發(fā)布時間：2018-05-29 14:00

  本文選題：龍牡湯 + 特應(yīng)性皮炎��； 參考：《中國中醫(yī)科學(xué)院》2017年碩士論文

【摘要】：特應(yīng)性皮炎(atopic dermatitis,AD)是一種慢性、炎癥性皮膚疾病,常反復(fù)發(fā)作,纏綿難愈,且發(fā)病率逐年上升,已經(jīng)嚴(yán)重危害著人類的健康。目前AD的發(fā)病機(jī)制尚不明確,治療存在著一定的局限性。中醫(yī)藥治療AD有著悠久的歷史和豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)。西苑醫(yī)院黃堯洲教授從心論治AD,創(chuàng)立的龍牡湯,對于特應(yīng)性皮炎有較好的臨床療效。故本研究通過建立AD模型小鼠,給予龍牡湯灌胃干預(yù),以觀察其療效,通過免疫學(xué)指標(biāo)的變化,探求其可能的治療機(jī)制。目的1.探索AD模型小鼠的制備方法及模型評價。2.龍牡湯治療AD模型小鼠的療效觀察。3.探索龍牡湯治療AD模型小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用機(jī)制。方法一、AD模型小鼠的制備方法與模型評價1.參考國內(nèi)外文獻(xiàn)關(guān)于AD樣模型小鼠的造模方法,綜合各方面考慮分析,選用DNCB外源性刺激BALB/c小鼠。購買12只6周齡雄性BLAB/c小鼠,隨機(jī)分為模型組和對照組,每組6只。2.造模方法:第1周,模型組采用1%濃度的DNCB溶液,使用微量移液器與毛刷配合均勻涂抹在小鼠背部及右耳,每次50ul;對照組采用丙酮橄欖油混合液(1:4)外涂,涂抹方法同模型組。每日一次,連續(xù)涂抹2天,間隔4天,從第7天開始,模型組改為0.2%濃度的DNCB溶液,對照組同前。以后每隔一天,涂抹一次。造模時間共計3周,反復(fù)涂抹共計10次。3.分別于不同時點(diǎn)(第1、7、13、21天,涂抹試劑1h后),觀測兩組小鼠的臨床癥狀(搔抓次數(shù)、皮損狀況,耳廓腫脹度),于第21天外涂溶液刺激后,24h內(nèi)摘眼球取血送檢,并留取局部皮損病理送檢,綜合臨床癥狀、皮膚病理學(xué)改變以及血清學(xué)炎癥因子的變化,評價模型是否制備成功。二、龍牡湯治療AD樣模型小鼠的療效觀察1.另行購買18只6周齡BALB/c小鼠,隨機(jī)分為3組(中藥組、模型組、空白組),每組6只。將模型組和中藥組用上述造模方法,制備AD模型小鼠,空白組則給予丙酮橄欖油外涂,方法同前。3周造模結(jié)束后,中藥組給予龍牡湯灌胃,而模型組、空白組均給予0.9%NS灌胃,再經(jīng)過3周干預(yù)期,通過指標(biāo)觀測,對比三組小鼠的差異,以評價龍牡湯治療AD小鼠模型的臨床療效。2.用小鼠血清ELISA試劑盒檢測三組小鼠(中藥組、模型組、空白組)血清學(xué)指標(biāo)(IL-4、IgE、IFN-y)的表達(dá)情況,采用LSD統(tǒng)計學(xué)方法,分析龍牡湯對血清中炎癥因子指標(biāo)的影響。3.綜合AD的臨床特點(diǎn)及免疫學(xué)表現(xiàn),選取搔抓次數(shù)、皮損評分、耳廓腫脹度以等宏觀方面觀察,結(jié)合小鼠背部皮損組織病理學(xué)變化和外周血清學(xué)炎癥因子的變化,綜合評價龍牡湯的療效。三、龍牡湯治療AD模型小鼠的免疫學(xué)機(jī)制1.藥物干預(yù)結(jié)束后,取模型組和中藥組共計12只小鼠背部的皮膚,經(jīng)過SP免疫組化染色,統(tǒng)計小鼠皮損中TLR4和NF-κBp65的蛋白共表達(dá)結(jié)果,采用Spearman相關(guān)分析,分析TLR4和NF-κB p65的相關(guān)性。2.將3組小鼠的背部皮損組織中的TLR4和NF-κB p65的蛋白表達(dá)進(jìn)行統(tǒng)計,所得數(shù)據(jù)做免疫組織化學(xué)染色陽性信號累積光密度(IOD),以IOD值作為組織表達(dá)的定量標(biāo)準(zhǔn),再結(jié)合三組小鼠的血清學(xué)檢測中炎癥因子(IL-4、IgE、IFN-γ)的表達(dá),通過偏相關(guān)性分析,探討龍牡湯治療AD模型小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用機(jī)理。結(jié)果一、AD模型小鼠的制備與評價1.與對照組比較,AD模型組小鼠的背部皮損病理表現(xiàn)為:角化過度伴角化不全,棘層肥厚,表皮層、真皮層可見明顯的炎性細(xì)胞浸潤,毛細(xì)血管擴(kuò)張。2.與對照組相比,AD模型組小鼠的血清學(xué)中IgE、IL-4含量均明顯升高(P0.01),而IFN-γ的含量無明顯變化(P0.05)。3.