【摘要】：目的:臨床上血瘀型慢傳輸型便秘患者多見(jiàn),導(dǎo)師于永鐸教授在傳統(tǒng)中醫(yī)辯證基礎(chǔ)上,提出慢傳輸型便秘“久病血瘀,瘀毒損絡(luò)”病機(jī)假說(shuō),應(yīng)用“活血化瘀,解毒通絡(luò)”治法治之,并以此組方形成活血化瘀,解毒通絡(luò)的中藥復(fù)方化瘀通便湯在臨床上應(yīng)用。本研究觀察化瘀通便湯治療慢傳輸型便秘的臨床療效;探討慢傳輸型便秘大鼠模型制備的方法;探討化瘀通便湯對(duì)慢傳輸型便秘大鼠結(jié)腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞(ICC)表達(dá)的影響;探討化瘀通便湯對(duì)慢傳輸型便秘大鼠結(jié)腸P物質(zhì)(SP)和血管活性肽(VIP)表達(dá)的影響;探討化瘀通便湯對(duì)慢傳輸型便秘大鼠結(jié)腸水通道蛋白1(AQP1)和水通道蛋白3(AQP3)的影響,從臨床研究及實(shí)驗(yàn)研究?jī)刹糠?多種機(jī)制聯(lián)合探討化瘀通便湯治療血瘀型慢傳輸型便秘的假說(shuō)。材料與方法:論文一化瘀通便湯治療慢傳輸型便秘的臨床研究選取遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院(遼寧省肛腸醫(yī)院)符合篩選條件的慢傳輸型便秘患者63例,隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為治療組32例,對(duì)照組31例。治療組采用化瘀通便湯口服,對(duì)照組采用麻仁潤(rùn)腸丸口服,治療14天。觀察患者治療前后排便頻率、糞便性狀、使用瀉劑、腹脹和每次排便時(shí)間,記錄治療組和對(duì)照組治療前后主要癥狀積分,計(jì)算總積分;觀察治療組和對(duì)照組患者的臨床療效。論文二化瘀通便湯治療慢傳輸型便秘的實(shí)驗(yàn)研究第一部分慢傳輸型便秘大鼠模型的制備72只大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法,依照體質(zhì)量隨機(jī)分為6組,模型組60只(5組),空白對(duì)照組12只(1組)。模型組60只大鼠給予大黃粉灌胃,大黃粉初始計(jì)量為3mg/(10g·d),每天灌胃一次。每天劑量在前一天的基礎(chǔ)上增加3mg/(10g·d),至50%以上大鼠出現(xiàn)粥樣便,維持此劑量直到80%大鼠粥樣便消失。如此循環(huán)三輪后,誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性慢傳輸型便秘大鼠模型。觀察模型組每輪模型制備時(shí)間、大黃粉使用劑量;觀察模型組和空白對(duì)照組大鼠造模前后體質(zhì)量,糞便質(zhì)地,毛發(fā),活動(dòng)度;觀察兩組大鼠首次排黑便時(shí)間;測(cè)量?jī)山M大鼠24小時(shí)糞重。第二部分化瘀通便湯對(duì)慢傳輸型便秘大鼠結(jié)腸cajal間質(zhì)細(xì)胞的影響stc造模成功后,模型組60只大鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組、化瘀通便湯組(低、中、高劑量組)、西藥對(duì)照組,每組各12只。根據(jù)動(dòng)物與人體每公斤體重劑量折算系數(shù)表計(jì)算大鼠灌胃的中藥劑量,灌服各組大鼠,每日1次,連續(xù)14天。高劑量組予96g/kg/d(生藥含量,下同),中劑量組給予48g/kg/d,低劑量組給予24g/kg/d。大鼠灌胃給藥體積為0.1ml/10g。西藥對(duì)照組給予莫沙必利混懸液0.1ml/10g灌胃,給藥劑量為2.5mg/kg/d,每日1次,連續(xù)14天。模型對(duì)照組、空白對(duì)照組不予任何藥物,灌服等體積量蒸餾水,每日1次,連續(xù)14天。第15天所有大鼠禁食不禁水24小時(shí),用5%碳末、10%阿拉伯膠懸液按0.1ml/10g灌胃。30min后,將全部大鼠co2法處死,迅速剖取幽門到直腸末端腸管,測(cè)量后分為兩部分:一部分用0.9%氯化鈉溶液迅速?zèng)_凈后,置于標(biāo)本體積10倍以上的4%多聚甲醛中固定;剩余部分置于-80℃冰箱中,備測(cè)。測(cè)碳末推進(jìn)率:測(cè)量幽門到碳末前端距離(碳末推進(jìn)距離)及幽門到直腸末端腸管長(zhǎng)度(腸道總長(zhǎng)度)。碳末推進(jìn)率=碳末推進(jìn)距離(cm)/腸道總長(zhǎng)度(cm)x100%。