【摘要】：炎性痛是病理性疼痛的一種,指在傷害性刺激清除后還持續(xù)存在疼痛的病理現(xiàn)象,是臨床上疼痛病癥中最常見的類型之一。由于本身炎性痛病程的反復(fù)遷延,治療難度比較大,從而嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量,因此其外周和中樞機(jī)制一直是近幾年研究的焦點。目前,臨床上治療炎性痛主要利用藥物對外周敏化產(chǎn)生抑制作用:首先是非甾類抗炎藥:炎癥反應(yīng)發(fā)生時,環(huán)氧化酶活性的抑制作用增強(qiáng),前列環(huán)素的生成減少,從而達(dá)到緩解炎性減輕疼痛的目的,但會引起胃腸不適以及腎功能不全等副作用;其次是阿片類制劑,本身是由廣泛分布于外周組織中的免疫細(xì)胞所生成的。在炎癥狀態(tài)下初級神經(jīng)元上的部分阿片受體數(shù)量會增加,系統(tǒng)或者局部給予一定的阿片化合物能夠減輕炎性痛,但是其本身對神經(jīng)系統(tǒng)的獎賞效應(yīng)或強(qiáng)化作用易產(chǎn)生成癮性;最后是大麻素類,在炎癥模型中,局部給予大麻酯受體激動劑能活化大麻素受體1被動激活腺苷酸環(huán)化酶從而阻斷初級傳入纖維的興奮性來達(dá)到鎮(zhèn)痛的目的,但會引起神經(jīng)毒作用。近年來針對中樞敏化治療的藥物如去甲腎上腺素再攝取抑制劑、五羥色胺和抗癲癇藥等在炎性痛的應(yīng)用上都暴露了它們療效的不充分性,因此尋求更加安全、有效、簡潔、方便的治療手段勢在必行。臨床實踐和實驗研究都證明了針灸對于炎性痛能夠起到良好的鎮(zhèn)痛作用,但是其確切機(jī)制尚不清楚。普遍認(rèn)為研究針刺治療炎性痛的重要渠道是炎性痛與受體、離子通道和神經(jīng)遞質(zhì)之間關(guān)系。同時,最新的研究證實傷害性感受神經(jīng)元內(nèi)游離的鈣離子和電壓門控鈣離子通道開合狀態(tài)在外周和中樞敏化過程中發(fā)揮了重要作用,而鈣結(jié)合蛋白通過其特殊的化學(xué)結(jié)構(gòu)-EF手型能夠特異性結(jié)合游離的鈣離子,影響胞質(zhì)內(nèi)鈣離子濃度,從而使細(xì)胞內(nèi)部信號傳導(dǎo)產(chǎn)生變化,最終達(dá)到緩解疼痛的目的。為了研究電針在上述過程中發(fā)揮的作用,本研究采用完全弗氏佐劑(Complete Freund's adjuvant,CFA)模型大鼠作為研究對象,綜合運用行為學(xué)、形態(tài)學(xué)、分子生物學(xué)以及生理學(xué)等方法深入研究電針對炎性痛模型大鼠脊神經(jīng)節(jié)和脊髓背角中鈣結(jié)合蛋白(Calcium binding protein,CaBP)的影響,分析電針通過調(diào)節(jié)鈣結(jié)合蛋白的表達(dá)來改變神經(jīng)元內(nèi)部鈣離子濃度以及胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,進(jìn)而調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)如CGRP、Glu等的釋放和神經(jīng)元的興奮性以及突觸后模N-methyl-D-aspartic acid(NMDA)受體激活數(shù)量,最終改善脊髓背角中樞敏化狀態(tài),為揭示電針鎮(zhèn)痛機(jī)制提供有效的理論依據(jù)。目的探討電針刺激足三里穴對炎性痛大鼠脊神經(jīng)節(jié)和脊髓背角鈣結(jié)合蛋白陽性神經(jīng)元的影響,進(jìn)一步揭示針刺通過調(diào)節(jié)鈣結(jié)合蛋白的表達(dá)變化而產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用的分子生物學(xué)機(jī)制,更好的服務(wù)于臨床應(yīng)用。方法取清潔級雄性SD大鼠64只,隨機(jī)分為空白組(Control)、對照組(Nacl)、模型組(CFA)及電針組(CFAEA)4組,每組16只。其中對Nacl組左側(cè)足底注射50ul的0.9%Nacl溶液,CFA組和CFAEA組在相同部位注射等量的完全弗氏佐劑造模,48h后,對四組大鼠利用異氟烷氣霧設(shè)備進(jìn)行麻醉,同等條件下對CFAEA組進(jìn)行30min電針干預(yù)一次,刺激強(qiáng)度為1mA、2mA和3mA各1Omin,頻率為20/1OOHz,交替波,干預(yù)時間在早上11點至12點之間進(jìn)行,針刺部位為CFA造模區(qū)同側(cè)肢體的足三里穴區(qū)。運用行為學(xué)檢測方法機(jī)械刺激和熱刺激分別于造模前、造模后和電針后三個階段測定各組大鼠足底的痛閾變化。即刻利用4%甲醛灌流或直接斷頭取材分別采用熒光免疫組織化學(xué)法及蛋白印跡法檢測大鼠脊神經(jīng)節(jié)(Dorsal root ganglion,DRG)和脊髓背角中相關(guān)鈣結(jié)合蛋白的表達(dá)變化,并利用統(tǒng)計學(xué)原理對相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。結(jié)果1.