【摘要】：目的:化療做為治療惡性腫瘤的主要手段之一,其最大的不良反應(yīng)之一就是導(dǎo)致骨髓造血及骨髓造血微環(huán)境損害,引起骨髓抑制、外周血白細(xì)胞降低,繼而機體導(dǎo)致出現(xiàn)一系列不良反應(yīng)。骨髓造血微環(huán)境對造血實質(zhì)細(xì)胞的定居、增殖、分化、發(fā)育、成熟起著重要的調(diào)節(jié)作用。造血微環(huán)境主要由基質(zhì)細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)、造血生長因子組成。骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSC)是造血微環(huán)境的重要組成成分,通過產(chǎn)生分泌細(xì)胞粘附分子、細(xì)胞生長因子和細(xì)胞外基質(zhì)成分而調(diào)節(jié)和發(fā)揮作用。本研究圍繞針灸對環(huán)磷酰胺(CTX)化療后骨髓造血微環(huán)境的修復(fù)和調(diào)節(jié)作用,以骨髓造血微環(huán)境中粘附分子及造血因子為切入點,運用流式細(xì)胞術(shù)檢測骨髓造血微環(huán)境中骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSC)細(xì)胞周期變化;運用光鏡觀察骨髓病理切片中紅細(xì)胞系、粒細(xì)胞系的形態(tài)學(xué)變化;并運用RT-q PCR和Western-Blot方法檢測骨髓造血微環(huán)境中粘附分子VCAM-1、ICAM-1和造血因子的SCF、TGF-β1的基因和蛋白表達(dá)量。以此來研究探討針灸對化療后骨髓造血微環(huán)境中粘附分子及造血因子的調(diào)控作用以及對骨髓造血微環(huán)境的修復(fù)和保護(hù)作用。同時,為針灸改善化療后骨髓造血微環(huán)境損傷,提升白細(xì)胞,提供實驗依據(jù)。方法:選用SPF級雄性昆明種(KM)小鼠120只,體重18±2g,在溫度為20℃-25℃、相對濕度為60%左右的清潔級實驗室中,自由喂養(yǎng)3天后,進(jìn)行造模。各小鼠依次稱重后,運用隨機分層分組的方法,將小鼠分為1d組、3d組、5d組,每組40只,再依次將1d組、3d組、5d組小鼠依次分為空白組、模型組、針刺組、艾灸組每組10只。具體造模方法依據(jù)由中華人民共和國衛(wèi)生部藥政局編著的《新藥(西藥)臨床前研究指導(dǎo)原則匯編》,采用環(huán)磷酰胺(CTX)腹腔注射建立小鼠骨髓抑制模型,按照100mg/kg/d劑量,連續(xù)應(yīng)用3天。依據(jù)環(huán)磷酰胺(CTX)藥物代謝動力學(xué),用藥4小時后即失去藥物活性,即模型建立成功(具體造模依據(jù):中山醫(yī)學(xué)院等編著.基礎(chǔ)藥理學(xué).人民衛(wèi)生出版社,1979:442)。空白組依據(jù)0.02ml/g的用藥量,腹腔注射生理鹽水。模型建立成功后4小時,進(jìn)行治療。空白組、模型組陪同固定,不做任何治療。針刺組先將小鼠固定于自制的鼠板上,選用特制的華佗牌美容毫針,具體規(guī)格為:0.19×10mm,針柄長20mm,依次針刺小鼠大椎、膈腧、腎俞、足三里,進(jìn)針3mm,留針6min,每日治療1次,其中1d組小鼠治療1次、3d組小鼠治療3次、5d組小鼠治療5次。艾灸組將小鼠固定于自制的鼠板上,選用特制的美容細(xì)艾條,艾條規(guī)格為:0.4×25cm,將艾條點燃后施灸小鼠大椎、膈俞、腎俞、足三里,距離小鼠皮膚高度2cm,每穴3min,每天治療1次,其中1d組小鼠治療1次、3d組小鼠治療3次、5d組小鼠治療5次。1d組、3d組、5d組治療結(jié)束后,觀察針灸對小鼠外周血白細(xì)胞的影響規(guī)律,并應(yīng)用光鏡觀察小鼠骨髓病理切片中骨髓紅細(xì)胞系、粒細(xì)胞系的形態(tài)學(xué)改變,再應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)觀察小鼠骨髓造血微環(huán)境中骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSC)細(xì)胞周期的變化,然后應(yīng)用RT-q PCR和Western-Blot方法檢測骨髓造血微環(huán)境中粘附分子VCAM-1、ICAM-1和造血因子的SCF、TGF-β1的基因和蛋白表達(dá)量。通過觀察針灸后CTX化療小鼠骨髓造血微環(huán)境中粘附分子及造血因子的影響變化,從骨髓造血微環(huán)境方面探討針灸改善化療后修復(fù)和保護(hù)骨髓造血微環(huán)境,提升外周血白細(xì)胞的作用機制。實驗整個過程嚴(yán)格依據(jù)由國家科技部頒布的《關(guān)于善待實驗動物的指導(dǎo)性意見》中相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。結(jié)果:1.“實驗一”結(jié)果顯示:與空白組比較,1d組模型組、針刺、艾灸各組小鼠外周血白細(xì)胞逐漸下降,與空白組比較,其余各組均降低,有顯著性差異(P0.05)。3d組針刺組、艾灸組小鼠外周血白細(xì)胞均開始升高,針刺組療效優(yōu)于艾灸組,具有顯著性差異(P0.05)。5d組針刺組、艾灸組小鼠外周血白細(xì)胞均升高,已達(dá)到正常值。2.“實驗二”結(jié)果顯示:應(yīng)用光鏡觀察小鼠1d組、3d組、5d組骨髓瑞氏-吉姆薩染色病理切片,結(jié)果顯示:與模型組比較,針刺組和艾灸組紅細(xì)胞系數(shù)目增加,粒細(xì)胞系數(shù)目增加,有核細(xì)胞系數(shù)目增加,脂肪細(xì)胞減少,血竇增加。隨著治療時間的延長,變化更為明顯。3.