本文選題：一效膏　切入點(diǎn)：慢性皮膚潰瘍　出處：《遼寧中醫(yī)藥大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：目的:通過觀察皮膚破損、激素干預(yù)、異物植入3種因素對(duì)小鼠皮膚潰瘍創(chuàng)面的影響,探討最符合臨床慢性皮膚潰瘍特點(diǎn)的復(fù)合因素疊加造模方法,為進(jìn)一步研究提供理想的動(dòng)物模型。并在此基礎(chǔ)上觀察一效膏對(duì)慢性皮膚潰瘍小鼠創(chuàng)面愈合的影響,探討其促進(jìn)創(chuàng)面愈合的作用機(jī)制。材料與方法:實(shí)驗(yàn)一:清潔級(jí)昆明種小鼠,50只,均為雄性,體重20-22g。隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為:皮損+激素+異物組、皮損+激素組、皮損+異物組、單純皮損組、空白組;每組各10只小鼠。皮損+激素+異物組與皮損+激素組小鼠連續(xù)3天股部肌注氫化可的松注射液4ml/kg,其余各組小鼠注射等量生理鹽水。于造模第4天用4%水合氯醛麻醉后,剪去背部毛,在腰椎正中部減除部分皮膚,造成直徑大約為1.2cm的圓形皮膚全層切口。皮損+激素+異物組、皮損+異物組小鼠于皮膚切開后同時(shí)用血管鉗將皮膚組織分離至肌筋膜,然后用鑷子輕輕拉開切口,將消毒的塑料環(huán)邊緣埋入切口內(nèi),最后將緊靠塑料環(huán)邊緣的皮膚縫合二針,以防環(huán)脫落。造模成功后觀察小鼠一般狀態(tài)、瘡面形態(tài)、分泌物,定期稱量小鼠體重,測(cè)量創(chuàng)面面積并計(jì)算創(chuàng)面愈合率,造模后14天處死小鼠,剪下創(chuàng)面新生肉芽組織及創(chuàng)周組織,行HE染色觀察創(chuàng)面組織毛細(xì)血管新生及成纖維細(xì)胞增殖情況。實(shí)驗(yàn)二:清潔級(jí)昆明種小鼠40只,隨機(jī)分為空白組、模型組、一效膏組、康復(fù)新液組,每組各10只,除空白組外,各組小鼠采用皮損+激素+異物組方法造模,各治療組給予相應(yīng)藥物,模型組予生理鹽水涂抹創(chuàng)面,各組均每日換藥一次,以無菌紗布覆蓋創(chuàng)面,空白組不予干預(yù)。治療后定期肉眼觀察小鼠創(chuàng)面大體情況,測(cè)量創(chuàng)面面積并計(jì)算創(chuàng)面愈合率,于治療后第21天處死小鼠,取塑料環(huán)內(nèi)肉芽組織,用電子天平稱取肉芽腫濕重,然后以10%福爾馬林溶液固定保存,HE染色進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,免疫組化法檢測(cè)創(chuàng)面組織中bcl-2、bax蛋白表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)三:清潔級(jí)昆明種小鼠120只,隨機(jī)分為空白組、模型組、一效膏組、康復(fù)新液組,每組各30只,每組在其基礎(chǔ)上再分為一周組、二周組、三周組3個(gè)亞組,每組各10只小鼠。各組小鼠于規(guī)定時(shí)間結(jié)束觀察,處死后,取塑料環(huán)內(nèi)肉芽組織,1/3浸入10%福爾馬林溶液固定保存,做組織學(xué)觀察、免疫組化法檢測(cè)用。2/3放入凍存管內(nèi)超低溫冰箱保存,作real-timepcr檢測(cè)用。觀察指標(biāo):血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vegf),成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(fgf),轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(tgf-β),cd34抗原,及成纖維細(xì)胞(fb)計(jì)數(shù)。