【摘要】：目的:探討(1)“化痰開竅”電針法對高血脂合并腦缺血模型大鼠血脂、行為學、腦組織形態(tài)學和缺血側室管膜下區(qū)(SVZ區(qū))、腦缺血半暗帶區(qū)膠質細胞原纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和神經(jīng)生長因子(Nerve Growth Factor,NGF)表達的影響。(2)電針對單純腦缺血大鼠行為學、腦梗死體積以及缺血側SVZ區(qū)GFAP和NGF蛋白表達的影響。方法:實驗一:將90只雄性SD大鼠隨機分為正常組、高血脂合并假手術組、高血脂合并腦缺血模型組、高血脂合并腦缺血電針1組和2組。除正常組,其余各組大鼠均采用高脂飼料喂養(yǎng)42天,電針1組采用“豐隆”穴兩側電針,每天1次,連續(xù)7天。第50天,模型組和電針組用50%FeCl3誘導建立高血脂癥合并大腦中動脈血栓閉塞模型,術后電針組采用電針“豐隆”和“百會”穴,每日1次,連續(xù)14天。采用生物化學法測定血清中總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)水平,采用神經(jīng)功能評分評估行為學改變,HE染色觀察形態(tài)學改變,免疫組化法檢測SVZ區(qū)、缺血半暗帶區(qū)GFAP和NGF蛋白的表達。實驗二:將72只雄性SD大鼠隨機分為腦缺血模型組,假手術組,電針1組和電針2組。普通飼料喂養(yǎng),電針1組電針兩側“豐隆”穴,每天1次,連續(xù)7天,第8天,用50%FeCl3誘導建立大腦中動脈血栓閉塞模型,電針1、2組電針“百會”、“豐隆”穴,每日1次,連續(xù)7天。采用神經(jīng)功能評分法評估行為學改變,氯化三苯四氮唑(TTC)染色用于檢測大鼠腦梗塞體積。免疫組化法檢測大鼠腦缺血后第1,7天SVZ區(qū)的GFAP和NGF蛋白的表達。結果:實驗一:(1)神經(jīng)行為學:模型組大鼠神經(jīng)功能評分較高,出現(xiàn)缺血側前肢屈曲,后肢無力,向健側轉圈等神經(jīng)缺損癥狀。電針1組神經(jīng)缺損癥狀明顯輕于模型組,有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與電針2組比較,電針1組大鼠神經(jīng)功能缺損癥狀緩解較為明顯。(2)血脂四項:模型組大鼠高血脂合并腦缺血術后TC、LDL升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01),HDL降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),證明高血脂癥造模成功。與模型組相比,術后7天,電針組TG降低具有統(tǒng)計學意義(P0.05),說明電針可能有降血脂的作用,電針1組的減少比電針2組更明顯,表明預治療降血脂的效果更好。(3)腦組織形態(tài):假手術組腦神經(jīng)元形態(tài)幾乎正常,整體組織結構正常。模型組可見皺縮神經(jīng)元,整體組織形態(tài)結構顯腦缺血癥。電針治療后,缺血區(qū)周圍水腫減輕,細胞核逐漸恢復,整體組織形態(tài)結構逐漸恢復正常。(4)免疫組化結果顯示:在大鼠側腦室背外側伸展,術后1天,與假手術比較,模型組GFAP面密度顯著增加(P0.05)。與模型組比較,電針組GFAP面密度持續(xù)增加至術后14天。術后7天,電針1組GFAP面密度和模型組比較,具有統(tǒng)計學意義(P0.05),電針1組面密度高于電針2組。在大鼠側腦室外側壁上段,術后1天,與假手術組比較,模型組GFAP面密度明顯增加(P0.01)。術后7天,與模型組比較,電針1組GFAP面密度具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。術后14天,與模型組比較,電針1組GFAP面密度具有統(tǒng)計學意義(P0.01);電針2組具有統(tǒng)計學意義(P0.05);與電針1組比較,電針2組GFAP面密度具有統(tǒng)計學意義(P0.01),電針1組面密度高于電針2組。在大鼠缺血半暗帶區(qū),術后1天,與假手術組比較,模型組GFAP面密度明顯增加(P0.01)。與模型組比較,電針1組具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。術后14天,與模型組比較,電針組具有統(tǒng)計學意義(P0.01);與電針1組比較,電針2組具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。在大鼠側腦室背外側伸展,術后1天,與假手術組比較,模型組大鼠NGF面密度的表達明顯增加。術后7天,與模型組比較,電針組NGF面密度表達升高,具有統(tǒng)計學意義(P0.01),電針1組NGF面密度表達高于電針2組,具有統(tǒng)計學意義(P0.05),并且持續(xù)升高至術后14天。在大鼠側腦室外側壁上段,術后1天,與假手術組比較,模型組大鼠NGF面密度的表達升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。術后7天,與模型組相比,電針組的NGF面密度明顯升高。術后14天,與模型組比較,電針組NGF面密度持續(xù)升高,電針1組NGF面密度高于電針2組。在大鼠缺血半暗帶區(qū),術后1天,與假手術組比較,模型組升高具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。術后14天,與模型組比較,電針1組具有統(tǒng)計學意義(p0.01)。實驗二:(1)神經(jīng)行為學:與模型組神經(jīng)功能評分比較,電針組具有統(tǒng)計學意義(P0.05),提示缺血導致腦功能嚴重喪失,電針組大鼠患肢功能恢復,提示電針對腦缺血恢復有一定作用。(2)腦梗死體積:與模型組比較,電針組腦梗死體積減小,電針1組有統(tǒng)計學意義(P0.05),電針1組腦梗死體積小于電針2組。(3)免疫組化結果顯示:在大鼠側腦室背外側伸展和側腦室外側壁上段,假手術組GFAP標記的面密度略有表達,模型組的表達明顯高于假手術組(P0.05),電針組表達顯著高于模型組,并持續(xù)至缺血后7天。假手術組NGF表達含量極少,缺血后第1天增加,術后7天最明顯的改善在電針1組,假手術和電針2組也不同程度的增加,腦缺血組顯示最少。結論:“化痰開竅”電針法采用在高脂血癥階段電針“豐隆”穴,腦缺血后電針“豐隆”、“百會”穴能夠調節(jié)血脂代謝,促進腦缺血大鼠肢體功能康復、減少腦梗死體積,改善腦組織病理形態(tài)學變化,上調缺血側大鼠SVZ區(qū)、缺血半暗帶區(qū)GFAP和NGF蛋白,促進星形膠質細胞活化和神經(jīng)生長因子的表達,恢復受損神經(jīng)系統(tǒng),為臨床針灸治療中風提供了理論依據(jù)。
【圖文】：

