本文關(guān)鍵詞：黑骨藤指紋圖譜及譜效關(guān)系探索性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：苗藥黑骨藤為蘿呮科(Asclepiadaceae)杠柳屬(Periploca)植物黑龍骨(Periploca forrestii Schltr.)的根莖或全株植物,收載于《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2003年版,具有活血、通經(jīng)、解毒、祛風(fēng)等功效,用于治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、跌打損傷、月經(jīng)不調(diào)等疾病。主要分布于我國(guó)西部、南部及西南地區(qū),如貴州、廣西、四川、青海、西藏等地。目前,黑骨藤的基礎(chǔ)研究非常薄弱,現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅有性狀、理化鑒別,缺乏專(zhuān)屬可靠的質(zhì)量控制方法,其發(fā)揮功效的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)尚不明確,質(zhì)量控制方法和技術(shù)手段落后,與其日益廣泛的應(yīng)用相脫離,嚴(yán)重制約了黑骨藤的深度開(kāi)發(fā)與利用。鑒于目前的狀況,為了更好地對(duì)黑骨藤藥材進(jìn)行品質(zhì)評(píng)價(jià),促進(jìn)黑骨藤藥材的深度開(kāi)發(fā)與利用,本課題以貴州特色苗藥材黑骨藤為研究對(duì)象,采用現(xiàn)代分析評(píng)價(jià)手段對(duì)黑骨藤藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)模式進(jìn)行探索性研究,結(jié)合現(xiàn)代色譜光譜技術(shù),以及生物學(xué)手段,開(kāi)展化學(xué)指紋圖譜、生物活性以及基于“譜-效”關(guān)系的有效物質(zhì)初步辨識(shí)研究,以期在藥效物質(zhì)辨識(shí)和質(zhì)量控制模式方面獲得新的發(fā)展。研究結(jié)果將為黑骨藤藥材的質(zhì)量控制、進(jìn)一步開(kāi)發(fā)與利用提供科學(xué)依據(jù)和技術(shù)支撐。第一部分黑骨藤指紋圖譜研究課題組前期對(duì)黑骨藤藥材抗類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎開(kāi)展了大量基礎(chǔ)性研究工作,明確了其抗類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的生物活性部位。本課題采用高效液相色譜法,對(duì)課題組前期研究發(fā)現(xiàn)的黑骨藤藥材抗類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎活性部位(80%乙醇提取物)進(jìn)行指紋圖譜測(cè)定方法建立研究,并在《中國(guó)藥典》2015年版附錄相關(guān)方法學(xué)驗(yàn)證指導(dǎo)原則下進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證。在此基礎(chǔ)上,對(duì)12批不同產(chǎn)地黑骨藤的80%乙醇提取物進(jìn)行指紋圖譜測(cè)定,使用中國(guó)藥典委員會(huì)推薦的中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)a版進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)。此外,對(duì)這12批黑骨藤80%乙醇提取物共有峰峰面積數(shù)據(jù)處理,并應(yīng)用數(shù)理統(tǒng)計(jì)軟件spss對(duì)12批黑骨藤進(jìn)行聚類(lèi)分析,分析結(jié)果表明,產(chǎn)地相近的藥材基本上劃歸為一類(lèi),這些統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明黑骨藤提取物的質(zhì)量與其生長(zhǎng)環(huán)境很可能有較大關(guān)聯(lián)性。