免疫熒光法檢測(cè)慢傳輸型便秘大鼠結(jié)腸c-kit(c-kit是cajal間質(zhì)細(xì)胞的特異性標(biāo)記)表達(dá)情況。第三部分化瘀通便湯對(duì)慢傳輸型便秘大鼠結(jié)腸p物質(zhì)及血管活性肽的影響分組給藥與標(biāo)本采集方法同第二部分,rt-pcr法檢測(cè)慢傳輸型便秘大鼠結(jié)腸sp和vipmrna表達(dá)情況。第四部分化瘀通便湯對(duì)慢傳輸型便秘大鼠結(jié)腸水通道蛋白1和水通道蛋白3的影響分組給藥與標(biāo)本采集同第二部分,westernblot法檢測(cè)慢傳輸型便秘大鼠結(jié)腸aqp1和aqp3蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1.化瘀通便湯治療慢傳輸型便秘的臨床研究?jī)山M在性別、年齡、病程等方面無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05),組間條件均衡可比。治療組和對(duì)照組治療前后自身總積分比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.01),治療后兩組總積分比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.01),治療組總積分降低幅度比對(duì)照組大,提示兩組治療均有效。治療組總有效率為78.1%,對(duì)照組總有效率為71.0%,兩組臨床療效有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05),治療組療效優(yōu)于對(duì)照組。2.慢傳輸型便秘大鼠模型的制備第一輪循環(huán)共計(jì)24天,大黃劑量遞增至21mg/(10g·d);第二輪循環(huán)共計(jì)31天,大黃劑量遞增至37mg/(10g·d);第三輪循環(huán)共計(jì)32天,大黃劑量遞增至57mg/(10g·d)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行三輪循環(huán),共計(jì)87天。與空白對(duì)照組比較,模型組大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)較少(p0.05),大鼠糞便有裂痕、變短,毛發(fā)發(fā)灰、晦暗,不愛(ài)活動(dòng)。模型組大鼠首次排黑便時(shí)間延長(zhǎng)(p0.05)。模型組大鼠24小時(shí)糞便重量輕(p0.05)。3.化瘀通便湯對(duì)慢傳輸型便秘大鼠結(jié)腸cajal間質(zhì)細(xì)胞的影響與空白對(duì)照組比較,模型對(duì)照組c-kit(c-kit是cajal間質(zhì)細(xì)胞的特異性標(biāo)記)表達(dá)顯著降低(p0.01),說(shuō)明模型對(duì)照組c-kit數(shù)量顯著降低。各給藥組與模型對(duì)照組比較,c-kit不同程度升高(p0.01),其中化瘀通便湯高劑量組與西藥對(duì)照組升高程度大,說(shuō)明各治療組藥物均能不同程度上調(diào)c-kit數(shù)量,化瘀通便湯高劑量組與西藥對(duì)照組對(duì)上調(diào)c-kit數(shù)量作用明顯。與西藥對(duì)照組比較,化瘀通便湯高劑量組c-kit表達(dá)無(wú)差異(p0.05),化瘀通便湯低、中劑量組c-kit表達(dá)有差異(p0.05),說(shuō)明化瘀通便湯高劑量組與西藥對(duì)照組對(duì)c-kit數(shù)量影響相當(dāng),化瘀通便湯低、中劑量組影響c-kit數(shù)量不明顯。4.化瘀通便湯對(duì)慢傳輸型便秘大鼠結(jié)腸p物質(zhì)及血管活性肽的影響4.1p物質(zhì)表達(dá)比較與空白對(duì)照組比較,sp模型對(duì)照組目的基因與內(nèi)參基因積分光密度比值明顯升高(p0.01),說(shuō)明模型對(duì)照組sp含量顯著增高。與模型對(duì)照組比較,各治療組sp積分光密度比值不同程度降低(p0.01),其中化瘀通便湯高劑量組與西藥對(duì)照組積分比值降低程度大,說(shuō)明各治療組藥物均能不同程度降低sp含量,化瘀通便湯高劑量組與西藥對(duì)照組對(duì)降低sp含量作用明顯。與西藥對(duì)照組比較,化瘀通便湯中、高劑量組sp積分光密度比值無(wú)差異(p0.05),化瘀通便湯低劑量組sp積分光密度比值有差異(p0.05),說(shuō)明化瘀通便湯中、高劑量組與西藥對(duì)照組降低sp含量作用無(wú)差異,化瘀通便湯低劑量組降低sp含量不明顯。