明腦缺血模型造模成功。電針１組和電針２組的神經(jīng)功能評分均低于模型組，電針１組逡逑評分又低于電針２組，提示電針１組、電針２組的神經(jīng)功能缺損有所減輕，且電針１組逡逑優(yōu)于電針２組。結果見表１，圖１。逡逑邐表１各組大鼠神經(jīng)功能缺損評分比較（無土ｓ，邋ｎ＝６）邐逡逑組別邐神經(jīng)功能缺損評分ＮＤＳ邋（ｓｃｏｒｅ）逡逑假手術組邐０邋＋邋０逡逑模型組邐２．５０±０．４５”逡逑電針１組邐１．６７±０．邋４廣＂逡逑電針邋２邋組邐１．８３±０．６８＂逡逑Ｆ邐４．２００逡逑邐Ｐ邐０．邋０３６邐逡逑注：與假手術比較＊＊尺0．邋０１；與模型組比較ｔｔＫＯ．邋０５。逡逑Ｓ邋４］邐■假手術組逡逑＾３－邐＂邐ＥＥ３模型組逡逑｜２．邐Ｍ邋＾邋Ｔ邋□電針１組逡逑５邐Ｂ邐ｒ＾－ｉ邐＾邐ｓ電針２組逡逑ｊｉ邐■邐１Ｂ逡逑＇邐假手術鉅模型組電針１組電針２組逡逑圖１各組大鼠神經(jīng)功能缺損評分比較逡逑注：與假手術比較＊＊尺0．邋０１；與模型組比較＃代0．邋０５。逡逑３３逡逑

圖１各組大鼠不同時間點血脂檢測結果（ｍｍｏｌ／Ｌ：邋ｊｆ士ｓ；邋ｎ＝６）逡逑Ａ：正常組；Ｂ：模型組；Ｃ：假手術組；Ｄ：電針１組；Ｅ：電針２組。注：圖卜Ａ總膽固醇（ＴＣ）含逡逑量結果；圖１－Ｂ甘油三酯（ＴＧ）結果：圖卜Ｃ高密度脂蛋白（ＨＤＬ）結果；圖卜Ｄ低密度脂蛋白結果逡逑（ＬＤＬ）結果。與正常組比較＊尺０．０５＊＊代０．０１；與模型組比較＃尺０．０５＃＃代０．０１；與假手術比較逡逑ＡＫＯ．邋０５ＡＡ代０．邋０１逡逑３．邋３腦組織形態(tài)學變化逡逑高血脂合并腦缺血術后１天，在腦皮質區(qū)，｜￡常組神經(jīng)細胞核大而圓，淡染，呈均逡逑勻藍色，核仁明顯，胞質粉紅色，神經(jīng)元細胞相互連接構成腦組織，整體組織形態(tài)結構逡逑正常。假手術組神經(jīng)元形態(tài)基本接近正常，僅有少量細胞核淡染，整體組織形態(tài)結構正逡逑常。模型組可見皺縮神經(jīng)元，細胞核體積變小固縮，呈淡藍色，胞體組織稀疏凌亂，整逡逑體組織形態(tài)結構顯腦缺血癥。電針１組神經(jīng)元形態(tài)基本接近正常，偶見萎縮的神經(jīng)細胞逡逑核，染色較深，整體組織形態(tài)結構基本正常。電針２組可見固縮神經(jīng)細胞核，細胞質呈逡逑淺粉紅色，，細胞邊界不清，整體切片顯腦缺血癥（輕型）。結果見附圖中圖１。逡逑在腦髓質區(qū)
【學位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R245.97

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