【摘要】：目的:本課題是研究分別針刺環(huán)跳穴和夾脊穴對坐骨神經(jīng)鉗夾損傷模型大鼠的抗細胞凋亡作用。采用分子生物學檢測方法,,觀察大鼠神經(jīng)節(jié)中Fas,Fas L及半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)家族中Caspase-8含量的表達,進而探討針灸治療大鼠坐骨神經(jīng)損傷中抗細胞凋亡的作用,比較分別針刺環(huán)跳穴和夾脊穴對坐骨神經(jīng)損傷細胞抗凋亡作用的差異。材料與方法:參考鉗夾法制作模型,制成大鼠坐骨神經(jīng)急性損傷。選用SPF級SD大鼠48只,7-9周,雌雄各半,采用隨機數(shù)字表法分成空白組、模型組、環(huán)跳組、夾脊組,每組各12只,空白組:正常喂養(yǎng),每天將動物固定在自制的塑料筒內(nèi)15分鐘,尾部和后肢暴露在外,不進行治療;模型組:在造模成功后,與空白組做相同處理;環(huán)跳組和夾脊組則選用毫針,分別針刺環(huán)跳穴和夾脊穴,并連接電針進行治療,療程與其他兩組相同。治療14天后,取出損傷坐骨神經(jīng)鉗夾處下方約2mm的坐骨神經(jīng)節(jié)和同側(cè)L4-L5節(jié)段脊髓,HE染色觀察坐骨神經(jīng)病理變化情況,用Western Blot等檢測方法觀察大鼠神經(jīng)細胞凋亡因子Fas,Fas L以及Caspase-8的表達情況,根據(jù)結(jié)果進行統(tǒng)計學分析。結(jié)果:1.坐骨神經(jīng)功能指數(shù)(SFI)造模后第8天,與空白組相比,坐骨神經(jīng)鉗夾模型大鼠各組的SFI明顯低于空白組,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05),說明大鼠SFI降低,標志造模成功。造模后第22天,與模型組相比,環(huán)跳組比夾脊組的大鼠SFI均升高(P0.05),且環(huán)跳組大鼠SFI優(yōu)于夾脊組(p0.05)。可以說針刺對大鼠SFI提高起到了促進的作用。2.HE染色大鼠受損坐骨神經(jīng)HE染色的變化情況�？瞻捉M坐骨神經(jīng)纖維排列整齊有序,髓鞘分布均勻,軸突連續(xù)性完好;模型組神經(jīng)纖維分布不紊亂,髓鞘和軸突發(fā)生裂解;與模型組相比,環(huán)跳組和夾脊組神經(jīng)纖維改變相對較輕,且環(huán)跳組好于夾脊組。3.Western Blot檢測:3.1 Western blot Fas檢測結(jié)果四組中Fas均有不同程度的表達:(1)與空白組相比,模型組的Fas蛋白表達水平上調(diào)(p0.01)環(huán)跳組和夾脊組的Fas蛋白表達明顯上調(diào)(p0.01);(2)與模型組相比,環(huán)跳組和夾脊組Fas蛋白表達下調(diào)(p0.01);(3)與夾脊組相比,環(huán)跳組Fas蛋白表達下調(diào)明顯(p0.01)。3.2 Western blot Fas L檢測結(jié)果四組中Fas L均有不同程度的表達:(1)與空白組相比,模型組的Fas L蛋白表達水平上調(diào)(p0.01)環(huán)跳組和夾脊組的Fas L蛋白表達明顯上調(diào)(p0.01);(2)與模型組相比,環(huán)跳組和夾脊組的Fas L蛋白表達下調(diào)(p0.01);(3)與夾脊組相比,環(huán)跳組的Fas L蛋白表達下調(diào)明顯(p0.01)。3.3 Western blot Caspase-8檢測結(jié)果四組中Caspase-8均有不同程度的表達:(1)與空白組相比,模型組的Caspase-8蛋白表達水平上調(diào)(p0.01)環(huán)跳組和夾脊組的Caspase-8蛋白表達明顯上調(diào)(p0.01);(2)與模型組相比,環(huán)跳組和夾脊組Caspase-8蛋白表達下調(diào)(p0.01);(3)與夾脊組相比,環(huán)跳組Caspase-8蛋白表達下調(diào)明顯(p0.05)。4.免疫組化檢測:4.1 Fas免疫組織化檢測結(jié)果四組中Fas均有不同程度的表達:(1)與空白組相比,模型組的Fas蛋白表達水平上調(diào)(p0.01),環(huán)跳組和夾脊組的Fas蛋白表達明顯上調(diào)(p0.01);(2)與模型組相比,環(huán)跳組和夾脊組Fas蛋白表達下調(diào)(p0.01);(3)與夾脊組相比,環(huán)跳組Fas蛋白表達下調(diào)明顯(p0.01)。4.2 Fas L免疫組織化檢測結(jié)果四組中Fas L均有不同程度的表達:(1)與空白組相比,模型組的Fas L蛋白表達水平上調(diào)(p0.01)環(huán)跳組和夾脊組的Fas L蛋白表達明顯上調(diào)(p0.01);(2)與模型組相比,環(huán)跳組和夾脊組的Fas L蛋白表達下調(diào)(p0.01);(3)與夾脊組相比,環(huán)跳組的Fas L蛋白表達下調(diào)明顯(p0.01)。4.3 Caspase-8免疫組織化檢測結(jié)果四組中Caspase-8均有不同程度的表達:(1)與空白組相比,模型組的Caspase-8蛋白表達水平上調(diào)(p0.01)環(huán)跳組和夾脊組的Caspase-8蛋白表達明顯上調(diào)(p0.01);(2)與模型組相比,環(huán)跳組和夾脊組Caspase-8蛋白表達下調(diào)(p0.01);(3)與夾脊組相比,環(huán)跳組Caspase-8蛋白表達下調(diào)明顯(p0.05)。結(jié)論:1.針刺不同穴位,均能夠改善急性坐骨神經(jīng)損傷后大鼠運動功能恢復(fù),且環(huán)跳組優(yōu)于夾脊組。2.針刺可調(diào)節(jié)坐骨神經(jīng)鉗夾損傷后脊髓背根神經(jīng)細胞中Fas,Fas L和Caspase-8的表達,機制可能與凋亡因子Fas,Fas L和Caspase-8表達含量降低有關(guān)。3.針刺可調(diào)節(jié)坐骨神經(jīng)鉗夾損傷后脊髓背根神經(jīng)細胞中的凋亡因子Fas,Fas L和Caspase-8含量表達,環(huán)跳組優(yōu)于夾脊組。
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【學位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R245

【參考文獻】

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本文編號：2423610