【摘要】：目的：登革熱是世界范圍內(nèi)流行的疾病,其特點(diǎn)是發(fā)病率高,病情嚴(yán)重,波及范圍廣。感染登革熱病毒后,可根據(jù)發(fā)病的嚴(yán)重程度分為登革熱(DF)、登革出血熱(DHF)和登革休克綜合征(DSS)三類,前者屬于輕癥,后兩者病情較重、致死率較高。登革熱病毒感染的范圍廣,危害大等特點(diǎn)使其成為全球面臨的重大公共衛(wèi)生問(wèn)題。近年來(lái),廣州市不斷出現(xiàn)登革熱流行,進(jìn)入21世紀(jì)以來(lái)暴發(fā)了四次較大規(guī)模的登革熱流行,2014年疫情尤為嚴(yán)重,感染病例數(shù)接近4萬(wàn),并有5例死亡,廣州已成為全國(guó)登革熱的重點(diǎn)防控區(qū)域,人們?cè)絹?lái)越關(guān)注廣州地區(qū)登革熱病毒的傳播來(lái)源以及登革熱病毒在全球的傳播情況。另外,在登革熱的治療方面目前仍然沒(méi)有十分有效的方法,由于西醫(yī)治療手段、疫苗和抗病毒藥物的缺乏,登革熱病毒感染后出現(xiàn)的危害難以得到根除。而近年來(lái)中醫(yī)藥在治療登革熱中取得了一定進(jìn)展,其獨(dú)特的治療理論發(fā)揮了明顯的治療優(yōu)勢(shì),人們對(duì)中醫(yī)藥治療登革熱給予的希望越來(lái)越高,辛涼解表化濕方是由廣州中醫(yī)藥大學(xué)劉小虹教授前期進(jìn)行抗病毒藥物研究,篩選出抗病毒療效確切的中藥結(jié)合藥性藥味和嶺南地區(qū)的氣候特點(diǎn)組合而成的中藥復(fù)方,尚未考察其對(duì)登革熱的治療效果。本課題研究目的在于探討2014年廣州地區(qū)登革熱傳播來(lái)源,并結(jié)合前期已公布的研究調(diào)查結(jié)果和系統(tǒng)發(fā)生地理學(xué)知識(shí),尋找2014年廣州地區(qū)登革熱病毒株的祖先位置,并模擬此病毒株隨時(shí)間變化在全球傳播的概況。另外,本課題還將從炎癥因子調(diào)節(jié)的角度探討辛涼解表化濕方對(duì)登革熱的治療效果。并希望通過(guò)以上研究,為我國(guó)后期登革熱的防控策略與治療提供依據(jù),進(jìn)而提高疫情防控效率、節(jié)省社會(huì)資源、保護(hù)人群健康。方法：1.在2014年廣州登革熱大流行期間于廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院和廣東省中醫(yī)醫(yī)院收集登革熱病人血清樣本,收集的樣本進(jìn)行IgM和IgG抗體檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的血清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。2.將陽(yáng)性患者血清接種到長(zhǎng)滿單層的C6/36白紋伊蚊傳代細(xì)胞,吸附1小時(shí)后棄去,培養(yǎng)5天后收集培養(yǎng)液上清,提取病毒RNA并逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,用RT-PCR和real-time SYBR green RT-PCR的方法進(jìn)行病毒的鑒定與分型。3.參考DENV-1 Hawaii株(GenBank登陸號(hào)：KM204119)的基因序列,結(jié)合Premier Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)合成DENV-1型登革熱病毒的E基因引物,并進(jìn)行PCR,跑膠,回收,測(cè)序。測(cè)序結(jié)果與GenBank中的病毒株進(jìn)行對(duì)比,用MEGA6構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹(shù),分析2014年登革熱病毒株的可能傳播來(lái)源。4.結(jié)合貝葉斯系統(tǒng)發(fā)生地理學(xué)方法,追溯2014年廣州地區(qū)登革熱的傳播源頭,遷移過(guò)程,分析其種群多樣性。5.從炎癥因子調(diào)節(jié)角度評(píng)價(jià)辛涼解表化濕方對(duì)登革熱的治療效果。結(jié)果：1.在廣州登革熱大流行期間,收集年齡為18-75歲之間,72小時(shí)內(nèi)體溫高于37.5℃患者的血清,并用ELISA試劑盒檢測(cè)IgM和IgG抗體,二者顯示陽(yáng)性的血清確定為登革熱病毒感染,期間共收集168例陽(yáng)性血清。男性70例,女性98例數(shù),男性占總數(shù)的41.7%,女性占58.3%；發(fā)病年齡在10歲以下的僅有1例,占病例總數(shù)的0.8%,10-20歲之間的5例,占總數(shù)4%,20-70歲為高發(fā)病年齡段,分別占病例總數(shù)的19.2%、12%、16.8%、28%、12%,70歲以上占7.2%；白云區(qū)、荔灣區(qū)、越秀區(qū)、海珠區(qū)患者居多,分別占患者總數(shù)的35.6%、23.7%、16.9%、11.0%,南沙區(qū)和花都區(qū)病例數(shù)為0。2.鑒定與分型結(jié)果顯示：共17株登革熱病毒可見(jiàn)電泳條帶,條帶大小在350bp左右,相對(duì)應(yīng)的Tm值為82.5℃。3.