【摘要】：目的探究瞬時電位感受器通道(Transient receptor potential ankyrin 1,TRPA1)與膝骨關節(jié)炎(Knee osteoarthritis,KOA)疼痛及病理機制之間的聯(lián)系,借以闡明KOA“寒邪”為病的分子機制,以及“溫經活血”外治法治療KOA的療效機制。方法1.納入評估KOA與膝關節(jié)區(qū)域疼痛敏感相關性的臨床研究,比較KOA患者與健康人群膝關節(jié)區(qū)域壓力疼痛閾值(Pressure Pain Threshold,PPT)、冷刺激疼痛閾值(Cold Pain Threshold,CPT)及熱刺激疼痛閾值(Heat Pain Threshold,HPT)差異;(文獻研究)2.體外建立滑膜細胞炎癥模型,收集上述炎癥調節(jié)液后干預背根神經節(jié)神經元細胞,應用鈣成像技術測定神經元細胞鈣離子內流情況;(實驗一)3.體外建立滑膜細胞炎癥模型,測定滑膜細胞TRPA1基因、蛋白表達以及胞內鈣離子濃度;應用TRPAl抑制劑或TRPA1 siRNA,測定滑膜細胞炎癥刺激下白介素-6(Interleukin 6,IL-6)、基質金屬蛋白酶-1(matrix metalloproteinase,MMP-1)及MMP-3表達量;(實驗二)4.體外建立軟骨細胞凋亡模型,測定軟骨細胞TRPA1基因、蛋白表達以及胞內鈣離子濃度;應用TRPA1特異性抑制劑,測定軟骨細胞凋亡率、線粒體膜電位,以及凋亡相關蛋白表達量;(實驗三)5.在體建立大鼠KOA模型,應用TRPA1通道抑制劑,測定KOA大鼠左足承重百分比及冷刺激縮足潛伏期,觀察KOA大鼠背根神經節(jié)、滑膜及軟骨組織TRPA1表達量,測定IL-6、MMP-1、MMP-3因子變化,以及軟骨細胞凋亡情況;(實驗四)6.在體建立大鼠KOA模型,以健康大鼠為空白組,KOA大鼠為模型組和“溫經活血”外治法治療KOA大鼠為觀察組;觀察大鼠的疼痛行為學及冷痛敏,以及膝關節(jié)滑膜及軟骨組織病理改變,并檢測各組大鼠背根神經節(jié)、滑膜及軟骨TRPA1蛋白表達。(實驗五)結果1.與正常人相比,KOA患者膝關節(jié)區(qū)域PPT及CPT均顯著減低,差異具有統(tǒng)計學意義(p0.05),而膝關節(jié)區(qū)域HPT無顯著變化;(文獻研究)2.脂多糖干預滑膜細胞后,模型組炎性因子IL-1β、腫瘤壞死因子-α(Tumor Necrosis Factor,TNF-α)、IL-6含量明顯升高,應用模型組調節(jié)液干預的神經元細胞鈣熒光強度明顯增強,且TRPA1抑制劑能顯著降低模型組的熒光強度;(實驗一)3.與空白組相比,脂多糖誘導的模型組滑膜細胞TRPA1基因及蛋白表達明顯升高,胞內鈣離子濃度亦明顯增加;而應用TRPA1抑制劑及TRPA1 siRNA后,模型組滑膜細胞分泌的IL-6、MMP-1、MMP-3含量均明顯減少;(實驗二)4.