“實驗三”結(jié)果顯示:應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測1d組、3d組、5d組小鼠骨髓造血微環(huán)境中基質(zhì)細(xì)胞(BMSC)細(xì)胞周期G1期、S期、G2期細(xì)胞百分率變化,結(jié)果顯示:與空白組比較,模型組中的3d組(P0.05)與5d組(P0.01)BMSC的G1期細(xì)胞百分率明顯下降,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;針刺組中1d組(P0.05)BMSC的G1期細(xì)胞百分率明顯升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;與空白組比較,模型組中的1d組(P0.05)與3d組、5d組(P0.01)BMSC的S期細(xì)胞百分率明顯升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;與空白組比較,模型組中的1d組、3d組(P0.05)與5d組(P0.01)BMSC的G2期細(xì)胞百分率明顯升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;與模型組比較,針刺組和艾灸組可以降低CTX化療小鼠骨髓造血微環(huán)境中骨髓基質(zhì)細(xì)胞G1期細(xì)胞含量,其中3d組、5d組均有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05。與模型組比較,針刺和艾灸可以提高3d組BMSC的S期細(xì)胞含量,針刺和艾灸可以降低5d組BMSC的S期細(xì)胞含量,均具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。與模型組比較,針刺和艾灸可以提高1d組、3d組、5d組BMSC的G2期細(xì)胞含量,均具有統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。與針刺組比較,艾灸組中的5d組(P0.05)BMSC的G1期、S期細(xì)胞百分率明顯升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。與針刺組比較,艾灸組3d組(P0.05)BMSC的G2期細(xì)胞百分率明顯升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。4.“實驗四”結(jié)果顯示:運用RT-q PCR法對1d組、3d組、5d組CTX化療小鼠骨髓造血微環(huán)境中粘附分子VCAM-1、ICAM-1和造血因子SCF、TGF-β1的基因進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示:在1d組實驗中,與空白組比較,模型組VCAM-1、SCF m RNA表達(dá)下調(diào),具有顯著性差異,且有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),ICAM-1、TGF-β1 m RNA表達(dá)升高,但無顯著性差異(P0.05),與模型組比較,針刺組、艾灸組均無統(tǒng)計學(xué)意義,但針刺、艾灸后VCAM-1、SCFm RNA表達(dá)均上調(diào),ICAM-1、TGF-β1 m RNA表達(dá)均下調(diào),但無顯著性差異(P0.05)。在3d組實驗中,與空白組比較,模型組VCAM-1、SCF m RNA表達(dá)下調(diào),具有顯著性差異,且有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),ICAM-1、TGF-β1 m RNA表達(dá)升高,但無顯著性差異(P0.05)。與模型組比較,針刺組和艾灸組VCAM-1、SCFm RNA表達(dá)均上調(diào),針刺組具有顯著性差異,且有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),艾灸組無顯著性差異(P0.05);雖然針刺組和艾灸組ICAM-1、TGF-β1 m RNA表達(dá)均下調(diào),但無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。在5d組實驗中,與空白組比較,模型組VCAM-1、SCF m RNA表達(dá)下調(diào),具有顯著性差異,且有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),ICAM-1、TGF-β1 m RNA表達(dá)升高,具有顯著性差異,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與模型組比較,針刺組和艾灸組VCAM-1、SCFm RNA表達(dá)均上調(diào),無顯著性差異(P0.05);雖然針刺組和艾灸組ICAM-1、TGF-β1 m RNA表達(dá)均下調(diào),針刺組具有顯著性差異,且有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),艾灸組無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5.