發(fā)布時(shí)間：2018-07-08 15:44

  本文選題：腎小管上皮細(xì)胞 + 丹酚酸B��； 參考：《遵義醫(yī)學(xué)院》2016年碩士論文

【摘要】：目的:研究SAB,SAC及其分子藥對(duì)配伍對(duì)HSA誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞過(guò)程中CCL2,CCL3表達(dá)的影響。方法:將體外培養(yǎng)的HK-2細(xì)胞隨機(jī)分為6組:(1)正常組(2)人血清白蛋白組(簡(jiǎn)稱模型組)、(3)PDGF-C抗體組(簡(jiǎn)稱抗體組)(4)丹酚酸B組(5)丹酚酸C組(6)丹酚酸B,C按1:1組分配伍組(簡(jiǎn)稱:配伍組)。同步化24h后,除正常組外,其余各組均給予HSA誘導(dǎo)。抗體組、丹酚酸B組、丹酚酸C組、配伍組(統(tǒng)稱為治療組)分別加入相應(yīng)藥物共同培養(yǎng),于24h、48h、72h分組收集細(xì)胞。采用Western Blot、免疫細(xì)胞化學(xué)及免疫熒光技術(shù)檢測(cè)HK-2細(xì)胞PDGF-C、PDGFR-α、CCL2和CCL3的定位及表達(dá)水平。分別采用WST-1法、DTNB法和TBA法測(cè)定SOD、GSH及MDA的含量。結(jié)果:1.PDGF-C的檢測(cè)結(jié)果1)免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)結(jié)果:PDGF-C陽(yáng)性表達(dá)為棕黃顆粒,表達(dá)部位主要位于HK-2細(xì)胞胞質(zhì)。2)WB檢測(cè)結(jié)果:與模型組相比24h、48h及72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)治療組PDGF-C相對(duì)表達(dá)量明顯減少(P0.05)。2.PDGFR-α的檢測(cè)結(jié)果1)免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)結(jié)果:PDGFR-α陽(yáng)性表達(dá)為棕黃顆粒,表達(dá)部位主要位于HK-2細(xì)胞胞質(zhì)。2)WB檢測(cè)結(jié)果:與模型組相比24h、48h及72h治療組PDGFR-α相對(duì)表達(dá)量明顯減少(P0.05),其中,72h時(shí)間點(diǎn)抗體組及配伍組PDGFR-α相對(duì)表達(dá)量較丹酚酸B、C組顯著降低(P0.05)3.CCL2的檢測(cè)結(jié)果1)免疫熒光化學(xué)檢測(cè)結(jié)果:CCL2陽(yáng)性表達(dá)為綠色熒光,表達(dá)部位主要位于HK-2細(xì)胞胞質(zhì)。2)WB檢測(cè)結(jié)果:與模型組相比,24h、48h及72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)各治療組CCL2相對(duì)表達(dá)量均明顯減少(P0.05),其中,72h時(shí)間點(diǎn)抗體組及配伍組CCL2相對(duì)表達(dá)量較丹酚酸C組顯著降低(P0.05)。4.CCL3檢測(cè)結(jié)果1)免疫熒光化學(xué)檢測(cè)結(jié)果:CCL3陽(yáng)性表達(dá)為綠色熒光,表達(dá)部位主要位于HK-2細(xì)胞胞質(zhì)。2)WB檢測(cè)結(jié)果:與模型組相比,24h、48h和72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)各治療組CCL3蛋白相對(duì)表達(dá)明顯減少(P0.05)。5.SOD、GSH和MDA檢測(cè)結(jié)果:與模型組相比,24h、48h及72h各治療組SOD和GSH含量明顯升高(P0.05),各治療組內(nèi)比較,配伍組SOD和GSH含量均較其他治療組明顯升高(P0.05)。與模型組相比,24h、48h及72h各治療組MDA含量明顯降低(P0.05),配伍組MDA含量較其他治療組明顯降低(P0.05)。結(jié)論:丹酚酸B、C及其藥對(duì)配伍對(duì)HSA誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞PDGF-C、PDGFR-α、CCL2及CCL3的表達(dá)起抑制作用,可有效增加SOD、GSH的含量及減少M(fèi)DA的量。推測(cè)丹酚酸B、C及其藥對(duì)配伍通過(guò)干預(yù)PDGF-C/PDGFR-α信號(hào)通路,減輕炎癥反應(yīng),緩解氧化應(yīng)激反應(yīng)等途徑,從而有可能在延緩RIF的進(jìn)程中發(fā)揮作用。
[Abstract]:Aim: to study the effect of SABX SAC and its molecular drugs on the expression of CCL2 and CCL3 in renal tubular epithelial cells induced by HSA. Methods: HK-2 cells cultured in vitro were randomly divided into 6 groups: (1) normal group (2) human serum albumin group (), (3) PDGF-C antibody group (4) Salvianolic acid group B (5) Salvianolic acid group C (6) Salvianolic acid BnC divided into 1:1 group (abbreviated: compatibility group). After 24 hours of synchronization, all the groups except the normal group were induced by HSA. The antibody group, Salvianolic acid group B, Salvianolic acid group C, compatibility group (collectively referred to as treatment group) were co-cultured with corresponding drugs, and the cells were collected at 24 h, 48 h and 72 h respectively. The localization and expression of CCL2 and CCL3 in HK-2 cells were detected by Western