與空白組相比,IL-1β干預的模型組軟骨細胞TRPA1基因及蛋白表達明顯升高,胞內鈣離子濃度亦明顯增加;而應用TRPA1抑制劑后,模型組軟骨細胞凋亡率明顯降低,線粒體膜電位明顯回升,且凋亡相關蛋白表達量顯著下調;(實驗三)5.相比于對照組,KOA模型大鼠左足承重能力及冷刺激疼痛閾值均明顯下降,滑膜及軟骨病理學評分明顯升高,且背根神經節(jié)、滑膜及軟骨TRPA1通道蛋白表達亦明顯上調;在應用TRPAl抑制劑后,模型組左足承重能力及冷刺激疼痛閾值,滑膜與軟骨病理學病變均得以改善,滑膜組織1L-6、MMP-1、MMP-3明顯下調,軟骨組織細胞凋亡率明顯減少;(實驗四)6.“溫經活血”外治法能顯著改善KOA大鼠模型組左足承重能力及冷刺激疼痛閾值,且能明顯減輕KOA大鼠滑膜炎癥及軟骨病變;此外,“溫經活血”外治法還可顯著降低KOA大鼠背根神經節(jié)、滑膜及軟骨組織TRPA1蛋白表達量。(實驗五)結論1.KOA患者膝關節(jié)區(qū)域表現(xiàn)出顯著的冷痛敏狀態(tài),這與KOA疼痛“遇寒加重、得溫則減”的臨床特征不謀而合;2.背根神經節(jié)TRPA1-冷痛敏-疼痛途徑激活是導致KOA疼痛的重要機制,可被認為是KOA“寒邪”致痛的分子機制;3.膝關節(jié)區(qū)域TRPAl通路激活通過促發(fā)滑膜細胞炎癥應答及軟骨細胞凋亡等相關機制參與KOA滑膜炎癥及軟骨損傷,可被認為是KOA“寒邪”致病的分子機制;4.“溫經活血”外治KOA的療效機制可能部分與調節(jié)背根神經節(jié)、滑膜及軟骨TRPAl蛋白表達相關,這也為采用“寒則溫之”治則治療KOA提供了現(xiàn)代理論依據(jù);5.“溫經活血”外治法治療KOA臨床療效確切,且具有不良作用少、患者依從性高等優(yōu)勢,臨床應用前景廣闊。
【圖文】：

ＫＯＡ的診斷是由臨床醫(yī)師根據(jù)影像學檢查、臨床癥狀及病理檢測共同決定。逡逑其中，影像學檢查因其客觀性及可重復性，被作為判斷病情嚴重程度的重要手段，逡逑分級標準多采用Ｋｅｌｌｇｒｅｎ和Ｌａｗｒｅｎｃｅ法［１’２】（圖１－１邋）0逡逑霉」／４級＼關節(jié)間隙明顯變窄，大量骨贊，嚴重硬化逡逑４邋／邋／￣３級＼關節(jié)間隙較明確變窄，中等骨贅逡逑／＼關節(jié)間隙可疑變窄，可有骨贊逡逑／邐＼關節(jié)間隙變窄．骨贅可疑逡逑Ｚ邋０級邋＾逡逑圖１－１膝骨關節(jié)炎Ｘ線分級標準逡逑目前臨床ＫＯＡ診斷標準多采用２０１８年中華醫(yī)學會骨科分會循證指南［３］。逡逑近１個月內反復的膝關節(jié)疼痛逡逑！逡逑ｘ片示關節(jié)間隙變窄、軟骨下逡逑骨硬化和（或）囊性變、關節(jié)逡逑活動時有骨摩擦音（感）邐ｇ胃逡逑結合臨床癥狀、體征，以逡逑Ｖ邐及影響學檢g�，符嚎h危桑懾義希ǎ桑隋澹眨傘ⅲ桑幀ⅲ皺逯腥危嚀酰╁義暇燒鋃銜ス槍亟諮族義瞎亟誄拷┫窒笤冢常胺種渝危桑皺危桑桑懾沃欣夏昊頰擼ǎ擔擔八輳╁義賢跡保蠶ス槍亟諮漬鋃媳曜煎義洗送猓�，尽管有学諗]郟矗莩⑹雜τ茫停遙逼攔闌頰呷砉遣”洹⒐親岡鏨�、骨髓病辶x媳浼盎ぱ字⒌炔±硌Ц謀洌歡蚱浞延酶�、活a咭來有圓睿形賜乒閿τ謾ｅ義希插義

本文編號：2639745