【摘要】：艾灸(moxibustion)是中國最古老的醫(yī)術(shù)之一,屬中藥外治法,有溫通經(jīng)脈、協(xié)調(diào)陰陽、祛寒除濕、消瘀逐痹等功效,臨床適用于中醫(yī)痹癥。艾灸療法具有很好地抗炎、消腫止痛、免疫調(diào)節(jié)、活血化瘀、清理自由基和免疫抑制的作用,其治療疾病的原理是依靠腧穴的特殊作用為內(nèi)因;艾灸的溫?zé)嶙饔煤桶q藥物作用為外因,內(nèi)外因相結(jié)合進(jìn)而產(chǎn)生綜合的治療效應(yīng)。膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)的理想動物模型,其在臨床表現(xiàn)、病理學(xué)、免疫學(xué)改變和病理機(jī)制等方面與RA有許多相似特征,實(shí)驗(yàn)中選用CIA大鼠作為動物模型,從而觀察在實(shí)驗(yàn)所選穴位上實(shí)施艾灸對RA大鼠的治療效果及作用機(jī)制。課題組前期在“相對穴”(complementary acupoints)作用機(jī)制的研究中,觀察到了“相對穴”兩穴間的組織細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)通信聯(lián)系結(jié)構(gòu),為“相對穴”的陰陽相濟(jì)協(xié)同增效作用機(jī)制提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)�！跋鄬ρā标柫耆c陰陵泉為臨床針刺治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的常選穴,故選用陰、陽陵泉這對“相對穴”作為艾灸實(shí)驗(yàn)組,意將艾灸的抗炎、免疫調(diào)節(jié)作用與“相對穴”的“協(xié)同增效”作用結(jié)合,從而作為實(shí)驗(yàn)的干預(yù)措施。腎俞、足三里為艾灸治療RA在臨床、實(shí)驗(yàn)中的常選穴,其療效得到了研究者的認(rèn)可,故選艾灸腎俞、足三里組為陽性對照組。應(yīng)用組織形態(tài)學(xué)、分子生物學(xué)技術(shù)檢驗(yàn)、觀察干預(yù)后各組大鼠的各項檢測指標(biāo)的變化,進(jìn)而研究艾灸“相對穴”對RA大鼠機(jī)體的影響,并分析其可能的作用機(jī)制,為艾灸“相對穴”治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。目的:觀察艾灸“相對穴”陽陵泉與陰陵泉對RA大鼠行為、形態(tài)、體征變化情況與其余各項檢測指標(biāo)的關(guān)系,探索艾灸陰、陽陵泉這組“相對穴”對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療效應(yīng)及機(jī)制,意在為“相對穴”配穴的艾灸療法治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。方法:1實(shí)驗(yàn)動物分組及實(shí)驗(yàn)措施實(shí)驗(yàn)動物為SPF級雄性Wistar大鼠(體重140g±15g,32只),采用隨機(jī)數(shù)字表法從大鼠中隨機(jī)抽取8只為正常對照組(K組),用牛二型膠原、弗氏完全佐劑的混勻乳化劑對剩余24只大鼠進(jìn)行造模。按0.2ml/只的劑量,對大鼠進(jìn)行皮內(nèi)注射,采用背部及尾根部多點(diǎn)注射,以關(guān)節(jié)炎指數(shù)AI≥9(設(shè)定四肢患處關(guān)節(jié)紅腫程度評分相加后的關(guān)節(jié)炎指數(shù)最大值為16)作為造模成功的標(biāo)準(zhǔn)。模型建立成功后,對造模的大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組(M組)、艾灸陽陵泉與陰陵泉組(AB組)、艾灸腎俞與足三里組(CD組)。大鼠進(jìn)行穴區(qū)剃毛處理后,兩個艾灸組均采用艾柱灸的干預(yù)方式(每柱由2mg的精制艾絨制成,每穴5壯/天)。艾灸陽陵泉與陰陵泉組采用雙側(cè)隔天灸治;艾灸腎俞與足三里組采用雙側(cè)隔天灸治;模型組和正常組雖做相同的剃毛處理、固定,但不做任何干預(yù)。在艾灸組連續(xù)給予干預(yù)十次完成后,全部大鼠麻醉處死取材。2指標(biāo)檢測2.1觀察大鼠行為、形態(tài)、體征變化情況,具體包括大鼠運(yùn)動行為上的變化、肉眼可見的四肢患處關(guān)節(jié)癥狀表現(xiàn);監(jiān)測各組大鼠在造模前、造模后、治療后的體重變化情況;電子數(shù)顯卡尺測量各組大鼠左足部足跖厚度、踝關(guān)節(jié)直徑;用BME-410C全自動熱痛刺激儀測量各組大鼠的左足熱痛閾值;X線診斷機(jī)上觀察左側(cè)足、爪的軟組織及骨骼破壞程度。2.2 HE染色法檢測各組大鼠膝關(guān)節(jié)滑膜組織病理改變情況。2.3甲苯胺藍(lán)染色法檢測各組大鼠足部患處肥大細(xì)胞(mast cell,MC)數(shù)量、脫顆粒情況;ELISA法檢測大鼠血清中MC釋放的腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、緩激肽(bradykinin,BK)含量。