【摘要】：目的:通過重灸干預(yù)療失眠模型大鼠,檢測其腦組織中Prepro-orexin及Orexin-A的陽性細(xì)胞表達,探討重灸在治療失眠中的作用,為臨床提供依據(jù)。方法:實驗共選取40只雄性健康SD清潔級大鼠(200±10g),正常喂養(yǎng)7天,觀察顯示一切正常后,進入實驗階段:對每只大鼠稱量體重并記錄,采用完全隨機法將大鼠分為空白對照組(A組)、模型對照組(B組)、重灸治療組(C組)、針刺治療組(D組)和溫和灸治療組(E組)。在上午8點,對空白對照組(A組)大鼠不做任何處理,對模型對照組(B組)、重灸治療組(C組)、針刺治療組(D組)和溫和灸治療組(E組)四組大鼠腹腔注射對氯苯丙氨酸混懸液(PCPA),按lml/100g的劑量,連續(xù)注射2天。觀察大鼠行為睡眠節(jié)律改變情況,待模型制備成功后分別對五組大鼠稱取重量,記錄并采取以下干預(yù)手段:空白對照組(A組):不采取任何干預(yù)方法;模型對照組:不做其他干預(yù)治療;重灸治療組:剔除大鼠背俞穴位置毛發(fā),將大鼠放于特制鼠籠中,涂抹大蒜汁刺激并進行重灸干預(yù),以灸出灸斑為止;針刺治療組:剔除背俞穴位置毛發(fā),在雙側(cè)“心俞”、“脾俞”、“腎俞”位置進行針刺,連續(xù)治療6天;溫和灸治療組:剔除大鼠背俞穴位置毛發(fā),在距離背俞穴位置2cm的位置進行溫和灸處理,每次艾灸10min,共治療6天。干預(yù)治療6天后取材:在清潔冰盤上,固定大鼠顱骨,用小鑷子迅速撬開顱骨細(xì)心剝離出大鼠腦組織,放在標(biāo)記好的4%對聚甲醛中等待下一步處理。?HE染色觀察大鼠腦組織細(xì)胞及細(xì)胞核的形態(tài)。?利用免疫組化方法進行不同組間的Prepro-orexin、Orexin-A蛋白進行檢測,觀察陽性細(xì)胞光密度值。結(jié)果:1.(1)大鼠行為學(xué)改變:實驗前7天,五組動物食欲、精神、生長、發(fā)育、毛色、毛形及反應(yīng)靈敏度均正常。首次注射PCPA24~36小時候,出現(xiàn)晝夜節(jié)律紊亂,大鼠活動頻繁,部分躁動不安,通過對比觀察。和空白對照組差異明顯,顯示造模成功。(2)體重的比較:通過對各組大鼠首次造模前當(dāng)天、首次治療前當(dāng)天、取材前當(dāng)天體重的觀察比較發(fā)現(xiàn):首次造模前:各組大鼠體重平穩(wěn),各組間無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。首次治療前:模型對照組(B組)與空白對照組(A組)比較,有明顯差異(P0.05)。取材前:重灸治療組(C組)可使PCPA所致失眠模型大鼠下降的體重明顯上升,和模型對照組(B組)比較差異明顯(P0.05)。針刺治療組(D組)可使PCPA所致失眠模型大鼠下降的體重明顯上升,和模型對照組(B組)比較差異明顯(P0.05)。與重灸組體重結(jié)果相比有顯著差異(P0.05)。溫和灸治療組(E組)可使PCPA所致失眠模型大鼠下降的體重明顯上升,和模型對照組(B組)比較差異明顯(P0.05)。與重灸治療組(C組)比較差異明顯(P0.05),與針刺治療組(D組)比較無明顯差異(P0.05)。2.HE染色結(jié)果:空白對照組(A組)大鼠下丘腦神經(jīng)細(xì)胞清晰完整,排列整齊密集,神經(jīng)元細(xì)胞胞漿非常豐富。模型對照組(B組)大鼠下丘腦細(xì)胞形態(tài)改變嚴(yán)重,大量細(xì)胞出現(xiàn)空泡現(xiàn)象,排列疏松,細(xì)胞界限表現(xiàn)模糊,細(xì)胞核皺縮;重灸治療組(C組)下丘腦核團細(xì)胞大量恢復(fù),細(xì)胞排列較整齊,細(xì)胞空泡明顯減少;針刺治療組(D組)下丘腦核團排列疏松,仍有少量空泡現(xiàn)象,偶見萎縮細(xì)胞,細(xì)胞界限模糊;溫和灸治療組(E組)下丘腦核團細(xì)胞排列疏松,部分細(xì)胞變形嚴(yán)重,細(xì)胞周圍間隙大,部分水腫。3.Prepro-orexin免疫陽性細(xì)胞光密度值:prepro-orexin免疫陽性細(xì)胞主要分布在下丘腦外側(cè)區(qū)和下丘腦穹窿周圍核,染色后呈現(xiàn)棕黃色,空白對照組(A組)和模型對照組(B組)比較,有明顯差異(P0.05),說明模型制備成功。重灸治療組(C組)可使失眠模型大鼠腦組織中的Prepro-orexin含量降低,和模型對照組(B組)比較,有明顯差異(P0.05);針刺治療組(D組)可使失眠模型大鼠腦組織中的Prepro-orexin含量降低,和模型對照組(B組)比較,有明顯差異(P0.05),與重灸治療組(C組)所測光密度值比較有明顯差異(P0.05);溫和灸治療組(E組)可使失眠模型大鼠腦組織中的Prepro-orexin含量降低,和模型對照組(B組)比較,有明顯差異(P0.05);與重灸治療組(C組)所測光密度值比較有明顯差異(P0.05),與針刺治療組(D組)所測光密度值比較,有明顯差異(P0.05)。Orexin-A陽性細(xì)胞免疫組化光密度值:對各組樣本腦組織的多部位免疫組化切片實驗表明,在腦組織的Orexin-A外側(cè)下丘腦和穹窿周圍核位置可見成片的棕黃色染色,在腦室的其他區(qū)域已有少量弱陽性表達。空白對照組(A組)和模型對照組(B組)比較,有明顯差異(P0.05),說明模型制備成功。重灸治療組(C組)可使失眠模型大鼠腦組織中的Orexin-A含量降低,和模型對照組(B組)比較,有明顯差異(P0.05);針刺治療組(D組)可使失眠模型大鼠腦組織中的Orexin-A含量降低,和模型對照組(B組)比較,有明顯差異(P0.05),與重灸治療組(C組)所測光密度值比較有明顯差異(P0.05);溫和灸治療組(E組)可使失眠模型大鼠腦組織中的Orexin-A含量降低,和模型對照組(B組)比較,有明顯差異(P0.05);與重灸治療組(C組)所測光密度值比較有明顯差異(P0.05),與針刺治療組(D組)所測光密度值比較,有明顯差異(P0.05)。結(jié)論:1.PCPA法可成功復(fù)制失眠大鼠模型。2.造模成功后大鼠體重下降,重灸法對失眠大鼠的體重調(diào)節(jié)最為明顯。3.睡眠-覺醒的調(diào)節(jié)與Prepro-orexin、Orexin-A的表達相關(guān)。重灸法可使失眠模型大鼠腦組織中Prepro-orexin、Orexin-A含量增加,對失眠起到調(diào)節(jié)作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R245;R-332

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本文編號：2285191