【摘要】：背景和目的抑郁癥是一種臨床常見的情感性精神障礙,具有高患病率,高復(fù)發(fā)率,高自殺率和難治愈的特點(diǎn)。目前,抑郁癥的病理機(jī)制尚不明確,臨床缺乏有效治療手段。JNK信號通路是絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated proteinkinases,MAPK)家族成員之一,稱c-j un氨基末端激酶(c-Jun N-terminal Kinase,JNK)。JNK在細(xì)胞生長、分化、凋亡、應(yīng)激反應(yīng)及多種人類疾病的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用。前期實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),應(yīng)激誘導(dǎo)的大鼠JNK信號通路激活參與了抑郁癥的發(fā)生與發(fā)展,通過針刺干預(yù)可以降低JNK的磷酸化水平,抑制神經(jīng)元凋亡,改善大鼠抑郁樣行為。本研究將基于前期研究基礎(chǔ),通過CUMS結(jié)合慢性孤養(yǎng)建立大鼠慢性應(yīng)激模型,側(cè)腦室注射JNK信號通路阻斷劑SP600125,進(jìn)行電針干預(yù),以體重、曠場實(shí)驗(yàn)和糖水偏好實(shí)驗(yàn),評價(jià)大鼠行為學(xué)指標(biāo)變化;觀察電針后海馬CA3區(qū)c-fos與下丘腦c-jun,垂體c-fos及血清c-fos、AP-1表達(dá)的差異;以c-jun、c-fos、AP-1的表達(dá)作為海馬、下丘腦、垂體神經(jīng)元功能的標(biāo)志,旨在研究慢性應(yīng)激抑郁癥大鼠海馬、下丘腦、垂體神經(jīng)元功能活性的改變;電針干預(yù)降低JNK的磷酸化水平的效應(yīng)機(jī)制;進(jìn)一步為針刺的臨床應(yīng)用提供新的科學(xué)依據(jù)。方法1動物分組將64只雄性SD大鼠,隨機(jī)分為8組,每組8只:空白對照組(對照組)、模型組、模型+DMSO組(DMSO組)、模型+SP600125組(SP組)、模型+電針組(電針組)、模型+電針+SP600125組(電針+SP組)、模型+氟西汀組(氟西汀組)、模型+氟西汀+SP600125組(氟西汀+SP組)。2造模方法除對照組外,其余大鼠均采用國際公認(rèn)的CUMS造模方法:應(yīng)用7種不可預(yù)知溫和刺激方法(震蕩30min、夜間光照12h、束縛2h、夾尾3min、斷食24h、斷水24h、潮濕墊料24h)連續(xù)刺激21天,平均每種刺激各使用3次。3干預(yù)方法電針干預(yù)選取“內(nèi)關(guān)”(PC6)、“三陰交”(SP6)穴;用30號1寸毫針直刺進(jìn)行,深度為0.3-0.5cm,針柄連接HANS LH-202型電針儀,電針頻率為2Hz,電流強(qiáng)度為0.6mA,大鼠四肢微顫即可,每次進(jìn)行20min,每天1次,持續(xù)21天;氟西汀用蒸餾水配成0.2mg/ml的混懸液,以1.8ml/kg灌胃給藥,每天1次,持續(xù)21天。4處理方法對照組不給予任何刺激,正常群居飼養(yǎng)。其余每組均單籠飼養(yǎng)并且接受21天慢性應(yīng)激。同時(shí),電針組于每天造模前30min進(jìn)行電針干預(yù);氟西汀組于每天應(yīng)激前30min進(jìn)行氟西汀灌胃給藥;DMSO組于應(yīng)激前1h給予10μl/1d DMSO側(cè)腦室注射;SP組于應(yīng)激前1h給予10μl/1d阻斷抑制劑SP600125稀釋液側(cè)腦室注射;電針+SP組、氟西汀+SP組于應(yīng)激前1h給予10μl/1d阻斷抑制劑SP600125稀釋液側(cè)腦室注射,于應(yīng)激前30min分別給予電針干預(yù)和氟西汀灌胃給藥。5檢測方法行為學(xué)檢測:在實(shí)驗(yàn)前1天和實(shí)驗(yàn)第21天分別測量大鼠的體重、曠場實(shí)驗(yàn)和糖水偏好指數(shù),以評價(jià)模型大鼠行為學(xué)改變情況。指標(biāo)檢測:運(yùn)用免疫組化法檢測海馬CA3區(qū)c-fos表達(dá)情況;ELISA法檢測下丘腦c-jun、垂體c-fos、血清c-fos和AP-1表達(dá)情況。結(jié)果1.行為學(xué)變化實(shí)驗(yàn)前1天,各組之間體重、曠場實(shí)驗(yàn)、糖水偏好指數(shù)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。實(shí)驗(yàn)第21天,與對照組相比,模型組大鼠的體重、曠場實(shí)驗(yàn)、糖水偏好指數(shù)均顯著減少(P0.01),提示造模成功;與模型組相比,電針組體重、曠場實(shí)驗(yàn)、糖水偏好指數(shù)均顯著增加(P0.01),氟西汀組水平穿越格數(shù)增加(P0.05),體重顯著增加(P0.01),說明電針和氟西汀干預(yù)可以改善抑郁模型大鼠的抑郁樣行為,并且電針干預(yù)效果要優(yōu)于氟西汀;DMSO組體重、曠場實(shí)驗(yàn)、糖水偏好指數(shù)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),表明側(cè)腦室套管埋置手術(shù)對大鼠行為學(xué)影響不大;手術(shù)組(DMSO組、SP組、電針+SP組、氟西汀+SP組)之間體重、曠場實(shí)驗(yàn)無顯著差異(P0.05);與電針組相比,電針+SP組體重顯著減少(P0.01),曠場實(shí)驗(yàn)減少(P0.05),糖水偏好指數(shù)無顯著差異(P0.05);與氟西汀組相比,氟西汀+SP組體重顯著減少(P0.01),曠場實(shí)驗(yàn)、糖水偏好指數(shù)無顯著差異(P0.05)。2.JNK信號通路下游分子的表達(dá)水平實(shí)驗(yàn)21天后,與對照組相比,模型組大鼠海馬CA3區(qū)c-fos、下丘腦c-jun、垂體c-fos、血清c-fos和AP-1表達(dá)均顯著上升(P0.01),說明慢性應(yīng)激刺激可以激活JNK相關(guān)下游分子的表達(dá)水平;與模型組相比,電針組海馬CA3區(qū)c-fos表達(dá)下降(P0.05),下丘腦c-j un、垂體c-fos、血清c-fos和AP-1表達(dá)顯著下降(P0.01),氟西汀組海馬CA3區(qū)c-fos、垂體c-fos表達(dá)下降(P0.05),下丘腦c-jun、血清c-fos和AP-1表達(dá)顯著下降(P0.01),說明電針和氟西汀能夠在一定程度上逆轉(zhuǎn)JNK相關(guān)下游分子的表達(dá)上調(diào),DMSO組各項(xiàng)指標(biāo)表達(dá)水平均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與DMSO組相比,SP組下丘腦c-jun、血清AP-1表達(dá)下降(P0.05),電針+SP組各項(xiàng)指標(biāo)表達(dá)水平均顯著下降(P0.01),氟西汀+SP組下丘腦c-j un、血清c-fos和AP-1表達(dá)顯著下降(P0.01);與電針組相比,電針+SP組各項(xiàng)指標(biāo)表達(dá)均無顯著差異(P0.05);與氟西汀組相比,氟西汀+SP組海馬CA3區(qū)c-fos、下丘腦c-j un、垂體c-fos、血清AP-1表達(dá)均無顯著差異(P0.05),血清c-fos表達(dá)下降(P0.05)。結(jié)論1慢性溫和不可預(yù)知應(yīng)激刺激結(jié)合孤養(yǎng)可誘導(dǎo)模型大鼠體重下降、快感缺失與探究行為減少等行為異常。2電針干預(yù)可改善大鼠抑郁樣行為,可能與其下調(diào)海馬CA3區(qū)c-fos、下丘腦c-jun、垂體c-fos及血清c-fos和AP-1活性相關(guān)。3阻斷劑SP600125對慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠c-j un、c-fos、AP-1的表達(dá)具有干預(yù)作用;對抑郁樣行為學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)存在不同程度的影響。4電針+SP組比氟西汀+SP組對慢性應(yīng)激抑郁模型c-fos表達(dá)水平的干預(yù)效果明顯,阻斷劑SP600125和電針干預(yù)方法在抑制c-fos磷酸化水平上有疊加效應(yīng),更具協(xié)同作用。5氟西汀對慢性應(yīng)激抑郁模型外周血清的干預(yù)效果比電針干預(yù)更明顯。
【圖文】：