“實驗五”結(jié)果顯示:運用Western-Blot法對1d組、3d組、5d組CTX化療小鼠骨髓造血微環(huán)境中粘附分子VCAM-1、ICAM-1和造血因子SCF、TGF-β1的蛋白量進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示:在1d組實驗中,與空白組比較,模型組VCAM-1、SCF蛋白含量下降,且均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與模型組表較,針刺組VCAM-1、SCF蛋白升高,且VCAM-1蛋白具有顯著性差異,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);針刺組ICAM-1、TGF-β1蛋白含量下降,且TGF-β1蛋白具有顯著性差異,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);針灸1天后,與模型組比較,艾灸組VCAM-1、SCF蛋白升高,且VCAM-1蛋白具有顯著性差異,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);艾灸組ICAM-1、TGF-β1蛋白含量下降,且都具有顯著性差異,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與針刺組比較,艾灸組VCAM-1、SCF蛋白升高、ICAM-1、TGF-β1蛋白含量下降,無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。在3d組實驗中,與空白組比較,模型組VCAM-1、SCF蛋白含量下降,且VCAM-1具有顯著性差異,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);ICAM-1、TGF-β1蛋白含量升高,具有顯著性差異,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);與模型組比較,針刺組VCAM-1、SCF蛋白含量升高,且有顯著性差異,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);針刺組ICAM-1、TGF-β1蛋白含量減少,無顯著性差異。針灸治療3天后,與模型組比較,艾灸組VCAM-1、SCF蛋白含量升高,且VCAM-1蛋白具有顯著性差異,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);艾灸組ICAM-1、TGF-β1蛋白含量減少,具有顯著性差異,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與針刺組比較,艾灸組VCAM-1、SCF蛋白含量升高、ICAM-1、TGF-β1蛋白含量減少,不具有顯著性差異,無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。在5d組實驗中,與空白組比較,模型組VCAM-1、SCF蛋白含量下降,且具有顯著性差異,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);ICAM-1、TGF-β1蛋白含量升高,具有顯著性差異,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);與模型組比較,針刺組VCAM-1、SCF蛋白含量升高,且SCF蛋白具有顯著性差異,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);針刺組ICAM-1、TGF-β1蛋白含量減少,且TGF-β1蛋白具有顯著性差異,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。針灸治療5天后,與模型組比較,艾灸組VCAM-1、SCF蛋白含量升高,且具有顯著性差異,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);艾灸組ICAM-1、TGF-β1蛋白含量減少,具TGF-β1蛋白具有顯著性差異,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與針刺組比較,艾灸組VCAM-1、SCF蛋白含量升高,ICAM-1、TGF-β1蛋白含量減少。與針刺組比較,艾灸組VCAM-1、SCF蛋白含量升高、ICAM-1、TGF-β1蛋白含量減少,不具有顯著性差異,無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.針灸具有減輕環(huán)磷酰胺(CTX)化療小鼠骨髓抑制,提升外周血白細(xì)胞數(shù)量的作用,3d組開始回升,5d組達(dá)到正常值。2.針刺和艾灸可以影響骨髓形態(tài)學(xué)改變,可以促進(jìn)紅細(xì)胞系、有核細(xì)胞系的細(xì)胞數(shù)量增加,可以減少粒細(xì)胞的數(shù)量。3.烷化劑CTX破壞了骨髓基質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞周期規(guī)律,產(chǎn)生骨髓抑制,嚴(yán)重影響骨髓造血功能,針刺和艾灸可以促進(jìn)CTX化療后骨髓基質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞修復(fù),加速骨髓基質(zhì)細(xì)胞從G1期向S期的轉(zhuǎn)化,增強骨髓基質(zhì)細(xì)胞DNA的合成,延長G2期,同時利用細(xì)胞G2期阻滯的時機,盡快修復(fù)DNA,加速細(xì)胞有絲分裂,進(jìn)入增殖狀態(tài),提高骨髓基質(zhì)細(xì)胞的修復(fù)能力,保護(hù)骨髓造血微環(huán)境,促進(jìn)骨髓造血功能的重建。4.針灸可以減輕環(huán)磷酰胺(CTX)化療引起的骨髓造血微環(huán)境損傷,其作用機制之一是:針灸能夠上調(diào)骨髓造血微環(huán)境中粘附分子VCAM-1和造血正調(diào)控因子SCF基因和蛋白表達(dá)量,能夠下調(diào)骨髓造血微環(huán)境中粘附分子ICAM-1和造血負(fù)調(diào)控因子TGF-β1的基因和蛋白表達(dá)量,發(fā)揮針灸保護(hù)骨髓造血微環(huán)境的作用。5.通過骨髓造血微環(huán)境中粘附分子和造血因子的調(diào)節(jié),可能是針灸修復(fù)和保護(hù)化療后骨髓造血微環(huán)境損傷,提升白細(xì)胞,促進(jìn)機體免疫功能恢復(fù)的主要作用途徑之一。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R245