blot, immunocytochemistry and immunofluorescence techniques. The contents of GSH and MDA were determined by WST-1 DTNB method and TBA method respectively. Results: 1) Immunocytochemistry analysis showed that the positive expression of PDGF-C was brown and yellow granules. The expression site was mainly located in the cytoplasm of HK-2 cells) WB: compared with the model group, the relative expression of PDGF-C in the treatment group at 24 h and 72 h decreased significantly (P0.05). 2. The results of the detection of PDGFR- 偽 were as follows: 1) Immunocytochemistry showed that the positive expression of PDGFR- 偽 was brown granules. The expression site of PDGFR- 偽 was mainly located in the cytoplasm of HK-2 cells. Compared with the model group, the relative expression of PDGFR- 偽 in 24 h and 72 h treatment group was significantly lower than that in the control group (P0.05), and the relative expression of PDGFR- 偽 in antibody group and compatibility group at 72 h after treatment was significantly lower than that in Salvianolic acid group (P 0.05). Low (P0.05) 3. Results of CCL2 detection. 1) the positive expression of CCL2 was green fluorescence. The expression site was mainly located in the cytoplasm of HK-2 cells. The results of WB: compared with the model group, the relative expression of CCL2 at 24 h and 72 h in each treatment group was significantly decreased (P0.05), and the relative expression of CCL2 in antibody group and compatibility group was higher than that in Dan group at 72 h after treatment (P0.05). Phenolic acid group C significantly decreased (P0.05) .4.CCL3 detection results 1) Immunofluorescence staining results showed that the positive expression of CCL3 was green fluorescence. Compared with the model group, the relative expression of CCL3 protein in each treatment group at 48h and 72h was significantly decreased (P0.05). 5. The results of GSH and MDA detection: compared with the model group, SOD was detected at 24 h, 48 h and 72 h, respectively. And GSH content increased significantly (P0.05), compared with each treatment group, The contents of SOD and GSH in compatibility group were significantly higher than those in other treatment groups (P0.05). Compared with the model group, the MDA content of 24 h and 72 h treatment group decreased significantly (P0.05), and the MDA content of compatibility group was significantly lower than that of other treatment group (P0.05). Conclusion: Salvianolic acid BfC and its drugs can inhibit the expression of PDGF-CnPDGFR- 偽 CCL2 and CCL3 in HK-2 cells induced by HSA, and can effectively increase the content of SOD- GSH and decrease the amount of MDA in HK-2 cells. It is inferred that the combination of Salvianolic acid and its admixture may play an important role in delaying the process of RIF by interfering with PDGF-C / PDGFR- 偽 signaling pathway, reducing inflammation and alleviating oxidative stress.
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R277.5

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