【摘要】：[背景]2型糖尿病(T2DM)是胰島β細胞分泌胰島素不足或靶細胞對胰島素不敏感所致的以高血糖為臨床主要表現(xiàn)的一種復雜疾病。長期高血糖狀態(tài)會引發(fā)血管、神經(jīng)的損傷,并出現(xiàn)一系列炎癥反應,因此T2DM也被認為是一種慢性低度的炎癥狀態(tài),它受到機體免疫系統(tǒng)的調(diào)控。胰腺中浸潤的免疫細胞可以通過自分泌或旁分泌的方式干擾外周組織的胰島素信號傳導或誘導β細胞損傷,但由于T2DM發(fā)病機制的復雜性,免疫細胞在其中所起的具體作用及作用機制并不完全清楚。[目的]本課題采用db/db小鼠模型,探討T2DM發(fā)生發(fā)展中胰腺組織內(nèi)髓源抑制性細胞(MDSCs)、CD8+T和胰島β細胞損傷之間的關系,闡明其調(diào)控作用及內(nèi)在機制,并部分揭示壯藥綬草中天麻苷修復胰島β細胞損傷的過程及機制。[方法]以SPF級雄性db/db小鼠和同型對照鼠為研究對象,檢測4-16周內(nèi)小鼠體重、空腹血糖、糖耐量、胰島素耐量變化;通過ELISA法檢測外周血中炎癥因子的表達;利用胰島素抗體染色技術(shù)檢測胰島β細胞數(shù)量及功能。運用流式細胞術(shù)分析小鼠外周血、肝臟、脾和胰腺中MDSCs、CD8+T細胞、胰島β細胞的比例,并分選胰腺MDSCs、CD8+T細胞和胰島βp細胞進行實驗。通過體外CD8+T細胞增殖抑制實驗和細胞共培養(yǎng)實驗,體內(nèi)過繼轉(zhuǎn)移實驗,觀察胰腺MDSCs、CD8+T和胰島β細胞之間的相互作用及方式。在體外,利用MTT實驗檢測綬草70%提取物中各成分對胰腺MDSCs細胞活力的影響;通過細胞增殖實驗、Western blot和細胞爬片實驗,檢測綬草中天麻苷對胰腺MDSCs增殖的影響及內(nèi)在信號通路中節(jié)點蛋白的表達變化。[結(jié)果]1.T2DM炎癥與胰島β細胞損傷的研究:(1)與WT小鼠相比,db/db小鼠體重、空腹血糖升高;糖耐量、胰島素耐量受損;胰腺中MDSCs所占比例明顯降低(P0.01);CD8+T細胞的比例升高(P0.001)。(2)16周時,與WT小鼠相比,db/db小鼠外周血中炎癥因子IL-6、IL-β、TNF-α和TGF-β含量明顯高于對照組(P0.05);同時,胰島β細胞數(shù)量和胰島素的分泌減少。2.T2DM胰腺中MDSCs對CD8+T細胞介導的胰島β細胞損傷作用的研究:(1)胰腺組織中,db/db小鼠MDSCs趨化因子CCL2的基因表達和胰腺MDSCs的比例顯著低于WT小鼠(P0.001)。胰腺MDSCs與胰島β細胞不接觸,而部分CD8+T細胞浸潤在胰島中,與胰島β細胞相鄰。(2)體外實驗結(jié)果顯示,胰腺MDSCs抑制CD8+T的增殖。胰島β細胞與CD8+T細胞共培養(yǎng)時,β細胞數(shù)量減少;加入胰腺MDSCs后,胰島β細胞存活率升高(P0.001)。3.綬草中天麻苷可以顯著增強胰腺MDSCs細胞活力,并在0.25 ng/ml的濃度時最為顯著(P0.01);天麻苷對胰島β細胞活力無直接影響。4.天麻苷(0.25 ng/ml)處理胰腺MDSCs后,其增殖峰顯著增多。Western-blot檢測結(jié)果顯示,天麻苷(0.25 ng/ml)處理胰腺MDSCs中p38、P-p38、ERK、p65蛋白表達明顯增多(P0.01)。胰腺MDSCs細胞表面TNFR2受體敲除后,天麻苷對細胞p38和p65蛋白表達沒有影響。[結(jié)論]1.胰腺MDSCs通過抑制CD8+T細胞的增殖改善CD8+T細胞介導的胰島β細胞的損傷。2.壯藥綬草中天麻苷通過激活TNFR2/MAPK信號通路,促進MDSCs細胞增殖進而修復胰島β細胞損傷。
【圖文】：

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【學位授予單位】：中央民族大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R29

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本文編號：2690165