P <0.01)，而 MDA 含量則極顯著升高(P < 0.01)；未造模組的小鼠肝組織中 SOD 活性和GSH、MDA 含量沒有明顯變化。與模型組比較，聯(lián)苯雙酯組小鼠肝組織中 MDA 含量極顯著降低(P < 0.01)，SOD 活性和 GSH 含量極顯著升高(P < 0.01)；ECN 低、中、高劑量組小鼠肝組織勻漿中 SOD 活性和 GSH 含量明顯升高(P < 0.05), MDA 的含量明顯降低(P < 0.05，P < 0.01)，且具有劑量依賴性。結(jié)果見表 4。

組別 劑量/g·kg-1 數(shù)量（只） SOD/U·mg-1GSH/mg·g-1MDA/nM·mg-1空白對照組 - 9 108.53±6.66 1.31±0.16 0.64±0.18模型組 - 9 70.73±1.87##0.93±0.08##1.60±0.40##聯(lián)苯雙酯組 0.15 9 105.07±7.34**1.39±0.20**0.98±0.29**ECN 1.0 10 79.42±15.40*1.09±0.18*1.24±0.24*2.0 10 84.23±1.28**1.31±0.18**1.22±0.31*4.0 10 100.52±5.51**1.32±0.18**1.01±0.21**未造模組 4.0 10 107.03±7.61 1.41±0.20 0.63±0.16注：與空白組比較，##P < 0.01；與模型組比較，*P < 0.05, **P < 0.01。表 4 ECN 對 ANIT 致肝內(nèi)膽汁淤積小鼠肝組織勻漿中 SOD、MDA、GSH 含量水平的影響(χˉ±s)Table 4 Effect of ECN on the content of SOD, MDAand GSH-Px in liver tissue homogenate of anit-induced liver injurymice( x ±s, n =8-10)

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本文編號：2720999