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針刺環(huán)跳和夾脊對坐骨神經(jīng)損傷大鼠cAMP信號通路影響的比較研究

發(fā)布時間:2018-04-11 11:35

  本文選題:坐骨神經(jīng)損傷 + 針刺; 參考:《遼寧中醫(yī)藥大學(xué)》2016年碩士論文


【摘要】:目的:本課題旨在研究針刺環(huán)跳穴和夾脊穴對坐骨神經(jīng)鉗夾損傷模型大鼠的不同療效。以免疫組化和蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot,WB)檢測方法,觀察大鼠背根神經(jīng)節(jié)中蛋白激酶A(protein kinase,PKA)、c AMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(c AMP response element binding protein,CREB)和原癌基因蛋白(c-fos)含量的表達(dá),探討針刺治療大鼠坐骨神經(jīng)損傷中環(huán)磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,c AMP)細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用機(jī)制,比較環(huán)跳穴和夾脊穴修復(fù)坐骨神經(jīng)損傷的作用差異。材料與方法:選用SPF級健康SD大鼠48只,雌雄各均,按照隨機(jī)數(shù)字表法將其分為四組:空白組、模型組、環(huán)跳組、夾脊組,4組,每組12只。采用Hasegawa[1]設(shè)計的、廖維靖[2]和王維[3]的改良鉗夾法制成大鼠坐骨神經(jīng)急性損傷模型?瞻捉M和模型組在相同條件下,正常飼養(yǎng),于造模后第8天,將大鼠固定于大鼠固定器上,每次15 min,每日1次,連續(xù)14天。環(huán)跳組和夾脊組造模后第8天,分別針刺環(huán)跳穴和夾脊穴。連接SDZ-Ⅱ電針儀進(jìn)行治療,每次治療15 min,每日一次,連續(xù)治療14天。造模后第22天結(jié)束治療,行為學(xué)觀察通過檢測大鼠坐骨神經(jīng)功能指數(shù)來評價各組大鼠的肌力及運動功能恢復(fù)情況。在大鼠左側(cè)臀骨交界處切開約1.5 cm長的切口,暴露坐骨神經(jīng),截取損傷點上下各5 mm;然后再將大鼠背部正中皮膚縱向切開,打開椎管,截取L4-L5節(jié)段脊髓。形態(tài)學(xué)觀察通過HE染色法觀察坐骨神經(jīng)病理形態(tài)的變化。分子生物學(xué)檢測法,觀察大鼠L4-L5節(jié)段脊髓及背根神經(jīng)節(jié)區(qū)域PKA、CREB和c-fos的表達(dá)強(qiáng)度,所得結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果:1.坐骨神經(jīng)功能指數(shù)(Sciatic nerve function index,SFI)采用大鼠坐骨神經(jīng)功能指數(shù)觀察大鼠患肢的功能恢復(fù)情況。造模后第8天,與空白組比較,坐骨神經(jīng)鉗夾模型大鼠各組的SFI明顯低于空白組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),說明大鼠的運動功能減退且造模成功。造模后第22天,與模型組比較,環(huán)跳組和夾脊組均有顯著的提高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),說明針刺治療可以促進(jìn)大鼠坐骨神經(jīng)損傷的恢復(fù)和再生。環(huán)跳組大鼠坐骨神經(jīng)SFI評價優(yōu)于夾脊組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。2.蘇木精-伊紅染色(Hematoxylin-eosin staining,HE染色)大鼠坐骨神經(jīng)損傷處HE染色結(jié)果顯示:空白組坐骨神經(jīng)神經(jīng)內(nèi)軸突、髓鞘連續(xù)性良好,纖維分布整齊;與空白組比較,模型組神經(jīng)纖維分布不規(guī)則,軸突、髓鞘破潰,部分出現(xiàn)崩解;環(huán)跳組和夾脊組中坐骨神經(jīng)纖維分布比較規(guī)則,部分神經(jīng)出現(xiàn)新的生長,部分髓鞘脫落,其中環(huán)跳組優(yōu)于夾脊組。3.免疫組織化學(xué)檢測PKA:空白組中PKA在L4-L5背根神經(jīng)節(jié)中大量表達(dá),陽性胞核呈藍(lán)色,胞漿呈棕褐色;與空白組相比,其余各組大鼠L4-L5背根神經(jīng)節(jié)中PKA蛋白表達(dá)水平顯著下調(diào)(p0.01);與模型組相比,空白組、環(huán)跳組、夾脊組上調(diào)明顯(p0.01);與環(huán)跳組比較,夾脊組下調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。CREB:空白組中CREB在L4-L5背根神經(jīng)節(jié)中大量表達(dá),陽性胞核呈藍(lán)色,胞漿呈棕褐色;與空白組相比,其余各組大鼠L4-L5背根神經(jīng)節(jié)中CREB蛋白表達(dá)水平顯著下調(diào)(p0.01);與模型組相比,空白組、環(huán)跳組、夾脊組上調(diào)明顯(p0.01);與環(huán)跳組比較,夾脊組下調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。c-fos:空白組中c-fos在L4-L5背根神經(jīng)節(jié)中少量表達(dá),與空白組相比,其余各組大鼠L4-L5背根神經(jīng)節(jié)中c-fos蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào)(p0.01);與模型組相比,空白組、環(huán)跳組、夾脊組下調(diào)明顯(p0.01);與環(huán)跳組比較,夾脊組上調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。4.Western Blot檢測PKA:空白組中PKA在L4-L5背根神經(jīng)節(jié)中大量表達(dá),與空白組相比,模型組、夾脊組大鼠L4-L5背根神經(jīng)節(jié)中PKA蛋白表達(dá)水平顯著下調(diào)(p0.01);與模型組相比,空白組、環(huán)跳組、夾脊組上調(diào)明顯(p0.01);與環(huán)跳組比較,夾脊組明顯下調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.01)。CREB:空白組中CREB在L4-L5背根神經(jīng)節(jié)中大量表達(dá),與空白組相比,其余各組大鼠L4-L5背根神經(jīng)節(jié)中CREB蛋白表達(dá)水平顯著下調(diào)(p0.05);與模型組相比,空白組、環(huán)跳組、夾脊組上調(diào)明顯(p0.05);與環(huán)跳組比較,夾脊組下調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。c-fos:空白組中c-fos在L4-L5背根神經(jīng)節(jié)中少量表達(dá),與空白組相比,模型組、夾脊組大鼠L4-L5背根神經(jīng)節(jié)中c-fos蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào)(p0.01);與模型組相比,空白組、環(huán)跳組、夾脊組下調(diào)明顯(p0.01);與環(huán)跳組比較,夾脊組上調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:1.針刺環(huán)跳穴和夾脊穴,均可不同程度地促進(jìn)坐骨神經(jīng)損傷修復(fù)和再生,環(huán)跳組優(yōu)于夾脊組。2.針刺環(huán)跳穴和夾脊穴,顯著提高背根神經(jīng)節(jié)中PKA和CREB的含量,激活c AMP細(xì)胞通路,抑制c-fos含量的表達(dá),這可能是針刺促進(jìn)坐骨神經(jīng)損傷修復(fù)與再生的有效機(jī)制之一。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】:遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號】:R245

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本文編號:1735872


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