【摘要】：目的:壯藥婦雅凈顆粒為本項(xiàng)目組前期研制的新制劑,前期研究發(fā)現(xiàn)該顆粒對(duì)大鼠盆腔炎性疾病后遺癥(sequelae of PID)治療效果好,能改善混合菌感染加機(jī)械損傷法建立的大鼠sequelae of PID癥狀,但其作用機(jī)制不明。本研究采用混合菌感染加機(jī)械損傷法建立可靠的sequelae of PID大鼠模型,給予相應(yīng)量的壯藥婦雅凈顆粒治療,通過(guò)檢測(cè)對(duì)TNF-α、TL-10、NO、NOS、SOD、MDA、ICAM-1、NF-κB、NF-κBm RNA和ICAM-1 m RNA表達(dá)的影響,探討其對(duì)NF-κB信號(hào)通路的干預(yù)機(jī)制,為壯藥婦雅凈顆粒治療盆腔炎性疾病后遺癥的臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:(1)壯藥婦雅凈顆粒的制備:按壯藥婦雅凈處方比例稱取藥材10Kg,加10倍60%乙醇回流提取2次,每次2小時(shí),300目濾布過(guò)濾,濾液濃縮至稠浸膏,測(cè)定稠浸膏含固量,加入適量可溶性淀粉攪拌均勻,使每g理論干膏含原藥材2.33g,14-16目篩制粒,80℃鼓風(fēng)干燥,14目篩整粒,按得膏率21%算,10kg應(yīng)得浸膏2.1kg,按干膏含原藥量為2.33g藥材/g,應(yīng)加輔料2.19kg。之后按每袋12g分裝,相當(dāng)于含原藥材28g/袋。(2)建模:建立以混合菌(大腸桿菌、金黃色葡萄球菌以1:1的比例溶于無(wú)菌生理鹽水配成濃度為3×109個(gè)/m L的混合細(xì)菌懸液)加機(jī)械損傷制造的大鼠盆腔炎性疾病后遺癥模型組,大鼠腹腔打開不做任何處理隨機(jī)關(guān)腹縫合作為假手術(shù)組。在建模后第1d、3d、5d、7d、14d、21d、28d取模型組、假手術(shù)組和空白對(duì)照組大鼠的全血、子宮做相應(yīng)的血常規(guī)及病理切片。通過(guò)檢測(cè)的血常規(guī)及病理切片評(píng)判的統(tǒng)計(jì)分?jǐn)?shù)來(lái)確定在造模后第幾天形成盆腔炎性疾病后遺癥癥模型。(3)取材、處理:大鼠建成盆腔炎性疾病后遺癥模型后,隨機(jī)分組:空白對(duì)照組、假手術(shù)組、模型組、花紅顆粒陽(yáng)性組、地塞米松陽(yáng)性組、壯藥婦雅凈顆粒高、中、低劑量組。建模后每隔一天給大鼠稱重,并給予15d的相應(yīng)藥物治療及純水灌胃。在第15d灌胃1h后,將大鼠麻醉,取大鼠胸腺、脾臟、子宮稱重,并計(jì)算臟器系數(shù)值;全血一部分做血液流變學(xué)及血常規(guī),另一部分靜置離心取血清待測(cè);將取出的子宮組織分為三部分:一部分用4%多聚甲醛浸泡,用于做病理切片和免疫組化;一部分取出后加一定體積的生理鹽水勻漿,取上清液備用;最后一部分迅速放入液氮中速凍,再放入-80℃凍存?zhèn)溆谩?4)采用WST-1法檢測(cè)sequelae of PID大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力,TBA法檢測(cè)血清中丙二醛(MDA)含量,硝酸還原酶法檢測(cè)血清中一氧化氮(NO)含量,用化學(xué)比色法測(cè)定一氧化氮合酶(NOS)活力。(5)采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)sequelae of PID大鼠子宮組織液中IL-10、TNF-α含量。(6)免疫組化法檢測(cè)sequelae of PID大鼠子宮組織核因子-κB(NF-κB)和細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)的表達(dá)。(7)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)sequelae of PID大鼠子宮組織核因子-κB信使RNA(NF-κBm RNA)和細(xì)胞間粘附分子-1信使RNA(ICAM-1 m RNA)表達(dá)。結(jié)果:(1)制得的壯藥婦雅凈顆粒呈棕黃色味微苦,按12g/袋分裝,批號(hào)為:20150726,存放于干燥器中,備用。(2)造模第14d模型組血液中白細(xì)胞數(shù)顯著升高(P0.01),中性粒細(xì)胞數(shù)顯著升高(P0.05),淋巴細(xì)胞顯著下降(P0.05)。病理HE染色切片觀察到,第14d宮腔擴(kuò)張、腔壁結(jié)構(gòu)改變,存在炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。建模后大鼠體重急劇下降,在第五天左右開始恢復(fù)體重,給藥14天后,模型組子宮臟體比值較大但不顯著(P0.05),而胸腺比值、脾臟比值顯著較小(P0.01);模型組血常規(guī)中白細(xì)胞數(shù)顯著升高(P0.01),中性粒細(xì)胞數(shù)顯著升高(P0.01),淋巴細(xì)胞數(shù)顯著降低(P0.01),模型組子宮解剖形態(tài)學(xué)綜合評(píng)分顯著升高(P0.05)。表明造模后第14天形成盆腔炎性疾病后遺癥癥模型。(3)與空白對(duì)照組相比,模型組大鼠血清中SOD活力顯著下降(P0.01),血清中MDA含量、NO含量、NOS活力顯著升高(P0.05,P0.01,P0.05)。與模型組相比,壯藥婦雅凈顆粒組SOD活力顯著升高(P0.01);MDA含量顯著降低(P0.05);NO含量及NOS活力顯著降低(P0.01)。(4)與空白對(duì)照組比較,模型組大鼠子宮組織液中IL-10、TNF-α的濃度顯著升高(P0.01)。與模型組比較,壯藥婦雅凈顆粒組IL-10、TNF-α的濃度顯著降低(P0.01)。(5)與空白對(duì)照比較,模型組大鼠子宮組織NF-κB、ICAM-1免疫組化表達(dá)顯著升高(P0.01)。與模型組比較,壯藥婦雅凈顆粒組大鼠子宮組織NF-κB的表達(dá)顯著降低(P0.01);壯藥婦雅凈顆粒高劑量組(P0.01)、中和低劑量組(P0.05)大鼠子宮組織ICAM-1的表達(dá)顯著降低。(6)與空白對(duì)照組比較,模型組大鼠子宮組織NF-κBm RNA和ICAM-1m RNA的表達(dá)顯著升高(P0.05);與模型組比較,壯藥婦雅凈顆粒組大鼠子宮組織NF-κBm RNA、ICAM-1m RNA的表達(dá)顯著降低(P0.05)。結(jié)論:(1)壯藥婦雅凈顆粒新制劑的制備工藝簡(jiǎn)單易行,有利于將來(lái)工業(yè)化生產(chǎn)。(2)本實(shí)驗(yàn)混合菌加機(jī)械損傷法建立盆腔炎性疾病后遺癥動(dòng)物模型形成的初始時(shí)間為造模后第14d。(3)壯藥婦雅凈顆粒對(duì)盆腔炎性疾病后遺癥大鼠NF-κB信號(hào)通路的干預(yù)機(jī)制為:上調(diào)大鼠體內(nèi)的抗炎因子SOD活力的水平,下調(diào)節(jié)炎癥因子MDA、NO、NOS,IL-10、TNF-α、NF-κB、ICAM-1、NF-κBm RNA、ICAM-1m RNA的水平,從而改善盆腔炎性疾病后遺癥的癥狀。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R29

