本文選題：波棱素 + 免疫性肝損傷��； 參考：《西南民族大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：目的:波棱瓜子為常見的藏藥,在相關(guān)報(bào)道中,已經(jīng)明確了其對(duì)肝炎的治療功效,而總木質(zhì)素部位則為波棱瓜子抗肝炎的最有效部位。波棱素是總木質(zhì)素中的有效單體成分,所以本實(shí)驗(yàn)是基于對(duì)藏藥波棱瓜子中有效成分波棱素的研究;考察其是否對(duì)免疫性肝損傷具有保護(hù)作用及其機(jī)制的初步研究。本實(shí)驗(yàn)中,分別選取了大鼠原代肝細(xì)胞免疫性損傷、BCG+LPS和ConA致小鼠免疫性肝損傷三種模型對(duì)波棱素的治療效果進(jìn)行驗(yàn)證,并進(jìn)一步探討了波棱素對(duì)ConA致免疫性肝損傷的機(jī)制。方法:(1)采用原代大鼠免疫性肝細(xì)胞的損傷模型,細(xì)胞取出后,在二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16h,在超凈臺(tái)上給予細(xì)胞上清液脂多糖以致敏,同時(shí)給不同濃度的波棱素、聯(lián)苯雙脂共同培養(yǎng);分別在3、6、12、24h取細(xì)胞上清液,儲(chǔ)存于冰箱中待測(cè)。按賴氏測(cè)定法測(cè)取記錄肝細(xì)胞上清液中LDH、AST、ALT的含量。(2)選用BCG+LPS導(dǎo)致小鼠的免疫性肝損傷:小鼠經(jīng)尾靜脈注射BCG(2.5 mg/kg),12d后,靜脈注射脂多糖(7.5μg/只)。動(dòng)物禁食12小時(shí),取血,即刻處死,將肝臟從機(jī)體內(nèi)分離出來,稱量記錄肝臟重量,10%多聚甲醛固定。待血液靜止半小時(shí)后,每分鐘3000轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速,離心10分鐘,將微黃色的血清吸出,后放入冰箱內(nèi)待測(cè)。然后分別測(cè)定小鼠血清中含有的LDH、AST、ALT的含量和波棱素對(duì)小鼠肝勻漿中SOD、MDA、GSH-px的活性影響。然后對(duì)肝組織進(jìn)行病理形態(tài)檢測(cè);(3)采用ConA致小鼠免疫性肝損傷:連續(xù)注射波棱素7d,之后通過尾靜脈注射ConA來導(dǎo)致肝損傷,刀豆球蛋白劑量為20mg/kg;禁食8h后,取血,將肝臟從機(jī)體內(nèi)分離出來,稱量記錄肝臟重量,10%多聚甲醛固定。待血液靜止30min后,3000rpm,離心10min,將微黃色的血清吸出,后放入冰箱內(nèi)待測(cè)。測(cè)定對(duì)小鼠體內(nèi)的LDH、AST、ALT的含量高低影響和肝組織中SOD、MDA、GSH-Px的活性的影響;對(duì)肝組織進(jìn)行病理形態(tài)檢測(cè);(4)免疫組化法檢測(cè)波棱瓜子有效成分波棱素對(duì)ConA致小鼠免疫性肝損傷肝臟中TNF-α、iNOS、NF-κB、IL-4、IL-10、IFN-γ、SOCS1、IRF-1、STAT1的表達(dá)。結(jié)果:(1)波棱素可以降低原代肝細(xì)胞損傷上清液中各時(shí)間點(diǎn)的LDH、AST和ALT酶的含量,顯示出波棱素可以通過降低肝細(xì)胞破裂產(chǎn)生的酶從而達(dá)到保肝的作用。(2)在BCG+LPS對(duì)小鼠造成的免疫性肝損傷中,測(cè)定數(shù)據(jù)說明,相比較BCG+LPS組,波棱素高低劑量可以使小鼠血清中的LDH、AST、ALT的活性有所降低,同時(shí)波棱素高低劑量組中小鼠肝勻漿的SOD和GSH-Px酶活相對(duì)于模型組有所降低,然而MDA含量卻明顯較模型組升高了;以上說明,波棱素可以保護(hù)肝組織,其是通過降低對(duì)肝細(xì)胞的損傷以免破壞肝臟中酶的平衡,還可以從抗氧化等方面對(duì)肝臟進(jìn)行防護(hù),以免受到BCG+LPS的影響導(dǎo)致免疫性肝損傷。(3)在模型ConA對(duì)小鼠造成的肝損傷中,波棱瓜子的有效成分波棱素充分體現(xiàn)了對(duì)肝臟的保護(hù)作用,同時(shí)與BCG+LPS實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果相似,給予波棱素組的小鼠血清中的LDH、AST、ALT的酶活相對(duì)于ConA模型有所降低,同時(shí)波棱素高低劑量中的SOD和GSH-Px酶活相對(duì)與ConA組有所降低,然而MDA活性確明顯較ConA組升高;以上結(jié)果同樣證明了波棱素是對(duì)肝組織具有保護(hù)功效的成分。(4)通過探討ConA造成的免疫性肝損傷,測(cè)得數(shù)據(jù)得出波棱瓜子有效成分波棱素可以降低iNOS、IL-4和TNF-α的蛋白表達(dá),控制相關(guān)炎性TNF-α、INF-γ、NF-kB的表達(dá),從而起到保護(hù)肝組織的作用。說明波棱素可以調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)自身進(jìn)行調(diào)節(jié),降低細(xì)胞因子的損傷,從而來保護(hù)肝組織。結(jié)論:通過以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)證明,波棱瓜子的有效成分波棱素可以對(duì)卡介苗聯(lián)合脂多糖和刀豆球蛋白A導(dǎo)致的免疫性肝損傷有相當(dāng)?shù)姆雷o(hù)作用。波棱素對(duì)ConA致小鼠免疫性肝損傷機(jī)理可能是從抗氧化性,抑制氧化基團(tuán)對(duì)肝細(xì)胞的傷害;增強(qiáng)機(jī)體自身的抗氧化能力,減少炎癥性細(xì)胞因子侵入肝細(xì)胞內(nèi),對(duì)肝細(xì)胞造成傷害,從而來保護(hù)肝組織,抑制TNF-α、IFN-γ和IL-4的炎性因子的釋放,并且控制了NF-κB信號(hào)通路的傳導(dǎo)。
[Abstract]:Objective : To study the therapeutic effect of wave - edge melon seeds on immune liver injury in rats . The results of this study were as follows : ( 1 ) To study the protective effect and mechanism of wave - edge melon seeds on immune liver injury . ( 2 ) The immune liver injury of mice was induced by BCG + LPS . After intravenous administration of BCG ( 2.5 mg / kg ) and 12d , the activity of SOD , MDA and GSH - px in liver homogenate of mice was determined by injection of Con A . The results showed that : ( 1 ) The content of LDH , AST and ALT in serum of mice was reduced by reducing the damage of liver cells . The results showed that the activity of LDH , AST and ALT in serum of mice was decreased by reducing the damage of liver cells . ( 4 ) By investigating the immune liver injury caused by concanavalin , it is concluded that the effective component of Pogonin can decrease the expression of iNOS , IL - 4 and TNF - 偽 and control the expression of TNF - 偽 , INF - 緯 and NF - kB .

【學(xué)位授予單位】：西南民族大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R29

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1796296