本文選題：甲狀腺相關(guān)眼病 + 眼球后成纖維細(xì)胞　； 參考：《河南中醫(yī)藥大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：目的:本研究在前期臨床和實驗有效基礎(chǔ)上,探討瀉火平突散、活血平突散、養(yǎng)目平突散治療TAO的機制。觀察三種中藥復(fù)方對IFN-?、IL-4刺激后RFs增殖的影響以及對IFN-?、IL-4刺激后RFs中ERK1/2、JNK、P38MAPK、ERK5、NF-κB等信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路表達的影響。方法:1.原代、傳代培養(yǎng)RFs并進行鑒定。眼球后結(jié)締組織取自于眼外傷或其他眼部手術(shù)患者,取2-8代細(xì)胞進行實驗。采用倒置相差顯微鏡察看RFs狀態(tài),并用免疫細(xì)胞化學(xué)染色法鑒定。2.IFN-γ(200U/m L)、IL-4(200U/m L)及含藥血清(20%)刺激RFs后,MTT比色法檢測中藥含藥血清對RFs活力影響。3.RFs與IFN-γ(200U/m L)、IL-4(200U/m L)以及三種含藥血清共同孵育48小時后,免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測IFN-γ、IL-4和三種含藥血清對RFs中ERK1/2、JNK、P38MAPK、ERK5、NF-κB的影響。結(jié)果:1.體外成功培養(yǎng)出正常人眼球后成纖維細(xì)胞,光鏡下觀察成活細(xì)胞形態(tài),呈放射狀,多為梭形和大多角形,約6-10天逐漸生長融合成單層鋪滿培養(yǎng)瓶底。細(xì)胞鑒定結(jié)果顯示纖維原細(xì)胞的標(biāo)記vimentin為陽性,cytokeration為陰性,提示為實驗所需純凈的球后成纖維細(xì)胞。2.在前期實驗基礎(chǔ)上,結(jié)果表明中藥復(fù)方含藥血清對RFs有抑制作用,并在中劑量(20%含藥血清)時最為明顯。3.MTT法檢測三種中藥復(fù)方對IFN-γ和IL-4刺激后RFs活力的影響,空白對照組、正常大鼠血清對照組兩組對比無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);正常大鼠血清+IFN-γ組、正常大鼠血清+IL-4組、正常大鼠血清+IFN-γ+IL-4組OD值均較空白對照組、正常大鼠血清對照組明顯升高,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);藥1、藥2、藥3干預(yù)組OD值均較正常大鼠血清+IFN-γ組、正常大鼠血清+IL-4組、正常大鼠血清+IFN-γ+IL-4組明顯降低,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);4.免疫組化法檢測ERK1/2的活性,空白對照組、正常大鼠血清對照組兩組相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);正常大鼠血清+IFN-γ組、正常大鼠血清+IL-4組、正常大鼠血清+IFN-γ+IL-4組ERK1/2的活性均較空白對照組、正常大鼠血清對照組明顯升高,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);藥1、藥2、藥3干預(yù)組ERK1/2活性均較正常大鼠血清+IFN-γ組、正常大鼠血清+IL-4組、正常大鼠血清+IFN-γ+IL-4組明顯降低,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。JNK、P38MAPK、ERK5、NF-κB結(jié)果同上。結(jié)論:IFN-γ、IL-4可刺激RFs的增殖。20%的中藥含藥血清可明顯抑制RFs的增殖。中藥含藥血清能抑制IFN-γ、IL-4刺激后RFs中ERK1/2、JNK、P38MAPK、ERK5、NF-κB的活性表達,從而阻斷信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,減少TAO的免疫損傷。
[Abstract]:Objective: to explore the mechanism of treating TAO with Xiehuaping Powder, Huoxue Pingtu Powder and Yangmu Pingtu Powder on the basis of clinical and experimental efficacy. To observe the effect of three traditional Chinese medicine prescriptions on the proliferation of RFs stimulated by IL-4 and on the expression of signal transduction pathways such as ERK1 / 2, P38MAPK5, ERK5 and NF- 魏 B in RFs stimulated by IFN-P38 MAPK5. Method 1: 1. Primary culture and identification of RFs were carried out. Retroocular connective tissue was obtained from patients with ocular trauma or other ocular surgery and 2-8 passage cells were used for the experiment. Using inverted phase contrast microscope to observe the state of RFs, Using immunocytochemical staining method to identify. 2. IFN- 緯 ~ (200UL / ml) and serum containing drug ~ (20). After stimulation of RFs, MTT colorimetry was used to detect the effect of traditional Chinese medicine containing serum on RFs activity. 3. RFs was incubated with IFN- 緯 ~ (200) / m ~ (-1) IL-4200UmL) and three kinds of drug containing serum were incubated for 48 hours, and the three kinds of drug containing serum were incubated together for 48 hours. The effects of IFN- 緯 IL-4 and three kinds of serum containing drugs on ERK1 / 2 ~ (-1 / 2) in RFs were detected by immunocytochemical staining. The result is 1: 1. The normal human Retroocular fibroblasts were successfully cultured in vitro. The living cells were radially shaped, mostly fusiform and large polygonal, and grew and fused into a monolayer filled with culture bottles for about 6-10 days. The results of cell identification showed that the labeled vimentin of fibroblasts was positive and cytokeration was negative, suggesting that the pure Retrobulbar fibroblasts. 2. On the basis of the previous experiments, the results showed that the serum containing Chinese medicine compound had inhibitory effect on RFs, and the most obvious effect of the three Chinese herbal compounds on the RFs activity after stimulation of IFN- 緯 and IL-4 was detected at the middle dose of 20% serum. The control group was the control group. There was no significant difference between normal rat serum control group and normal rat serum control group (P 0.05), normal rat serum IFN- 緯 group, normal rat serum IL-4 group and normal rat serum IFN- 緯 IL-4 group were significantly higher than that of blank control group. The OD value of the intervention group was significantly lower than that of the normal rats, the serum IL-4 group and the normal rat serum IFN- 緯 IL-4 group, which was significantly lower than that of the control group (P 0.05) and the control group (P 0.05), which was significantly lower than that of the control group. The OD value of the intervention group was significantly lower than that of the normal rat serum IFN- 緯 group and the normal rat serum IFN- 緯 IL-4 group. The activity of ERK1/2 was detected by immunohistochemical method. There was no significant difference between the two groups in the blank control group and the normal rat serum control group (P 0.05), while the normal rat serum IFN- 緯 group, the normal rat serum IL-4 group, the normal rat serum IFN- 緯 group, the normal rat serum IL-4 group. The activity of ERK1/2 in normal rat serum IFN- 緯 IL-4 group was significantly higher than that in normal rat serum control group (P 0.05), and the ERK1/2 activity in drug 1, drug 2 and drug 3 intervention group was higher than that in normal rat serum IFN- 緯 group and normal rat serum IL-4 group. The level of serum IFN- 緯 IL-4 in normal rats was significantly lower than that in control group (P 0.05). Conclusion the proliferation of RFs can be stimulated by 1: IFN- 緯 -IL-4. The proliferation of RFs can be significantly inhibited by 20% Chinese herbal serum. The serum containing traditional Chinese medicine can inhibit the activity of ERK1 / 2 in RFs stimulated by IFN- 緯 -IL-4, thus block the signal transduction pathway and reduce the immune damage of TAO.
【學(xué)位授予單位】：河南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R276.7

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本文編號：1953447