邐ＳＰ６００１２５阻斷ＪＮＫ信號通路下電針對ＣＵＭＳ大鼠ｃ－ｆｏｓ和ＡＰ－１表達(dá)的影響邐逡逑從腫瘤等疾病領(lǐng)域，轉(zhuǎn)向神經(jīng)系統(tǒng)方面的疾病，抑郁癥方面也己成為研宄熱點(diǎn)，有關(guān)逡逑ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｆｏｓ和ＡＰ－１表達(dá)的研宄多是急性應(yīng)激實(shí)驗(yàn)，慢性應(yīng)激T中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)正Ｇｓ逡逑表達(dá)的研宄很少，慢性應(yīng)激性抑郁大鼠海馬與下丘腦中ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｆｏｓ和ＡＰ－１的表達(dá)僅逡逑有少部分研究，其具體機(jī)制尚未明確。因此，本研究通過ＣＵＭＳ結(jié)合慢性孤養(yǎng)建立大逡逑鼠慢性應(yīng)激模型，，以ＪＮＫ信號通路下游分子ｃ－ｊｕｉｕｃ－ｆｏｓ和ＡＰ－１過度激活作為切入點(diǎn)，逡逑進(jìn)一步探究電針抗抑郁效應(yīng)機(jī)制，為臨床提供生物標(biāo)志物證據(jù)。逡逑

電針組體重?zé)o顯著差異（＾＞０．０５），氟西�。樱薪M體重顯著減少（／＾＜０．０１）；逡逑手術(shù)組（ＤＭＳＯ組、ＳＰ組、電針＋ＳＰ組、氟西�。樱薪M）間的體重?zé)o顯著差異（尸＞０．０５）。逡逑（見表２和圖２）逡逑４５逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R245.97

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本文編號：2670817