結(jié)果:1各組大鼠行為、形態(tài)、體征變化情況與艾灸治療的相關(guān)性。1.1治療結(jié)束后,K組大鼠行為正常,足爪形態(tài)正常無任何體征異�，F(xiàn)象,飲食正常。M組大鼠跛行嚴(yán)重、足爪出現(xiàn)紅腫、尾部出現(xiàn)結(jié)節(jié)、嗜臥少食,嚴(yán)重者可出現(xiàn)前爪拖后肢移行。AB、CD兩個艾灸組大鼠跛行減輕,輕者可以正常爬行,足爪紅腫減輕,尾部無結(jié)節(jié)出現(xiàn),較M組食多;1.2造模前,各組大鼠體重差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。造模完成后,造模各組大鼠體重均低于K組(P0.05)。最后一次艾灸干預(yù)結(jié)束后,艾灸的AB組和CD組體重均高于M組(P0.05)。兩個艾灸組大鼠體重差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),提示兩個艾灸組的干預(yù)對RA大鼠均有治療的作用;1.3造模前,各組大鼠左踝關(guān)節(jié)直徑無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。造模后,與K組比較,其余各組大鼠左踝關(guān)節(jié)直徑顯著增寬(P0.05),提示造模成功。干預(yù)后,與M組比較,AB、CD兩個艾灸組大鼠左踝關(guān)節(jié)直徑都縮短(P0.05),而AB、CD兩個艾灸組之間比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);1.4造模前,各組大鼠左足跖厚度無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。造模后,與K組比較,其余各組大鼠左足跖厚度顯著增寬(P0.05),提示造模成功。干預(yù)后,與M組比較,AB、CD兩個艾灸組大鼠左足跖厚度均減小(P0.05)。AB、CD兩個艾灸組比較,AB組比CD組大鼠左足跖厚度減小(P0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義;1.5造模前,各組大鼠左足熱痛閾值無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。造模后,與K組比較,其余各組大鼠左足熱痛閾值低于K組(P0.05)。干預(yù)后,與M組比較,AB組和CD組大鼠左足熱痛閾值均升高(P0.05),提示兩個艾灸組對RA大鼠均有治療作用,且AB組較CD組熱痛閾值升高(P0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義;1.6 X線成像顯示:除K組外,其余各組大鼠左足、爪均有不同程度的軟組織腫脹、關(guān)節(jié)骨骼畸形、骨質(zhì)破壞。相較于M組大鼠,AB組和CD組大鼠左足、爪部軟組織腫脹明顯減輕,各關(guān)節(jié)骨骼畸形、骨質(zhì)破壞有所好轉(zhuǎn),且AB組大鼠足、爪恢復(fù)程度略好于CD組。2各組大鼠膝關(guān)節(jié)滑膜組織經(jīng)HE染色后的病理改變顯示:K組大鼠,滑膜組織單薄,無炎性浸潤、纖維增生;M組大鼠,滑膜組織增厚、炎性浸潤、纖維增生明顯;AB、CD兩個艾灸組大鼠的滑膜,滑膜組織增厚、炎性浸潤、纖維增生等病理情況好轉(zhuǎn),且AB組的艾灸效果略優(yōu)于CD組(在×400倍光學(xué)顯微鏡下觀察)。3根據(jù)各組大鼠足部患處MC數(shù)量、脫顆粒情況觀察其與大鼠血清中MC釋放的TNF-α、BK含量的關(guān)系。3.1各組大鼠足部患處甲苯胺藍(lán)染色檢測顯示:K組MC數(shù)量及脫顆粒情況正常;M組MC數(shù)量及脫顆粒情況增加;AB、CD組較M組MC數(shù)量及脫顆粒情況減少,較K組增加,且AB組低于CD組。各組間比較,MC數(shù)量及脫顆粒率均差異顯著(P0.05)(在×400倍光學(xué)顯微鏡下觀察);3.2檢測血清TNF-α、BK顯示:各組間比較均存在顯著差異(P0.05)。AB、CD兩個艾灸組的TNF-α、BK血清含量小于M組,且AB組的TNF-α、BK血清含量較CD組小。結(jié)論:1艾灸“相對穴”陰陵泉與陽陵泉對RA大鼠有較好的療效,能夠顯著減輕RA大鼠的炎性反應(yīng)及臨床癥狀表現(xiàn);2艾灸AB組較艾灸CD組治療效果明顯,這可能跟腧穴特殊效應(yīng)有關(guān),凸顯了“相對穴”的協(xié)同增效作用優(yōu)勢,也可能跟陰陵泉、陽陵泉這組“相對穴”臨近患處的位置優(yōu)勢有關(guān);3艾灸干預(yù)RA大鼠能影響RA大鼠患處足部MC的動態(tài)變化,降低其釋放的TNF-α、BK在血清中的含量,這可能是艾灸干預(yù)RA大鼠顯效的作用機(jī)理之一。
【學(xué)位授予單位】：承德醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R245

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本文編號：2710568