【摘要】：慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD)是一種以持續(xù)性氣流受限為特征的可預(yù)防和治療的疾病,氣流受限呈進(jìn)行性發(fā)展,其發(fā)病機(jī)制與氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、自身免疫及蛋白酶-抗蛋白酶失衡有關(guān)。理肺湯是本研究團(tuán)隊(duì)在診療COPD、哮喘等慢性炎癥性呼系統(tǒng)疾病的過程中總結(jié)出來(lái)的經(jīng)驗(yàn)效方,經(jīng)過長(zhǎng)期的臨床及實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)理肺湯能夠治療氣道炎癥性疾病,它對(duì)中醫(yī)辨證為肺脾腎三臟虛損的COPD和哮喘患者具有較好的療效。課題組前期臨床和實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)理肺湯在治療COPD和哮喘疾病方面,具有抗氧化應(yīng)激、抑制炎癥反應(yīng)和調(diào)節(jié)免疫的作用。本研究通過總結(jié)慢性阻塞性肺疾病炎癥反應(yīng)及蛋白酶-抗蛋白酶失衡的研究進(jìn)展,系統(tǒng)綜述中藥干預(yù)對(duì)慢性阻塞性肺病穩(wěn)定期患者炎性因子和蛋白酶系統(tǒng)的影響,在前期實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果及確切臨床療效認(rèn)識(shí)的基礎(chǔ)上,擬繼續(xù)沿著氣道氧化應(yīng)激-炎癥反應(yīng)-蛋白酶／抗蛋白酶失衡-肺組織損傷這一系列COPD病理演變機(jī)制縱深研究,重點(diǎn)關(guān)注炎癥反應(yīng)及蛋白酶／抗蛋白酶失衡環(huán)節(jié),開展理肺湯干預(yù)氧化應(yīng)激性COPD大鼠對(duì)血清及肺組織勻漿炎性因子和中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、a1抗胰蛋白酶影響的實(shí)驗(yàn)研究。一、目的1.通過文獻(xiàn)研究客觀了解中醫(yī)藥對(duì)COPD穩(wěn)定期患者炎性因子和蛋白酶系統(tǒng)的影響；2.分析理肺湯干預(yù)氧化應(yīng)激性COPD大鼠對(duì)炎性因子及蛋白酶-抗蛋白酶失衡的影響；3.探索中藥理肺湯調(diào)控炎性因子及蛋白酶-抗蛋白酶失衡的機(jī)制。二、方法1.通過香煙煙霧暴露聯(lián)合脂多糖滴注加臭氧暴露的方法建立SD大鼠氧化應(yīng)激COPD模型,實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為7組(正常組、模型組、地塞米松組、DMP777組、理肺湯低劑量組、理肺湯中劑量組、理肺湯高劑量組),每組10只,造模時(shí)間共計(jì)120天,用藥干預(yù)4周。2.觀察各組大鼠一般情況；采用anires2005小動(dòng)物肺功能儀觀測(cè)大鼠肺功能；通過光學(xué)顯微鏡觀察各組大鼠HE染色肺組織切片、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等病理學(xué)特征；采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)檢測(cè)血清及肺組織勻漿中GM-CSF、IL-6、IL-8、PAF、TGF-β1、ET、NE、α1-AT水平。采用免疫組織化學(xué)染色法制成肺組織病理切片,通過IPP6軟件檢測(cè)各組大鼠肺組織切片中彈性蛋白含量。3.采用多元logistic方法分析血清及肺組織中GM-CSF、IL-6、IL-8、PAF、 TGF-β、ET與NE、α1-AT、NE/α1-AT之間的關(guān)系。三、結(jié)果1.本實(shí)驗(yàn)中,煙霧刺激+氣管內(nèi)滴注LPS+臭氧暴露可誘導(dǎo)大鼠發(fā)生COPD相關(guān)病理改變,減輕大鼠體重,降低大鼠肺功能,導(dǎo)致大鼠肺組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及肺氣腫發(fā)生,并能顯著升高大鼠血清及肺泡灌洗液IL-6、IL-8、ET、PAF、GM-CSF、 TGF-β1和NE水平。2.病理解剖學(xué)方面,HE染色顯示理肺湯各劑量組能夠改善肺組織炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、肺氣腫和粘液高分泌等病理現(xiàn)象；理肺湯高、中劑量在改善肺組織炎癥、管腔狹窄、支氣管和血管平滑肌增生、上皮脫落、杯狀細(xì)胞及腺體增生,肺泡腔擴(kuò)大等方面優(yōu)于中藥低劑量組；免疫組化分析顯示,COPD大鼠存在體內(nèi)蛋白酶／抗蛋白酶系統(tǒng)失衡,肺內(nèi)蛋白分解活躍,肺泡壁破壞,肺泡融合及肺氣腫樣改變,這與肺組織HE染色所見相吻合。