【摘要】：目的:本文就探討凋瘤丸對體外培養(yǎng)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7的誘導(dǎo)凋亡作用及凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3表達(dá)的影響的論述。希望能為今后研究中藥抗癌機(jī)制提供依據(jù)和思路,為臨床上治療乳腺癌提供一定的分子生物學(xué)依據(jù),以及為該藥在臨床的應(yīng)用提供相應(yīng)的理論基礎(chǔ)。方法:用含10%胎牛血清,1%鏈霉素、青霉素的MEM養(yǎng)液,于37℃,5%CO2孵箱中培養(yǎng)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞株;1光鏡形態(tài)學(xué)觀察:加入凋瘤丸提取液培養(yǎng)48h后,取出細(xì)胞片,常規(guī)HE染色,運用光學(xué)顯微鏡觀察并記錄;2 MTT實驗:將MCF-7細(xì)胞按1×105個/孔接種于96孔板,設(shè)置3個復(fù)孔,隨機(jī)分為:凋瘤丸懸液高、中、低濃度藥物組,陰性對照組,三苯氧胺對照組。進(jìn)行MTT試驗,計算出細(xì)胞增殖抑制率,篩選出最合適的藥物劑量;3 Hoechst33258檢測試驗:取指數(shù)生長期的細(xì)胞,運Hoechst33258染色法熒光倒置顯微鏡觀察調(diào)瘤丸藥液作用后人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7的早期凋亡情況。4 RT-PCR檢測將凋瘤丸懸液高、中、低濃度藥物組,陰性對照組(不做任何治療),三苯氧胺對照組三組分別培養(yǎng)作用48小時后,經(jīng)胰酶消化收集細(xì)胞,然后提取細(xì)胞MCF-7的RNA。檢測在不同分組中caspase-3基因表達(dá)量的變化。結(jié)果顯示:在光學(xué)顯微鏡下,凋瘤丸提取液作用過細(xì)胞體積變小、形態(tài)變圓,核被染為深藍(lán)色,胞漿呈淺紅色,核呈破碎狀,染色質(zhì)顏色凝集加深,凋亡小體形成等;Hoechst染色檢測顯示;低濃度凋瘤丸組僅見有核凹陷以及小塊缺損,但結(jié)構(gòu)完整;隨著濃度的增加,凋亡小體(呈現(xiàn)胞質(zhì)胞核的皺縮,染色質(zhì)邊集濃染,細(xì)胞核被濃染而發(fā)出亮藍(lán)色強(qiáng)烈熒光,呈現(xiàn)出“新月狀”、帶狀甚至破碎斑塊狀,又稱凋亡小體)而增多,陽性對照組與實驗組有相似的作用效果;MTT檢測法提示:陰性對照組細(xì)胞存活率極高,增殖抑制率接近0;高中低凋瘤丸藥物組以及三苯氧胺組均對MCF-7細(xì)胞的增殖均起到不同程度的抑制;而且,這種抑制程度隨著藥物濃度的遞增而遞增。最大劑量的凋瘤丸組與三苯氧胺組的效果接近。RT-PCR檢測結(jié)果顯示,與陰性對照組相比,各藥物處理后的MCF-7細(xì)胞中caspase-3均表現(xiàn)為上調(diào)表達(dá),其中凋瘤丸懸液高濃度組和三苯氧胺對照組與陰性對照組相比,具有統(tǒng)計學(xué)意義,(P0.05)。而凋瘤丸懸液中濃度組和凋瘤丸懸液低濃度組無統(tǒng)計學(xué)意義。凋瘤丸能抑制MCF-7細(xì)胞株的增殖,且呈量效的依賴性。最大濃度的結(jié)果接近三苯氧胺組無統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05),與陰性對照組有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:1.凋瘤丸對乳腺癌細(xì)胞有誘導(dǎo)凋亡作用,且在一定的范圍內(nèi),這種抑瘤作用呈量效關(guān)系。2.凋瘤丸藥物組可以影響caspase-3的表達(dá),使其上調(diào),且通過激活Caspase-3的表達(dá)來誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of Miaoyou pill on apoptosis induced by human breast cancer cell line MCF-7 in vitro and the expression of apoptosis-related protein Caspase-3. It is hoped that it can provide basis and train of thought for future study on anticancer mechanism of traditional Chinese medicine, provide certain molecular biological basis for clinical treatment of breast cancer, and provide corresponding theoretical basis for clinical application of this drug. Methods: human breast cancer MCF-7 cell line was cultured in 5%CO2 incubator at 37 鈩，

本文編號：2334505