各組大鼠在電針干預(yù)后的行為學(xué)變化熱痛閾:Contral組與Nacl組,在實驗進(jìn)行的三個階段無論是同組內(nèi)部還是組間比較基本一致;CFA組和CFAEA組在造模前與CFA組和Nacl組相比沒有明顯變化,在造模后其數(shù)值下降(P0.05);在電針后CFAEA組相比于CFA組數(shù)值上升(P0.05)。機(jī)械痛閾:CFA組與Nacl組,在實驗進(jìn)行的三個階段無論是同組內(nèi)部還是組間比較雖有差異但無統(tǒng)計學(xué)意義。電針前,CFA組和CFAEA組與CFA組和Nacl組相比痛閾數(shù)值下降(P0.05);電針后,CFAEA組相比于CFA組數(shù)值上升(P0.05)。2.電針前后PV、CB以及NECAB1\2陽性神經(jīng)元在相關(guān)脊神經(jīng)節(jié)的表達(dá)變化PV、CB以及NECAB1\2陽性神經(jīng)元在Control組、Nacl組、CFA組和CF AEA組中的表達(dá)趨勢變化不大,Control組和Nacl組相比沒有明顯的區(qū)別,CF A組與Control組和Nacl組相比表達(dá)下調(diào)(P0.05),CFAEA組與CFA組相比表達(dá)上調(diào)(P0.05);同時,對降鈣素基因相關(guān)肽(Calcitonin gene related pepti de,CGRP)陽性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行定量統(tǒng)計發(fā)現(xiàn),CFA組相比于Control組和Nacl組有輕度的上調(diào),CFAEA組與CFA組相比表達(dá)下調(diào)。其中四組中降CGRP陽性細(xì)胞數(shù)目同組比較呈現(xiàn)較好的一致性(Control組30.1 ± 3.4個,Nacl組28.3 ±9.4 個,CFA 組 45.0 ± 6.7 個,CFAEA 組 33.5 ± 8.7 個)。對PV、CB以及NECAB1\2陽性神經(jīng)元進(jìn)行計數(shù)發(fā)現(xiàn),在DRG神經(jīng)元中約有70～80%都是與疼痛相關(guān)相關(guān)的中、小型神經(jīng)元,而且在各組中都有不同程度與經(jīng)典疼痛遞質(zhì) CGRP 的共表達(dá)(PV:1.1 ± 3.76%,CB:1.2 ± 10.5%,NECAB1:28±6.17%,NECAB2:16.2±3.94%)。3.電針前后PV、CB以及NECAB1\2陽性表達(dá)物在相關(guān)脊髓節(jié)段背角的變化在Control組、Nacl組、CFA組和CFAEA組四組的脊髓背角中PV、CB、NECAB1以及NECAB2陽性物質(zhì)的表達(dá)趨勢基本一致,并且在與疼痛相關(guān)的脊髓背角淺層都有大量的分布,四種蛋白基本不與肽能CGRP陽性纖維共表達(dá)。通過對背角同等倍率放大的等大視野內(nèi)鈣結(jié)合蛋白陽性神經(jīng)元胞體周圍的跨神經(jīng)節(jié)投射過來的CGRP陽性纖維進(jìn)行統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)四種蛋白在Control組、Nacl組、CFA組和CFAEA組中的趨勢基本呈現(xiàn)一致性(Control組49.5 ± 5.8個,Nacl組 50.4 ± 4.4 個,CFA 組 75.9 ±7.7 個,CFAEA 組 48.7 ±6.7 個),Control 組和Nacl組相比變化不明顯,CFA組與Control組和Nacl組相比表達(dá)上調(diào)(P0.05),CFAEA組與CFA組相比表達(dá)下調(diào)(P0.05)。WB結(jié)果顯示,PV、CB和NECAB1\2在脊髓背角的蛋白含量在Control組、Nacl組、CFA組和CFAEA組變化趨勢呈現(xiàn)相對的一致性,Control組和Nacl組相比無明顯變化;在造模后,CFA組和CFAEA組相比于Control組和Nacl組蛋白含量下降(P0.05);CFAEA組在電針干預(yù)后蛋白含量上升(P0.05)。結(jié)論:本研究通過行為學(xué)、組織化學(xué)以及分子生物學(xué)的方法探討了針刺對于炎性痛的鎮(zhèn)痛機(jī)制。鈣結(jié)合蛋白和肽類神經(jīng)纖維共同參與了針刺鎮(zhèn)痛過程,在這個過程中電針能夠有效地增加病理狀態(tài)下脊神經(jīng)節(jié)和脊髓背角中PV、CB和NECAB1\2陽性神經(jīng)元的數(shù)量,同時使伴隨的肽類陽性神經(jīng)纖維表達(dá)量下調(diào)。電針可能通過四種鈣結(jié)合蛋白緩沖細(xì)胞內(nèi)部游離鈣離子來實現(xiàn)對炎性痛的鎮(zhèn)痛作用,同時鈣結(jié)合蛋白與肽類神經(jīng)纖維之間在針刺鎮(zhèn)痛過程中相互關(guān)聯(lián)的內(nèi)在機(jī)制還有待進(jìn)一步的探討。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R245

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本文編號：2491630