本文選題：完全弗氏佐劑(CFA) + 條件性位置回避(CPA)�。� 參考：《山西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:根據(jù)國(guó)際疼痛研究會(huì)(IASP)對(duì)疼痛定義,疼痛可分為兩種成分,即痛的感覺(jué)分辨(sensory-discriminative)與痛的情緒反應(yīng)(emotional-affective dimensions)。痛的感覺(jué)分辨感受痛刺激的性質(zhì)、強(qiáng)度和位置等屬性;痛的情緒反應(yīng)包括焦慮、厭惡、恐懼等不良情緒。大量研究表明,疼痛的感覺(jué)成分和情緒反應(yīng)是由不同的中樞機(jī)制作用產(chǎn)生,并且由不同的神經(jīng)傳導(dǎo)通路介導(dǎo)。人類和動(dòng)物的行為學(xué)、電生理學(xué)和腦成像等相關(guān)治療、實(shí)驗(yàn)結(jié)果已提供證據(jù),位于大腦額葉內(nèi)側(cè)的前扣帶皮層(anterior cingulate cortex,ACC),尤其是其吻側(cè)部(rostral ACC,r ACC)參與疼痛誘發(fā)的厭惡情緒的形成,在不良情緒引起的行為表現(xiàn)等方面起著重要作用。切除大鼠雙側(cè)的r ACC可以避免痛情緒引起的條件性位置回避(conditioned place avoidance,CPA)。一些臨床和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的研究也表明,電針刺激可以緩解人和動(dòng)物的痛情緒反應(yīng);而已有的資料和我們過(guò)去的工作顯示,傳統(tǒng)的中醫(yī)針灸或現(xiàn)代的電針治療可激活體內(nèi)的阿片受體緩解疼痛。阿片受體主要有3型:μ-阿片受體、δ-阿片受體、κ-阿片受體。我們之前的研究已經(jīng)證實(shí)電針可通過(guò)激活μ-受體緩解大鼠的痛情緒,但是否能通過(guò)激活δ-阿片受體緩解痛情緒并不清楚,本研究就此進(jìn)行深入探討。本實(shí)驗(yàn)使用的動(dòng)物模型為大鼠腳掌注射完全弗氏佐劑(complete Freund’s adjuvant,CFA)誘導(dǎo)的條件性位置回避(C-CPA)模型,結(jié)合在r ACC腦區(qū)內(nèi)分別給予不同濃度δ-阿片受體拮抗劑Naltrindole,測(cè)量C-CPA行為反應(yīng)和熱痛行為反應(yīng)(熱縮足反射潛伏期,PWL),探討此實(shí)驗(yàn)中拮抗r ACC內(nèi)δ-阿片受體是否可以反轉(zhuǎn)電針緩解痛情緒的作用。方法:1.建立由CFA誘導(dǎo)的慢性持續(xù)性炎性疼痛動(dòng)物模型取250-270g成年雄性SD(Sprague Dawley)大鼠,左側(cè)足底皮下注射0.08ml完全弗氏佐劑(CFA),建立炎癥性疼痛模型。對(duì)照組為左側(cè)足底皮下注射0.08ml生理鹽水(NS)組和足底未注射組。2.建立由CFA誘導(dǎo)的條件性位置回避(C-CPA)模型將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為3組:(1)足底未注射對(duì)照組;(2)足底注射生理鹽水(NS)對(duì)照組;(3)足底注射CFA(0.08ml)實(shí)驗(yàn)組。n=6~8只/組。將由注射CFA引起的慢性炎癥性疼痛作為特定的條件,并與可分辨的環(huán)境耦合,建立條件性位置回避(C-CPA)模型,比較大鼠腳掌注射CFA前后在“疼痛環(huán)境”中停留的時(shí)間,并計(jì)算回避分?jǐn)?shù)(CPA Score),判斷大鼠是否產(chǎn)生CPA反應(yīng)。3.電針刺激取成年雄性SD大鼠,隨機(jī)分為真電針組(electroacupuncture,EA)和假電針組(sham EA)。在腳掌注射NS/CFA后,將針灸針插入大鼠雙側(cè)環(huán)跳穴(GB30),用膠帶固定于大腿。通過(guò)導(dǎo)線將針灸針與電針儀相連,通電后開(kāi)始電針刺激。4.檢測(cè)熱縮足反射潛伏期(Paw Withdrawal Latency,PWL)在CPA的第一天和第三天分別檢測(cè)各組大鼠的PWL,觀察CFA對(duì)大鼠的熱痛行為反應(yīng)的影響,以及r ACC注射不同劑量naltrindole并給予電針刺激后大鼠PWL數(shù)值的變化。