4.2血管活性肽表達(dá)比較與空白對(duì)照組比較,vip模型對(duì)照組目的基因與內(nèi)參基因積分光密度比值明顯降低(p0.01),說(shuō)明模型對(duì)照組vip含量顯著降低。與模型對(duì)照組比較,化瘀通便湯中、高劑量組與西藥對(duì)照組vip積分光密度比值不同程度升高(p0.01),其中化瘀通便湯高劑量組與西藥對(duì)照組積分比值升高程度大,說(shuō)明各治療組藥物(除低劑量組)均能不同程度升高vip含量,化瘀通便湯高劑量組與西藥對(duì)照組對(duì)升高vip含量作用明顯。與模型對(duì)照組比較,化瘀通便湯低劑量組p=0.051〉0.05,與前期查閱的文獻(xiàn)資料不一致,可能與低劑量的化瘀通便湯對(duì)stc大鼠vip表達(dá)影響不顯著有關(guān)。與西藥對(duì)照組比較,化瘀通便湯高劑量組vip積分光密度比值無(wú)差異(p0.05),化瘀通便湯低、中劑量組vip積分光密度比值有差異(p0.05),說(shuō)明化瘀通便湯高劑量組與西藥對(duì)照組降低vip含量作用相同,化瘀通便湯低、中劑量組降低vip含量不明顯。5.化瘀通便湯對(duì)慢傳輸型便秘大鼠結(jié)腸水通道蛋白1和水通道蛋白3的影響與空白對(duì)照組比較,模型對(duì)照組aqp1和aqp3相對(duì)灰度值表達(dá)顯著升高(p0.01),說(shuō)明模型對(duì)照組aqp1和aqp3含量顯著增高。各給藥組與模型對(duì)照組比較,aqp1和aqp3相對(duì)灰度值不同程度降低(p0.01),其中化瘀通便湯高劑量組與西藥對(duì)照組相對(duì)灰度值降低程度大,說(shuō)明各治療組藥物均能不同程度降低aqp1和aqp3含量,化瘀通便湯高劑量組與西藥對(duì)照組對(duì)降低aqp1和aqp3含量作用明顯。與西藥對(duì)照組比較,化瘀通便湯高劑量組aqp1和aqp3相對(duì)灰度值無(wú)差異(p0.05),化瘀通便湯低、中劑量組aqp1和aqp3相對(duì)灰度值有差異(p0.05),說(shuō)明化瘀通便湯高劑量組與西藥對(duì)照組降低sp含量作用無(wú)差異,化瘀通便湯低、中劑量組降低aqp1和aqp3含量不明顯。結(jié)論:1.化瘀通便湯在臨床上應(yīng)用療效顯著臨床常見(jiàn)便秘血瘀證患者,活血化瘀、解毒通絡(luò)的中藥復(fù)方化瘀通便湯在臨床上應(yīng)用,療效顯著。2.大黃粉可成功制備慢傳輸型便秘大鼠模型大黃粉制備慢傳輸型便秘大鼠模型,符合患者疾病形成過(guò)程,可以成功復(fù)制,供進(jìn)一步動(dòng)物實(shí)驗(yàn)使用。3.慢傳輸型便秘大鼠便秘的發(fā)生可能與結(jié)腸組織中icc、sp、vip、aqp1及aqp3變化有關(guān)慢傳輸型便秘大鼠便秘的發(fā)生可能與結(jié)腸組織中icc、vip表達(dá)降低有關(guān),與結(jié)腸組織中sp、aqp1及aqp3的表達(dá)升高有關(guān)。4.化瘀通便湯影響慢傳輸型便秘大鼠結(jié)腸icc、sp、vip、aqp1及aqp3的表達(dá)化瘀通便湯影響慢傳輸型便秘治療STC的機(jī)制可能與上調(diào)結(jié)腸組織中ICC、VIP,下調(diào)結(jié)腸組織中的SP、AQP1及AQP3的表達(dá)有關(guān)。5.化瘀通便湯對(duì)慢傳輸型便秘大鼠結(jié)腸ICC、SP、VIP、AQP1及AQP3間相互影響的關(guān)聯(lián)性及具體機(jī)制值得深入研究本文從臨床研究及實(shí)驗(yàn)研究?jī)刹糠?分別對(duì)化瘀通便湯治療血瘀型慢傳輸型便秘進(jìn)行研究。臨床研究部分注重臨床療效的觀察,實(shí)驗(yàn)部分多種機(jī)制聯(lián)合探討化瘀通便湯治療血瘀型慢傳輸型便秘的假說(shuō)�；鐾ū銣珜�(duì)慢傳輸型便秘大鼠結(jié)腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞、P物質(zhì)、血管活性腸肽及水通道蛋白間相互影響的關(guān)聯(lián)性及具體機(jī)制值得進(jìn)一步深入研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R256.35

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2362150