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 逯莉;王相東;;坤復(fù)康膠囊對(duì)慢性盆腔炎大鼠VEGF、NO的影響[J];陜西中醫(yī);2015年08期

2 孫晶;陳瑩;;婦炎寧湯對(duì)慢性盆腔炎模型大鼠體內(nèi)炎癥細(xì)胞因子及粘連相關(guān)指標(biāo)的影響[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2015年07期

3 張秀軍;陳月花;張桂英;范玉香;趙俊玲;;消積顆粒對(duì)慢性盆腔炎患者免疫功能的影響[J];海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2015年05期

4 劉曉娟;賀英;王虹;;阻斷MAPK信號(hào)通路對(duì)異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞NF-κB、Bcl-2和p21表達(dá)的影響[J];廣東醫(yī)學(xué);2015年06期

5 劉明;張永萍;梁建東;鄧穎;丁麗仙;;盆炎清灌腸劑抗炎及對(duì)慢性盆腔炎大鼠血液流變性的影響[J];中藥藥理與臨床;2014年06期

6 邢人鑫;;金剛藤口服液基于免疫調(diào)節(jié)對(duì)大鼠慢性盆腔炎的治療作用研究[J];藥學(xué)與臨床研究;2014年05期

7 沈正龍;劉虹;鄭學(xué)剛;;延黃婦炎清片對(duì)慢性盆腔炎大鼠血清中SOD、MDA影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];新中醫(yī);2014年10期

8 劉明;梁建東;張永萍;鄧穎;丁麗仙;;盆炎清灌腸劑治療大鼠慢性盆腔炎的研究[J];中藥藥理與臨床;2014年03期

9 李欽;李曉麗;趙吟;張萍青;張信岳;;盆炎坤和湯對(duì)苯酚膠漿致慢性盆腔炎大鼠模型的影響[J];中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué);2014年04期

10 程靜;宋紅萍;陳冠榮;平成斌;劉忠;徐雋;李詠;;盆康舒顆粒對(duì)慢性盆腔炎的保護(hù)作用及機(jī)制探討[J];中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志;2014年11期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 曾光;熊果酸通過(guò)NF-κB信號(hào)通路抑制小鼠T細(xì)胞激活的研究[D];中南大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 李娜;白藜蘆醇改善AD大鼠記憶的Aβ1-42轉(zhuǎn)運(yùn)及NF-κB炎性信號(hào)調(diào)節(jié)機(jī)制[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：2331663