5.通過(guò)western-blot檢測(cè)δ-阿片受體和NR1/NR2A/NR2B亞基的磷酸化表達(dá)水平在行為檢測(cè)實(shí)驗(yàn)完成后,取大鼠r ACC區(qū)組織樣本,通過(guò)western-blot技術(shù)檢測(cè)各組大鼠r ACC區(qū)內(nèi)δ-阿片受體和NR1/NR2A/NR2B亞基的磷酸化表達(dá)水平。6.實(shí)驗(yàn)分組根據(jù)左側(cè)足底皮下注射CFA/NS、r ACC區(qū)注射naltrindole/NS和雙側(cè)環(huán)跳穴真假電針刺激將大鼠分為以下8組。(1)足底注射NS,r ACC注射NS,EA;(2)足底注射NS,r ACC注射NS,sham EA;(3)足底注射CFA,r ACC注射NS,EA;(4)足底注射CFA,r ACC注射NS,sham EA;(5)足底注射NS,r ACC分別注射1/2.5/5/10μg/μl naltrindole,EA;(6)足底注射NS,r ACC分別注射1/2.5/5/10μg/μl naltrindole,sham EA;(7)足底注射CFA,r ACC分別注射1/2.5/5/10μg/μl naltrindole,EA;(8)足底注射CFA,r ACC分別注射1/2.5/5/10μg/μl naltrindole,sham EA。結(jié)果:1.足底注射CFA,大鼠的熱痛行為發(fā)生改變大鼠左側(cè)足底注射CFA組、注射NS組和未注射對(duì)照組比較,注射CFA組大鼠PWL在處理后第三天與第一天基礎(chǔ)值相比明顯縮短(post 7.23±1.65s VS pre12.54±0.72s,P0.05,n=6),注射NS組(post 15.62±2.99s VS pre 14.35±1.05s,P0.05,n=6)和未注射組(post 13.66±2.22s VS pre 14.27±1.05s,P0.05,n=6)的PWL與各自基礎(chǔ)值相比,沒(méi)有明顯的變化。說(shuō)明后腳掌注射CFA可引起大鼠炎癥性疼痛。2.足底注射CFA誘導(dǎo)大鼠產(chǎn)生CPA反應(yīng)足底未注射對(duì)照組(post 275.18±34.35s VS pre 324.83±34.35s,P0.05,n=6)和足底注射生理鹽水組(post 287.32±41.35s VS pre 320.42±65.55s,P0.05,n=6),大鼠第三天在“疼痛環(huán)境”匹配室的停留時(shí)間和第一天相比都沒(méi)有顯著性差異,兩組回避分?jǐn)?shù)間沒(méi)有差別(P0.05)。足底注射CFA組(post 193.83±69.4s VS pre315.3±34.6s,P0.05,n=6),大鼠第三天在“疼痛環(huán)境”匹配室停留的時(shí)間明顯小于第一天,因而對(duì)環(huán)境產(chǎn)生厭惡反應(yīng)。說(shuō)明大鼠后腳掌注射CFA可引起CPA反應(yīng),即產(chǎn)生痛情緒。3.電針刺激可緩解CFA誘導(dǎo)的大鼠條件性位置回避(CPA)反應(yīng)大鼠左側(cè)足底注射CFA后,在雙側(cè)環(huán)跳穴分別給予真電針刺激(EA)或者假電針刺激(sham EA)。大鼠足底注射CFA,假電針刺激后,在“疼痛環(huán)境”停留的時(shí)間第三天明顯少于第一天,有顯著性差異,(post 174.67±31.03s VS pre323.03±84.94s,P0.05,n=6);真電針刺激后,大鼠在“疼痛環(huán)境”中停留時(shí)間第三天與第一天相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,(post 370.40±80.34s VS pre 400.57±81.03s,P0.05,n=6)。真電針組(EA)回避分?jǐn)?shù)明顯小于假電針組(sham EA),兩組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(EA組-77.23±35.58s VS sham EA組-148.4±31.15s,P0.05,n=6)。說(shuō)明電針刺激可以緩解CFA誘導(dǎo)的CPA反應(yīng)。大鼠左側(cè)足底注射NS后,在雙側(cè)環(huán)跳穴分別給予真電針刺激(EA)或者假電針刺激(sham EA)。