【摘要】：目的:本研究通過抗生素聯(lián)合腎上腺糖皮質(zhì)激素復(fù)制菌群失調(diào)及免疫力低下的大鼠模型,觀察治療小兒反復(fù)呼吸道感染的臨床有效經(jīng)驗(yàn)方肺系調(diào)治方對大鼠肺組織及結(jié)腸組織的分泌型免疫球蛋白A(SIgA)、腸道菌群及其代謝產(chǎn)物短鏈脂肪酸、腸黏膜組織中緊密連接蛋白及腸內(nèi)容溶菌酶的影響,探討該方“扶衛(wèi)固表”作用的生物學(xué)基礎(chǔ),初步闡明肺系調(diào)治方調(diào)節(jié)呼吸道黏膜免疫功能并同時(shí)修復(fù)腸黏膜屏障防治小兒反復(fù)呼吸道感染的作用機(jī)理,進(jìn)一步豐富中醫(yī)“肺系調(diào)治”的現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵。方法:1.抗生素聯(lián)合腎上腺糖皮質(zhì)激素復(fù)制菌群失調(diào)及免疫力低下大鼠模型,通過觀察大鼠肺組織及結(jié)腸組織的SIgA、腸道菌群以及腸內(nèi)容物短鏈脂肪酸和腸黏膜組織中緊密連接蛋白等指標(biāo)變化評價(jià)模型是否成功。2.制備肺系調(diào)治方水煎劑,于造模成功(實(shí)驗(yàn)第8天)后,從第9天開始以灌胃方法進(jìn)行中藥干預(yù)實(shí)驗(yàn),陽性對照組給予泛福舒灌胃,模型組給予生理鹽水灌胃,共給藥7天。3.通過蛋白質(zhì)印跡及實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測腸黏膜組織中緊密連接蛋白Claudin-1、Occludin和ZO-1的含量;通過16S rRNA基因高通量測序檢測大鼠腸內(nèi)容物的菌群豐度;通過氣相色譜法檢測大鼠腸內(nèi)容物短鏈脂肪酸的含量;通過酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測大鼠肺組織、結(jié)腸組織SIgA及腸內(nèi)容物溶菌酶的含量。結(jié)果:1.模型組大鼠腸黏膜組織中緊密連接蛋白Claudin-1 mRNA的相對表達(dá)呈下降趨勢(P0.05),肺系調(diào)治方低劑量組Claudin-1 mRNA的相對表達(dá)顯著上升(P0.05),其他中藥干預(yù)組呈不同程度的上升趨勢(P0.05);模型組Occludin mRNA的相對表達(dá)極顯著下降(P0.001),中藥干預(yù)組Occludin mRNA的相對表達(dá)極顯著上升(P0.001);模型組ZO-1 mRNA的相對表達(dá)呈下降趨勢(P0.05),肺系調(diào)治方低、中劑量組ZO-1 mRNA的相對表達(dá)顯著上升(P0.05),肺系調(diào)治方高劑量組呈上升趨勢(P0.05)。2.16S rRNA基因高通量測序結(jié)果顯示⑴門水平:(1)模型組大鼠腸內(nèi)容物菌群以Bacteroidetes(擬桿菌門)為主的5個(gè)菌門相對豐度升高,以Firmicutes(厚壁菌門)和Proteobacteria(變形菌門)為主的6個(gè)菌門相對豐度降低;(2)中藥干預(yù)組以Proteobacteria為主的4個(gè)門水平相對豐度降低。⑵屬水平:(1)模型組以Alloprevotella、Bacteroides(擬桿菌屬)、Phascolarctobacterium為主的12個(gè)菌屬相對豐度升高,以Prevotella(普雷沃菌屬)和Lactobacillus(乳桿菌屬)為主的8個(gè)菌屬相對豐度降低;(2)中藥干預(yù)組以Alloprevotella和Clostridium XI(梭菌XI)為主的6個(gè)菌屬相對豐度升高,以Phascolarctobacterium和Oscillibacter(顫桿菌克)為主的6個(gè)菌屬相對豐度降低。3.模型組大鼠腸內(nèi)容物短鏈脂肪酸(乙酸、丙酸、正丁酸)的含量均顯著下降(P0.05),中藥干預(yù)組短鏈脂肪酸含量呈上升趨勢(P0.05)。4.模型組大鼠結(jié)腸組織SIgA的表達(dá)水平呈下降趨勢(P0.05),中藥干預(yù)組SIgA的表達(dá)水平顯著上升(P0.05);模型組肺組織SIgA的表達(dá)水平極顯著下降(P0.001),中藥干預(yù)組SIgA的表達(dá)水平顯著上升(P0.05)。5.模型組大鼠腸內(nèi)容物溶菌酶的表達(dá)顯著下降(P0.05),肺系調(diào)治方低劑量組溶菌酶表達(dá)顯著上升(P0.01),肺系調(diào)治方中、高劑量組呈不同程度的上升趨勢(P0.05)。結(jié)論:1.肺系調(diào)治方可使菌群失調(diào)及免疫力低下大鼠模型肺組織黏膜免疫效應(yīng)分子SIgA水平明顯增高;2.肺系調(diào)治方可通過調(diào)節(jié)腸黏膜緊密連接蛋白、溶菌酶、菌群、短鏈脂肪酸、黏膜免疫效應(yīng)分子SIgA的表達(dá),修復(fù)腸黏膜屏障;3.肺系調(diào)治方對腸黏膜屏障的修復(fù)可能是防治小兒反復(fù)呼吸道感染的生物學(xué)基礎(chǔ)。
【圖文】：

表 1 肺系調(diào)治方對大鼠臟器指數(shù)的影響( x s, mg/g )Table 1 Effect of Feixi Tiaozhi decoction on the organ index of rats( x s, mg/g )組別(Group) N 胸腺指數(shù)(thymus index) 脾臟指數(shù)(spleen index)空白組(Control) 8 1.96±0.42 2.80±0.39模型組(Model) 8 0.64±0.18 2.30±0.39 肺系調(diào)治方低劑量組(FTD-L) 8 0.68±0.18 2.47±0.32肺系調(diào)治方中劑量組(FTD-M) 8 0.76±0.22 2.37±0.56肺系調(diào)治方高劑量組(FTD-H) 8 0.88±0.40 2.61±0.30陽性對照組(OM-85 BV) 8 0.64±0.20 2.46±0.54注：與空白組相比， P＜0.001。

30圖 2 大鼠結(jié)腸組織 HE 染色結(jié)果（10 10）Figure 2 HE staining results of colon tissue (10×10)3.3.2 肺系調(diào)治方對大鼠肺組織病理的影響⑴空白組：肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)完整，支氣管上皮完整，，纖毛結(jié)構(gòu)完整、排列整齊，氣管、血管周圍無明顯炎癥反應(yīng)；⑵與空白組相比，模型組大鼠肺內(nèi)細(xì)支氣管上皮增生，管腔狹窄，管壁增厚，炎性細(xì)胞浸潤；⑶與模型組相比，中藥干預(yù)組及陽性對照組肺內(nèi)細(xì)支氣管上皮增生、管腔狹窄、管壁增厚的程度有所減輕，炎性細(xì)胞浸潤減少。
【學(xué)位授予單位】：云南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R272

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本文編號：2668025