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陳家佩,劉秀英;輻射對造血微環(huán)境損傷在放療中的意義[J];應(yīng)用生理學(xué)雜志;1986年01期

2 劉淑華;;造血微環(huán)境的研究[J];國外醫(yī)學(xué)參考資料(放射醫(yī)學(xué)分冊);1977年01期

3 陳家佩;;造血微環(huán)境與造血干細(xì)胞[J];生理科學(xué)進(jìn)展;1981年03期

4 楊崇禮;;造血微環(huán)境——文獻(xiàn)綜述[J];國外醫(yī)學(xué).輸血及血液學(xué)分冊;1983年03期

5 劉佳佳;張亦婷;彭航;劉鵬霞;;造血微環(huán)境的細(xì)胞和分子機理[J];生物技術(shù)通報;2013年08期

6 Bentley SA ,吳定偉;骨髓結(jié)締組織和造血微環(huán)境[J];國外醫(yī)學(xué).輸血及血液學(xué)分冊;1982年04期

7 陳家佩,徐承熊;造血微環(huán)境的輻射損傷及其意義[J];國外醫(yī)學(xué)(放射醫(yī)學(xué)分冊);1982年03期

8 劉及,范洪學(xué);造血微環(huán)境在造血輻射損傷修復(fù)中作用的研究(摘要)[J];白求恩醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;1985年04期

9 費成明;常春康;;骨髓增生異常綜合征造血微環(huán)境若干問題研究進(jìn)展[J];中國實驗血液學(xué)雜志;2012年05期

10 顧小鋒;造血微環(huán)境中的蛋白聚糖[J];國外醫(yī)學(xué)(輸血及血液學(xué)分冊);1994年01期

相關(guān)會議論文 前6條

1 劉耀;張曦;陳幸華;;基質(zhì)細(xì)胞與造血微環(huán)境[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國血液學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

2 盧瑞南;王倩;苗登順;;甲狀旁腺素通過改變造血微環(huán)境調(diào)控造血的作用及機制研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第六次全國骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會議暨中華醫(yī)學(xué)會骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病分會成立十周年論文匯編[C];2011年

3 張曦;陳幸華;司英健;劉耀;高蕾;高力;彭賢貴;王慶余;;Co60γ輻照建立裸鼠造血微環(huán)境損傷模型的實驗研究[A];第12屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2009年

4 陳幸華;;造血微環(huán)境與白血病[A];第10屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要匯編[C];2005年

5 陳子興;;MDS的細(xì)胞起源,表觀遺傳學(xué)改變和造血微環(huán)境[A];第13屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

6 彭丹;龍盼盼;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在骨髓增生異常綜合癥中生物學(xué)特性的研究[A];第十二次全國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2014年

相關(guān)重要報紙文章 前1條

1 河北醫(yī)大附屬以嶺醫(yī)院醫(yī)學(xué)博士 李曉紅;慢性再生障礙性貧血的“三步療法”[N];健康報;2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 劉海偉;針灸對CTX化療小鼠骨髓造血微環(huán)境中黏附分子及造血因子的影響[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 梁曉雷;RUNX1對Wnt5a的轉(zhuǎn)錄調(diào)控及其在造血發(fā)育中的作用[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

，

本文編號：2489591