對(duì)17例陽(yáng)性樣本和各血清型登革熱病毒的E基因構(gòu)建基因進(jìn)化樹(shù)進(jìn)行基因分型,結(jié)果顯示基因Ⅰ型8株,基因Ⅴ型9株,無(wú)基因Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型�；颌裥偷膫鞑�(lái)源分為兩支,其中6株病毒(KT037100、KT037101、KT037103、KT037105、KT037106、 KT037109)與2006年、2009年、2013年、2015年廣東地區(qū)發(fā)現(xiàn)的病毒株聚類在一起,同時(shí)與2007年、2008年、2009年泰國(guó)病毒株和2013年新加坡病毒株聚類在同一分支�；颌裥偷牧�2株病毒(KT037107與KT037108)與2004年、2005年、2007年、2009年廣州病毒株,2005年、2008年、2012年、2013年、2014年的馬來(lái)西亞病毒株和2004年、2005年、2006年、2008年、2009年、2014年新加坡病毒株以及2007年、2008年、2010年、2011年、2012年、2013年印度尼西亞病毒株,2014年臺(tái)灣病毒株聚類在一起。基因Ⅴ型的9株病毒(KT037099、KT037102、KT037104、KT037110、 KT037111、KT037112、KT037113、KT037114、KT037115)與2009年、2010年、2011年、2013年廣東病毒株,2008年、2009年、2011年、2012年、2014年新加坡病毒株和2013年馬來(lái)西亞,2005年、2008年、2009年、2010年、2011年印度和2013年不丹病毒株聚類在一起。4.基因Ⅰ型MCC樹(shù)顯示的祖先節(jié)點(diǎn)位于泰國(guó),后驗(yàn)概率為0.8679,地理擴(kuò)散時(shí)空?qǐng)D和顯著路線圖顯示病毒擴(kuò)散的主要區(qū)域?yàn)闁|南亞地區(qū),群體動(dòng)力學(xué)結(jié)果顯示2007年種群多樣性最高,其后緩慢下降；基因Ⅴ型MCC樹(shù)顯示的祖先節(jié)點(diǎn)位于印度,后驗(yàn)概率為0.7429,地理擴(kuò)散時(shí)空?qǐng)D和顯著路線圖顯示病毒擴(kuò)散的主要區(qū)域?yàn)閬喼藓兔乐薜貐^(qū),種群多樣性在1970-1975迅速上升,其后多樣性居高不下。5.患者治療前血液中IL-1、IL-6、IL-10、IL-17、TNF-α、IFN-γ含量明顯升高(P0.05或PO.01),與治療前比較,治療后血液中IL-1、IL-6、IL-10、IL-17、TNF-α、 IFN-γ含量明顯降低(P0.05或P0.01)；患者治療前血液中IL-1β含量無(wú)明顯變化(P0.05),但有升高的趨勢(shì),與治療前比較,治療后血液中IL-1β含量無(wú)明顯變化(PO.05),但有降低的趨勢(shì)；結(jié)論：1.對(duì)168例患者性別進(jìn)行統(tǒng)計(jì),發(fā)現(xiàn)女性患者多余男性；兒童發(fā)病率最低,成年人發(fā)病率較高；白云區(qū)、荔灣區(qū)、越秀區(qū)、海珠區(qū)等老城區(qū)患者居多,其它區(qū)病例數(shù)較低,南沙區(qū)和花都區(qū)未統(tǒng)計(jì)到病例,可能受醫(yī)院所在地理區(qū)域的影響。2.對(duì)擴(kuò)增的168例登革熱臨床樣本進(jìn)行鑒定與分型,鑒定與分型結(jié)果顯示,共分離得到17株病毒,17株登革熱病毒均屬于血清1型登革熱病毒。3.結(jié)合大樣本量構(gòu)建的基因進(jìn)化樹(shù)分析基因Ⅰ型與基因V型的傳播來(lái)源可知,基因Ⅰ型的傳播來(lái)源分為兩支,其中6株病毒極有可能在2009年或更早由泰國(guó)傳入,并在廣州形成垂直傳播,在2013、2014年大流行的過(guò)程中廣泛的流行,并持續(xù)傳播到2015年。另外2株病毒的祖先一直在馬來(lái)半島地區(qū)或印度尼西亞流行,而廣州2014年病毒株最可能由馬來(lái)西亞傳入,此株病毒在2004年、2005年、2007年、2009年、2014年多次傳入廣州,2014年臺(tái)灣病毒株也由該地區(qū)傳入。基因V型的9株病毒的祖先一直在馬來(lái)半島和印度地區(qū)傳播,而廣州2014年病毒株最可能由新加坡傳入,此株病毒在2009年、2010年、2011年、2013年、2014年分別傳播到廣東地區(qū)。4.血清1型基因Ⅰ型登革熱病毒的祖先位于泰國(guó),目前主要在東南亞國(guó)家及周邊流行,血清1型基因V型登革熱病毒的祖先位于印度,目前在亞洲和美洲流行。5.登革熱病毒感染可以促使炎癥因子的釋放,辛涼解表方可有效調(diào)節(jié)IL-1/IL-1β, IL-6, IL-10, IL-17, TNF-α,IFN-γ等炎癥因子水平,對(duì)登革熱具有較好治療作用。
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R259

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 于德憲;登革熱監(jiān)測(cè)方法的系列研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2008年

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本文編號(hào)：2539140