造模結(jié)束后,與對照組比較,模型組小鼠的臨床癥狀(搔抓次數(shù)、耳廓腫脹度和背部皮損評分)均明顯升高,其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。且模型組小鼠的臨床癥狀嚴(yán)重程度隨著造模時間的延長而顯著增加(P0.01)。二、龍牡湯治療AD模型小鼠的療效觀察1.3周灌胃干預(yù)后,中藥組小鼠的搔抓次數(shù)、耳廓腫脹度以及皮損嚴(yán)重程度評分均低于模型組小鼠,差異分析有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),但較空白組小鼠仍高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2.3周干預(yù)后,與空白組相比,模型組和試驗(yàn)組小鼠血清IgE、IL-4的含量均高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。試驗(yàn)組跟模型組相比較,IgE、IL-4的含量有所降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。三組血清IFN-γ相互比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。三、探索龍牡湯治療AD模型小鼠的免疫學(xué)機(jī)制1.通過LSD統(tǒng)計學(xué)分析:TLR4、NF-κBp65在三組中表達(dá)均有差異(P0.05),其中模型組最高,中藥組其次,空白組最小。2.將AD模型小鼠皮損中TLR4和NF-κB p65蛋白共表達(dá)結(jié)果進(jìn)行Spearman相關(guān)分析,發(fā)現(xiàn)TLR4和NF-κBp65的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.618,P=0.020.05)。3.將血清學(xué)炎癥因子指標(biāo)(IL-4、IgE、IFN-γ)與TLR4/NF-κBp65通路相關(guān)性分析,結(jié)果統(tǒng)計分析:IL-4與TLR4、NF-KBp65呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)分別是:0.485、0.569(P0.05);IgE 與 TLR4、NF-κBp65 呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)分別是:0.651、0.721(P0.05);IFN-γ 與 TLR4、NF-κB p65 呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)分別是:0.55、0.634(P0.05)。結(jié)論1.通過DNCB外源性誘導(dǎo)刺激BALB/c小鼠,可成功制備AD模型小鼠。2.龍牡湯治療AD模型小鼠有效,可以從臨床癥狀和血清學(xué)以及皮膚病理學(xué)等方面改善。3.龍牡湯有可能是通過影響TLR4進(jìn)而阻斷NF-κB p65通路釋放炎癥因子,從而平衡Th1/Th2細(xì)胞亞群而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。
[Abstract]:This study was conducted to investigate the effect of LongMuyu decoction on AD model mice . Compared with the control group , the levels of IgE and IL - 4 in the model group were significantly higher than those in the control group ( P0.05 ) . The correlation coefficients were 0.485 , 0.569 ( P0.05 ) . The correlation coefficients were : 0.651 , 0.721 ( P0.05 ) ; IFN - 緯 was positively related to the expression of TLCB , 0.634 ( P0.05 ) . Conclusion 1 . Long - oyster soup can be used to treat AD model mice .
【學(xué)位授予單位】：中國中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R275

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1951131