第二部分黑骨藤藥材生物活性研究對(duì)12批不同產(chǎn)地黑骨藤的80%乙醇提取物進(jìn)行了抗類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥理實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)中采用了弗氏完全佐劑造模大鼠抗類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(aa)模型,以大鼠足踝關(guān)節(jié)原發(fā)性腫脹直徑、大鼠對(duì)側(cè)踝關(guān)節(jié)繼發(fā)性炎癥直徑、大鼠的體重、胸腺、脾、腎上腺、踝關(guān)節(jié)浸出液(腎上腺前列腺素pge2)為測(cè)定指標(biāo),觀察不同產(chǎn)地的黑骨藤對(duì)致病大鼠的影響。造模后給藥組與空白組、模型組比較均有明顯變化(p0.05),原發(fā)性關(guān)節(jié)炎前期低劑量組均呈現(xiàn)出一定的抑制腫脹作用,高劑量組中相思河、荔波、黔陶產(chǎn)地的黑骨藤提取物藥效作用最為明顯。原發(fā)性關(guān)節(jié)炎后期,低劑量組的情人谷、香紙溝、相思河抑制腫脹較為明顯,高劑量組中相思河產(chǎn)地黑骨藤有較明顯的抗腫脹效果。各大鼠繼發(fā)型關(guān)節(jié)炎腫脹不太明顯,繼發(fā)性反應(yīng)前期,低劑量組中香紙溝、荔波、花溪、黔陶產(chǎn)地的黑骨藤抗類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎較為明顯,高劑量組中相思河、荔波、花溪產(chǎn)地的黑骨藤效果明顯。在實(shí)驗(yàn)?zāi)┢陔A段,高、低劑量中除相思河、荔波、花溪產(chǎn)地的黑骨藤藥效效果明顯外,高坡產(chǎn)地的抗炎效果也明顯增強(qiáng)。低劑量組中,情人谷、香紙溝、相思河產(chǎn)地組的關(guān)節(jié)浸出液pge2含量明顯減少。高劑量組中,情人谷、香紙溝、玉林、相思河、開(kāi)陽(yáng)、桂林產(chǎn)地組的關(guān)節(jié)浸出液PGE2含量明顯減少。第三部分黑骨藤譜效關(guān)系研究在黑骨藤藥材提取物指紋圖譜和抗類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型藥理數(shù)據(jù)的研究基礎(chǔ)上,使用灰色關(guān)聯(lián)度分析方法對(duì)12批不同產(chǎn)地的黑骨藤指紋圖譜與藥效的關(guān)聯(lián)性進(jìn)行分析,研究黑骨藤的80%乙醇提取物各主要色譜峰對(duì)抗類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥效貢獻(xiàn)大小。分析結(jié)果顯示,12批黑骨藤的80%乙醇提取物有10個(gè)共有峰,按關(guān)聯(lián)度大小排序?yàn)锳2、A10、A8、A1、A4、A6、A7、A5、A3、A9,色譜峰A2、A10、A8號(hào)與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥效關(guān)聯(lián)性最大,可能是黑骨藤提取物抗類(lèi)風(fēng)類(lèi)關(guān)節(jié)炎作用的有效成分,通過(guò)黑骨藤指紋圖譜色譜峰的指認(rèn),知A2號(hào)色譜峰為綠原酸。第四部分黑骨藤總多酚提取工藝采用超聲輔助提取方法和透明質(zhì)酸酶分解透明質(zhì)酸鈉模型,以總多酚提取率與其抗過(guò)敏活性為綜合評(píng)價(jià)指標(biāo),在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步使用響應(yīng)面法優(yōu)化,對(duì)黑骨藤中總多酚提取工藝進(jìn)行了研究。最終得到黑骨藤中總多酚的最佳提取工藝參數(shù)為:乙醇溶劑濃度為57.33%,超聲時(shí)間為33.33 min,溶劑用量為16.11 mL·g~(-1)。在此提取條件下,黑骨藤中總多酚提取率為60.30±0.10 mg·g~(-1),黑骨藤總多酚抗過(guò)敏IC50為32.64±0.09μg·mL~(-1),結(jié)果提示黑骨藤總多酚具有良好的抗過(guò)敏效果。
【關(guān)鍵詞】：黑骨藤 指紋圖譜 類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 譜效關(guān)系 提取工藝
【學(xué)位授予單位】：貴州師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R29
【目錄】：