兩組大鼠在“疼痛環(huán)境”中停留時(shí)間第三天和第一天相比均沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,假電針組(post 306.63±30.25s VS pre 309.8±35.62s,P0.05,n=6);真電針組(post 278.34±41.07s VS pre 315.16±51.77s,P0.05,n=6)。兩組回避分?jǐn)?shù)相比也沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(NS+EA組-30.67±6.36s VS NS+sham EA組12.33±1.86s,P0.05,n=6)。說(shuō)明電針刺激不會(huì)引起正常大鼠的厭惡或者獎(jiǎng)賞反應(yīng)。大鼠左側(cè)足底注射CFA后,在雙側(cè)環(huán)跳穴分別給予真電針刺激(EA)或者假電針刺激(sham EA),第三天測(cè)量大鼠的熱痛行為反應(yīng),PWL之間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,真電針組(post 8.97±1.09s VS pre 7.34±0.52s,P0.05,n=6);假電針組(post8.53±0.86s VS pre 7.63±0.26s,P0.05,n=6)。電針刺激雙側(cè)環(huán)跳穴不影響由CFA引起的大鼠慢性炎癥性熱痛行為。4.r ACC內(nèi)注射δ-阿片受體拮抗劑naltrindole反轉(zhuǎn)了電針刺激緩解痛情緒的作用足底注射CFA,r ACC內(nèi)注射δ-阿片受體拮抗劑naltrindole或NS,不進(jìn)行電針刺激。大鼠第三天在“疼痛環(huán)境”中停留時(shí)間與第一天相比:naltrindole組(post241.5±26.32s VS pre 373.68±35.65s,P0.05,n=7);NS組(post 183.63±22.60s VS pre 318.67±37.61s,P0.05,n=6);naltrindole組和NS組回避分?jǐn)?shù)沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(-92.76±12.63s VS-70.42±11.80s,P0.05,n=6)。r ACC內(nèi)注射naltrindole本身不會(huì)影響大鼠的CPA反應(yīng)。足底注射CFA,r ACC內(nèi)注射δ-阿片受體拮抗劑naltrindole或NS,進(jìn)行電針刺激。大鼠第三天在“疼痛環(huán)境”中停留時(shí)間與第一天相比:naltrindole組(post287.50±67.03s VS pre 388.37±63.10s,P0.05,n=11);NS組(post 372.75±71.35s VS pre 392.76±66.7s,P0.05,n=11);naltrindole組回避分?jǐn)?shù)明顯大于NS組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(-100.90±s32.45 VS-20.01±26.53s,P0.05,n=11)。r ACC內(nèi)注射naltrindole反轉(zhuǎn)了電針刺激緩解痛情緒的作用。大鼠左側(cè)足底注射CFA,r ACC內(nèi)注射不同濃度1/2.5/5/10μg/μlδ-阿片受體拮抗劑naltrindole,進(jìn)行電針刺激,不同濃度naltrindole反轉(zhuǎn)電針刺激緩解痛情緒的作用效果不同。大鼠在“疼痛環(huán)境”中停留的時(shí)間第三天與第一天相比:1μg/μlnaltrindole組沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(post 304.6±40.3s VS pre 293.0±25.28s,P0.05,n=11);2.5μg/μl naltrindole組沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(post 284.3±62.62s VS pre375.3±28.0s,P0.05,n=8);5μg/μl naltrindole組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(post 287.5±35.28s VS pre 388.4±31.08s,P0.05,n=11);10μg/μl naltrindole組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(post252.0±29.46s VS pre 319.1±12.24s,P0.05,n=11)。