本文關(guān)鍵詞：電子鼻在蒼術(shù)質(zhì)量評價中的應用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《北京中醫(yī)藥大學》 2013年

基于PCR-SSCP和微型條形碼的威靈仙分子鑒定研究

安蕊  

【摘要】：威靈仙為我國常用藥材,其來源為毛茛科Ranunculaceae植物威靈仙Clematis chinensis Osbeck.、棉團鐵線蓮Clematis hexapetala Pall.和東北鐵線蓮Clematis manshurica Rupr.的干燥根及根莖。一直以來,中藥材便存在以偽亂真、同名異物等現(xiàn)象。根據(jù)研究報道及市場品種調(diào)查顯示,威靈仙藥用品種非常復雜,混偽品在基原、藥性等方面,均與正品有差異,這無疑會擾亂正常的藥材市場及臨床應用。因此,威靈仙藥材的準確鑒定、品種整理及質(zhì)量控制是亟待解決的問題。 中藥鑒定是中藥研究領域的重要一方面。傳統(tǒng)鑒定主要包括性狀鑒定、顯微鑒定、理化鑒定等方法。隨著分子技術(shù)的不斷發(fā)展,DNA條形碼鑒定方法在藥材鑒定中發(fā)揮了很大作用。此方法操作步驟簡便,可以穩(wěn)定、高效、準確的完成鑒定工作,受到了中藥鑒定工作者廣泛的關(guān)注。微型條形碼是根據(jù)更短的片段進行物種的鑒定,其主要依據(jù)是物種間DNA的穩(wěn)定堿基差異,用于鑒定DNA發(fā)生嚴重降解的實驗材料。本研究還在此基礎上,采用PCR-SSCP-PAGE的方法鑒定了威靈仙藥材及其基原植物。 本研究選取威靈仙三種基原植物及市售藥材為研究對象,利用微型DNA條形碼技術(shù)和PCR-SSCP技術(shù)加以鑒定,以達到對藥材市場中威靈仙品種整理,為威靈仙質(zhì)量控制提供依據(jù)的目的。 經(jīng)過研究,所得結(jié)果如下： (1)根據(jù)威靈仙三種基原的特異位點,采用PCR擴增技術(shù),建立了微型條形碼的鑒別方法。結(jié)果表明,設計的引物能夠?qū)NA質(zhì)量較差樣本中的目的片段擴增出來,片段長度200bp左右,且測序成功率100%,短小的片段也便于序列的分析；對藥材的鑒別能夠準確、快速的完成。 (2)本研究在傳統(tǒng)鑒定的基礎上,采用PCR-SSCP-PAGE技術(shù),建立鑒別威靈仙藥材的方法體系。本研究中,PCR-SSCP-PAGE能夠?qū)⑼`仙的三種基原植物鑒別開,但對于威靈仙藥材,其鑒別效果欠佳。但PCR-SSCP技術(shù)具有高通量、靈敏、經(jīng)濟等優(yōu)點,且此技術(shù)在藥材鑒別領域應用較少,還應當多次嘗試其他藥材,具有很大發(fā)展前景。 (3)通過對威靈仙藥材的性狀鑒定和顯微鑒定,了解到目前威靈仙商品藥材主要來源于威靈仙和東北鐵線蓮。結(jié)合此批藥材含量測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)威靈仙、東北鐵線蓮和棉團鐵線蓮的齊墩果酸和常春藤皂苷含量差異較大。威靈仙藥材中,此兩種成分均能達到藥典的要求,因此建議在選擇藥材種類時,選擇威靈仙入藥。而棉團鐵線蓮藥材中檢測不到此兩種成分。另外,東北鐵線蓮中常春藤皂苷含量極微或無法檢出。因此,建議在藥材栽培中選擇威靈仙為主要栽培品種。 (4)建議將威靈仙、東北鐵線蓮、棉團鐵線蓮在齊墩果酸和常春藤皂苷含量方面,分別規(guī)制,以利于對藥材質(zhì)量控制和監(jiān)管。

【關(guān)鍵詞】：
【學位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R284
【目錄】：

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