• 本文所用儀器說(shuō)明6-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 序言13-15
• 第一章 綜述15-25
• 1.1 黑骨藤性狀鑒別15
• 1.2 黑骨藤化學(xué)成分研究進(jìn)展15-17
• 1.2.1 黑骨藤中黃酮類(lèi)化合物15-16
• 1.2.2 黑骨藤中甾體類(lèi)化合物16
• 1.2.3 黑骨藤中萜類(lèi)化合物16
• 1.2.4 黑骨藤中揮發(fā)油類(lèi)成分16-17
• 1.2.5 苯丙素類(lèi)化合物17
• 1.2.6 蒽醌類(lèi)成分17
• 1.2.7 強(qiáng)心苷類(lèi)化合物17
• 1.2.8 其它的化學(xué)成分17
• 1.3 黑骨藤植物藥理作用研究進(jìn)展17-20
• 1.3.1 黑骨藤藥材的鎮(zhèn)痛與抗炎作用17-18
• 1.3.2 調(diào)節(jié)免疫作用18
• 1.3.3 強(qiáng)心作用18-19
• 1.3.4 黑骨藤的抗癌作用19
• 1.3.5 黑骨藤抗類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的活性研究19-20
• 1.3.6 黑骨藤的臨床應(yīng)用20
• 1.4 大鼠佐劑型關(guān)節(jié)炎模型20
• 1.5 膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎模型20
• 1.6 其它關(guān)節(jié)炎模型20-21
• 1.7 中藥質(zhì)量控制21-22
• 1.7.1 感官評(píng)價(jià)與鑒定模式21
• 1.7.2 化學(xué)評(píng)價(jià)與控制模式21-22
• 1.7.3 毛細(xì)管電泳法22
• 1.7.4 薄層色譜法22
• 1.8 中藥譜效關(guān)系22-23
• 1.9 本章小結(jié)23-25
• 第二章 黑骨藤抗類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎部位HPLC指紋圖譜研究25-47
• 2.1 黑骨藤抗類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎部位HPLC指紋圖譜測(cè)定條件的優(yōu)化研究25-38
• 2.1.1 儀器與試劑26
• 2.1.2 供試品溶液的制備26
• 2.1.3 色譜條件的優(yōu)化研究26-38
• 2.2 方法學(xué)考察38-40
• 2.2.1 精密度實(shí)驗(yàn)38-39
• 2.2.2 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)39
• 2.2.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)39-40
• 2.3 黑骨藤抗類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎部位HPLC指紋圖譜的建立40-43
• 2.3.1 黑骨藤藥材采集及測(cè)定40
• 2.3.2 黑骨藤藥材指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)40-42
• 2.3.3 共有峰的標(biāo)定42-43
• 2.4 黑骨藤藥材抗類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎部位指紋圖譜聚類(lèi)分析43-44
• 2.5 黑骨藤藥材抗類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎部位指紋圖譜主成分因子分析44-46
• 2.6 本章小結(jié)46-47
• 第三章 黑骨藤抗類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎藥理實(shí)驗(yàn)47-63
• 3.1 實(shí)驗(yàn)儀器47
• 3.2 實(shí)驗(yàn)試劑47
• 3.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物47
• 3.4 供試藥材的制備與給藥方法47-48
• 3.5 試驗(yàn)方法48-49
• 3.5.1 動(dòng)物分組及陽(yáng)性藥48
• 3.5.2 佐劑型關(guān)節(jié)炎大鼠造模48-49
• 3.5.3 實(shí)驗(yàn)觀察指標(biāo)49
• 3.5.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理49
• 3.6 實(shí)驗(yàn)結(jié)果49-61
• 3.6.1 黑骨藤藥物對(duì)佐劑型關(guān)節(jié)炎大鼠原發(fā)性反應(yīng)的影響49-50
• 3.6.2 黑骨藤對(duì)佐劑型關(guān)節(jié)炎大鼠繼發(fā)性反應(yīng)影響50-58
• 3.6.3 黑骨藤樣品對(duì)佐劑型關(guān)節(jié)炎大鼠臟器系數(shù)及關(guān)節(jié)浸出液中PGE2的影響58-59
• 3.6.4 X光影像檢查結(jié)果59-61
• 3.7 本章小結(jié)61-63
• 第四章 黑骨藤抗類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎譜效關(guān)系研究63-69
• 4.1 灰色關(guān)聯(lián)度分析方法應(yīng)用63-64
• 4.1.1 黑骨藤分析數(shù)列63-64
• 4.1.2 灰色關(guān)聯(lián)度系數(shù)的計(jì)算公式64
• 4.2 12批不同產(chǎn)地黑骨藤藥材譜效相關(guān)性分析64-66
• 4.2.1 大鼠佐劑型關(guān)節(jié)炎模型關(guān)節(jié)腫脹抑制率計(jì)算64-65
• 4.2.2 共有峰數(shù)據(jù)65-66
• 4.3 分析與討論66-68
• 4.3.1 原始數(shù)據(jù)的處理66-67
• 4.3.2 絕對(duì)差值的計(jì)算67-68
• 4.4 本章小結(jié)68-69
• 第五章 黑骨藤多酚物質(zhì)提取工藝研究69-80
• 5.1 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑69-70
• 5.2 實(shí)驗(yàn)方法70-73
• 5.2.1 黑骨藤多酚的提取70
• 5.2.2 黑骨藤多酚含量測(cè)定方法70-71
• 5.2.3 抗過(guò)敏活性測(cè)定71
• 5.2.4 黑骨藤總多酚單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)71-72
• 5.2.5 黑骨藤總多酚提取工藝的響應(yīng)面設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)72
• 5.2.6 驗(yàn)證結(jié)果72-73
• 5.3 統(tǒng)計(jì)處理方法73
• 5.4 結(jié)果與討論73-79
• 5.4.1 溶劑濃度（乙醇百分比）對(duì)黑骨藤總多酚提取率的影響73-74
• 5.4.2 超聲時(shí)間對(duì)黑骨藤總多酚提取率的影響74
• 5.4.3 溶劑用量對(duì)黑骨藤總多酚提取率的影響74-75
• 5.4.4 黑骨藤總多酚提取工藝參數(shù)的優(yōu)化75-77
• 5.4.5 響應(yīng)面分析77-79
• 5.4.6 驗(yàn)證試驗(yàn)79
• 5.5 本章小結(jié)79-80
• 第六章 結(jié)論與展望80-83
• 6.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)論80-81
• 6.2 展望81-83
• 參考文獻(xiàn)83-87
• 致謝87-88
• 附錄88-89

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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9 甘秀海;周欣;趙超;龔小見(jiàn);陳華國(guó);;黑骨藤化學(xué)成分的研究[J];中草藥;2009年05期

10 甘秀海;周欣;陳華國(guó);龔小見(jiàn);張建新;王道平;;貴州苗藥黑骨藤化學(xué)成分的研究[J];熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào);2009年02期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 甘秀海;黑骨藤化學(xué)成分研究[D];貴州大學(xué);2009年

2 張欣;多酚化合物抗氧化性的化學(xué)—生物學(xué)研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

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本文編號(hào)：252267