在r ACC內(nèi)注射1/2.5μg/μl naltrindole并未觀察到反轉(zhuǎn)電針緩解痛情緒的作用,在r ACC內(nèi)注射5/10μg/μl naltrindole則反轉(zhuǎn)了電針緩解痛情緒的作用。5μg/μl naltrindole反轉(zhuǎn)電針緩解痛情緒作用更強(qiáng),但與10μg/μl naltrindole的作用相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。大鼠左側(cè)足底注射CFA,r ACC內(nèi)注射1/2.5/5/10μg/μl naltrindole的各組大鼠PWL值與r ACC內(nèi)注射NS相比,都沒(méi)有顯著性差異(P0.05)。各組PWL值為:CFA+NS組8.94±1.26s,n=7;CFA+1μg/μl naltrindole組9.22±1.15s,n=6;CFA+2.5μg/μl naltrindole組9.0±0.60s,n=8;CFA+5μg/μl naltrindole組10.36±1.44s,n=6;CFA+10μg/μl naltrindole組9.96±1.40s,n=6。r ACC內(nèi)注射naltrindole不影響CFA引起的熱痛行為。5.通過(guò)westerm-blot檢測(cè)r ACC內(nèi)δ-阿片受體和磷酸化的NR1/NR2A/NR2B亞基的表達(dá)水平大鼠足底注射CFA,r ACC內(nèi)注射NS,真電針刺激組(CFA+NS+EA),與足底注射CFA,r ACC內(nèi)注射NS,假電針刺激組(CFA+NS+sham EA)相比,r ACC內(nèi)δ-阿片受體表達(dá)量增多,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。電針刺激可以激活大鼠r ACC內(nèi)的δ-阿片受體。大鼠足底注射CFA,r ACC內(nèi)注射NS,假電針刺激組(CFA+NS+sham EA),與足底注射NS,r ACC內(nèi)注射NS,假電針刺激組(NS+NS+sham EA)相比,r ACC內(nèi)NR1/NR2A/NR2B亞基的磷酸化水平顯著升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。CFA致大鼠r ACC內(nèi)NR1/NR2A/NR2B亞基的磷酸化表達(dá)量增高。大鼠足底注射CFA,r ACC內(nèi)注射NS,真電針刺激組(CFA+NS+EA),與足底注射CFA,r ACC內(nèi)注射NS,假電針刺激組(CFA+NS+sham EA)相比,r ACC內(nèi)NR1/NR2A/NR2B亞基的磷酸化水平顯著降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。大鼠電針刺激可以下調(diào)CFA誘導(dǎo)的r ACC內(nèi)NR1/NR2A/NR2B亞基的磷酸化表達(dá)。結(jié)論:1.電針刺激激活r ACC內(nèi)δ-阿片受體,從而緩解CFA誘導(dǎo)的痛情緒反應(yīng)。2.拮抗r ACC內(nèi)δ-阿片受體可反轉(zhuǎn)電針刺激緩解CFA誘導(dǎo)的痛情緒反應(yīng),5/10μg/μl的naltrindole反轉(zhuǎn)了電針緩解痛情緒的作用,而1/2.5μg/μl的naltrindole并未起到反轉(zhuǎn)作用。3.CFA致大鼠炎癥性痛模型r ACC內(nèi)NR1/NR2A/NR2B亞基的磷酸化表達(dá)水平顯著上調(diào)。4.電針刺激可以激活r ACC內(nèi)的δ-阿片受體,下調(diào)NR1/NR2A/NR2B亞基的磷酸化表達(dá)水平,從而緩解痛情緒。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R245

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本文編號(hào)：1936857