地塞米松組和中藥高劑量組大鼠肺內(nèi)彈性蛋白的表達(dá)較高。3.肺功能方面,理肺湯能夠改善氧化應(yīng)激性COPD大鼠的肺功能指標(biāo)(FVC、FEF25%、MMF、PEF、FMFT),改善大鼠通氣功能,理肺湯中劑量組在改善以上指標(biāo)方面優(yōu)于理肺湯高劑量、理肺湯低劑量、地塞米松和DMP777組。4.炎癥反應(yīng)方面,理肺湯能夠調(diào)節(jié)COPD大鼠血清和肺組織勻漿中炎性因子(IL-6、IL-8、ET、PAF、GM-CSF、TGF-β1)的水平,理肺湯高劑量在改善血清IL-6、IL-8、TGF-β1、GM-CSF水平上優(yōu)于其他治療組,理肺湯中劑量在改善肺組織勻漿ET、GM-CSF水平上優(yōu)于其他治療組。5.對(duì)蛋白酶-抗蛋白酶系統(tǒng)的影響方面,理肺湯能夠降低氧化應(yīng)激COPD大鼠血清及肺組織勻漿中NE和NE/α1-AT水平,同時(shí)升高a 1-AT水平；理肺湯高劑量在降低肺組織勻漿NE水平上優(yōu)于對(duì)照藥物地塞米松和DMP777,在升高肺組織勻漿α1-AT水平上與地塞米松相近；理肺湯中劑量在降低血清及肺組織勻漿中NE/α1-AT水平上優(yōu)于對(duì)照藥物地塞米松和DMP777。6.炎癥反應(yīng)與蛋白酶-抗蛋白酶失衡的關(guān)系方面,大鼠血清NE水平與血清IL-8、TGF-β1呈正相關(guān),大鼠肺組織勻漿NE水平與肺組織勻漿ET、GM-CSF、 TGF-β1呈正相關(guān),大鼠血清α1-AT水平與血清ET、GM-CSF、IL-6、PAF呈正相關(guān),大鼠肺組織勻漿α1-AT水平與肺組織勻漿ET、GM-CSF、IL-8、TGF-β1呈正相關(guān),大鼠血清NE/α1-AT比值與血清ET、TGF-β1呈正相關(guān),大鼠肺組織勻漿NE/α1-AT比值與肺組織勻漿ET、GM-CSF、IL-8、PAF、TGF-β1呈正相關(guān)。四、結(jié)論1.通過模型評(píng)價(jià),本實(shí)驗(yàn)中運(yùn)用香煙煙霧暴露聯(lián)合脂多糖滴注加臭氧暴露的方法建立SD大鼠氧化應(yīng)激COPD模型是成功的。炎癥反應(yīng)、蛋白酶-抗蛋白酶失衡是本實(shí)驗(yàn)關(guān)注的重點(diǎn)。2.理肺湯能夠改善氧化應(yīng)激性COPD大鼠的肺功能指標(biāo)(FVC、FEF25%、MMF、 PEF,FMFT),改善大鼠通氣功能障礙。3.理肺湯各劑量組均能改善COPD大鼠肺組織炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、肺氣腫、粘液高分泌現(xiàn)象；在改善以上癥狀方面理肺湯中、高劑量?jī)?yōu)于中藥低劑量組。地塞米松和理肺湯高劑量大鼠肺內(nèi)彈性蛋白的表達(dá)較高,從而證實(shí)理肺湯可以改善大鼠肺內(nèi)蛋白酶／抗蛋白酶失衡,抑制肺組織結(jié)構(gòu)蛋白溶解,延緩COPD肺組織損傷。4.理肺湯能夠通過調(diào)節(jié)COPD大鼠血清和肺組織勻漿中IL-6、IL-8、ET、PAF、 GM-CSF、TGF-β1的水平,來(lái)改善大鼠肺部及全身性炎癥反應(yīng),其中理肺湯高劑量在調(diào)節(jié)血清IL-6、IL-8、TGF-β1、GM-CSF水平方面優(yōu)于其它各組,理肺湯中劑量在改善肺組織勻漿ET、GM-CSF水平上優(yōu)于其它各組。5.理肺湯能夠調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激COPD大鼠血清及肺組織勻漿中NE、α1-AT和NE/ α1-AT水平。6.大鼠血清及肺組織勻漿NE、α1-AT水平與IL-8、TGF-β1、ET、GM-CSF、 IL-6、PAF存在正相關(guān)性,炎癥反應(yīng)與蛋白酶-抗蛋白酶失衡密切相關(guān),炎性因子可引起蛋白酶-抗蛋白酶失衡。7.理肺湯既能直接調(diào)節(jié)血清和肺組織勻漿NE、α1-AT、NE/α1-AT水平,也能通過調(diào)節(jié)肺組織勻漿和血液中IL-6、IL-8、ET、PAF、GM-CSF、TGF-的水平,改善氧化應(yīng)激COPD大鼠肺部炎癥及全身性炎癥,進(jìn)而間接調(diào)節(jié)血清和肺組織勻漿NE、α1-AT、NE/α1-AT水平,減少COPD大鼠肺組織彈性蛋白降解,延緩肺組織損傷。達(dá)到治療COPD的效果。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R259

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本文編號(hào)：2519257