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基于VEGF、BDNF、MMP-9表達(dá)探討中藥補(bǔ)陽(yáng)還五湯熏蒸治療缺血性腦卒中的作用機(jī)理

發(fā)布時(shí)間:2018-04-29 08:57

  本文選題:缺血性腦卒中 + VEGF ; 參考:《右江民族醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文


【摘要】:目的:運(yùn)用分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)手段,在分子水平通過(guò)觀察血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表達(dá)水平探討中藥補(bǔ)陽(yáng)還五湯熏蒸治療缺血性腦卒中(ischemic stroke,IS)的作用機(jī)理;同時(shí),在基因水平進(jìn)一步探討MMP-9基因rs17577,rs3918242多態(tài)性與缺血性腦卒中的關(guān)聯(lián)性。為今后桂西地區(qū)缺血性腦卒中的防治提供分子生物學(xué)、基因特點(diǎn)等重要參考依據(jù),為今后防治缺血性腦卒中的各種手段尋找更合適的切入點(diǎn)。方法:從右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科、康復(fù)醫(yī)學(xué)科選取41例缺血性腦卒中患者和41例健康體檢人員,分別采集血清,采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent method,ELISA)檢測(cè),比較缺血性腦卒中病例組與正常對(duì)照組血清中VEGF、BDNF、MMP-9表達(dá)水平。進(jìn)一步對(duì)已入選的41例缺血性腦卒中患者進(jìn)行中藥補(bǔ)陽(yáng)還五湯熏蒸治療,并在治療前后分別進(jìn)行日常生活能力評(píng)分(activities of daily living,ADL)和采集血清進(jìn)行ELISA檢測(cè),比較中藥補(bǔ)陽(yáng)還五湯熏蒸治療前后患者ADL評(píng)分變化及血清VEGF、BDNF、MMP-9表達(dá)水平的變化。再另選缺血性腦卒中患者(152例)和健康體檢人員(152例),采用多聚酶鏈反應(yīng)-限制性?xún)?nèi)切酶片段長(zhǎng)度多態(tài)性(polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技術(shù)進(jìn)行MMP-9基因多態(tài)性研究,分析MMP-9基因rs17577,rs3918242多態(tài)性與缺血性腦卒中的關(guān)聯(lián)性。結(jié)果:在分子水平,ELISA檢測(cè)發(fā)現(xiàn):(1)缺血性腦卒中患者血清VEGF(78.65±6.74)、BDNF(1567.66±247.17)表達(dá)水平均分別顯著性低于正常對(duì)照組(161.61±47.44;2030.94±300.97),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。而缺血性腦卒中患者血清MMP-9表達(dá)水平(10832.63±2993.04)顯著性高于正常對(duì)照組(7987.62±4080.87),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)中藥補(bǔ)陽(yáng)還五湯熏蒸治療后,ADL評(píng)分(61.92±5.01)顯著高于治療前評(píng)分(43.26±3.27),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。中藥補(bǔ)陽(yáng)還五湯熏蒸治療后,血清VEGF(114.21±30.72)、BDNF(2014.46±301.96)表達(dá)水平均分別顯著性高于治療前表達(dá)水平(79.66±7.69;1828.35±287.39),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。而中藥補(bǔ)陽(yáng)還五湯熏蒸治療后血清MMP-9表達(dá)水平(9083.54±1616.99)顯著性低于治療前表達(dá)水平(10356.30±2515.68),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在基因水平,基因多態(tài)檢測(cè)發(fā)現(xiàn):(1)MMP-9基因位點(diǎn)rs17577與rs3918242完全連鎖;(2)缺血性腦卒中組與對(duì)照組MMP-9基因位點(diǎn)rs17577與rs3918242基因型頻率和等位基因頻率的比較:缺血性腦卒中組MMP-9 rs17577位點(diǎn)基因型頻率,以G/G型最為多見(jiàn)75.0%,A/G型占24.3%,A/A型僅占0.7%;等位基因頻率,G為87.2%,A為12.8%。而對(duì)照組MMP-9 rs17577位點(diǎn)基因型頻率,G/G型占比達(dá)76.3%,A/G型占21.7%,而A/A型僅占1.9%;等位基因頻率,G為87.2%,A為12.8%。缺血性腦卒中組MMP-9 rs3918242位點(diǎn)基因型頻率,以C/C型最為多見(jiàn)75.0%,T/C型占24.3%,T/T型也僅占0.7%;等位基因頻率,C為87.2%,T為12.8%。而對(duì)照組MMP-9 rs3918242 C/C型占76.3%,T/C占21.7%,而T/T僅占1.9%;等位基因頻率,C為87.2%,T為12.8%。(3)x 2檢驗(yàn)結(jié)果顯示,缺血性腦卒中組與對(duì)照組MMP-9基因位點(diǎn)rs17577與rs3918242基因型頻率和等位基因頻率的比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:在分子水平,與正常對(duì)照組相比較,缺血性腦卒中患者血清MMP-9表達(dá)水平顯著性升高而VEGF、BDNF表達(dá)水平顯著性下降。中藥補(bǔ)陽(yáng)還五湯熏蒸治療后,可顯著性提升患者ADL評(píng)分,并顯著性降低患者血清MMP-9表達(dá)水平和顯著性升高VEGF、BDNF表達(dá)水平,提示中藥補(bǔ)陽(yáng)還五湯熏蒸治療對(duì)缺血性腦卒中具有較好的治療作用。在基因水平,桂西地區(qū)人群MMP-9基因位點(diǎn)rs17577與rs3918242完全連鎖,但桂西地區(qū)人群MMP-9基因rs17577,rs3918242多態(tài)性與缺血性腦卒中患病無(wú)相關(guān)性。
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本文編號(hào):1819262

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