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)一:1.一般狀態(tài):造模1周后皮損+異物組、單純皮損組小鼠活動(dòng)狀態(tài)較好,運(yùn)動(dòng)靈敏,進(jìn)食良好,大便成形,體態(tài)與空白組相比略顯瘦削。皮損+激素+異物組與皮損+激素組體態(tài)明顯消瘦,進(jìn)食量少,大便稀薄不成形,活動(dòng)量明顯減少,蜷縮,四肢及尾部冷。2.創(chuàng)面情況:單純皮損組瘡面于造模后第3天即出現(xiàn)鮮紅肉芽組織,創(chuàng)面濕潤(rùn),少量漿液性滲出,創(chuàng)面平坦,無明顯結(jié)痂,愈合速度快。皮損+激素組瘡面顏色暗淡,分泌物清晰,肉芽組織量少且不鮮嫩,創(chuàng)面愈合較單純皮損組慢。皮損+異物組初期即有大量稠厚黃白色分泌物,分泌物下創(chuàng)面基底組織顏色鮮紅,后期轉(zhuǎn)為暗紅,創(chuàng)面結(jié)痂較厚,愈合趨勢(shì)不明顯。皮損+激素+異物組,初期有大量清晰分泌物,中后期瘡形散漫,平坦塌陷,色澤紫暗,肉芽蒼白并被結(jié)痂覆蓋,愈合趨勢(shì)不明顯。3.體重情況:造模當(dāng)天各組小鼠體重?zé)o明顯差異,造模后第1周各組體重比較,單純皮損組體重增長(zhǎng)最快,皮損+激素+異物組體重增長(zhǎng)最慢。析因設(shè)計(jì)方差分析表明,激素注射與異物植入兩種因素對(duì)小鼠體重變化均有影響。4.造模后各組小鼠創(chuàng)面愈合率比較,單純皮損組愈合速度最快,皮損+激素+異物組最慢。5.組織學(xué)觀察:單純皮損組切片中可見較多新生排列整齊的毛細(xì)血管,伴有大量成纖維細(xì)胞,少量纖維母細(xì)胞及萎縮的炎性細(xì)胞,無明顯水腫。皮損+激素組切片可見新生毛細(xì)血管及成纖維細(xì)胞排列較為稀疏,可見炎性細(xì)胞。皮損+異物組切片顯示大量萎縮的炎性細(xì)胞,偶可見巨噬細(xì)胞及漿細(xì)胞,大小血管排列雜亂且部分破裂,紅細(xì)胞溢出散落于組織間隙,并伴有水腫。皮損+激素+異物組切片可見毛細(xì)血管生成及成纖維細(xì)胞稀少,排列雜亂,可見炎性細(xì)胞�？瞻捉M皮下組織切片可見肌纖維排列整齊有序,無炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。實(shí)驗(yàn)二:1.創(chuàng)面大體觀察:一效膏組小鼠創(chuàng)面用藥后第3-7天創(chuàng)面色澤由晦暗轉(zhuǎn)紅活,出現(xiàn)肉芽組織,創(chuàng)面濕潤(rùn),較多稠厚分泌物,無明顯結(jié)痂,觸之較軟,愈合趨勢(shì)明顯;康復(fù)新液組小鼠用藥后第3-9天可見少量肉芽組織,色澤尚紅活,表面較為干燥,分泌物清晰,少許結(jié)痂覆蓋,愈合趨勢(shì)較明顯;模型組小鼠創(chuàng)面色澤晦暗,瘡形散漫,平坦塌陷,愈合早期無明顯肉芽組織,致中后期依稀可見少許蒼白肉芽,表面被結(jié)痂覆蓋,觸之較硬,無明顯愈合趨勢(shì)。2.創(chuàng)面愈合率:治療第5天,各治療組與模型組比較,一效膏組、康復(fù)新液組創(chuàng)面愈合率明顯提高(p0.05)。治療第10天,各治療組與模型組比較,一效膏組、康復(fù)新液組創(chuàng)面愈合率明顯提高(p0.05);一效膏組與康復(fù)新液組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。治療第17天,與模型組比較,一效膏組、康復(fù)新液組創(chuàng)面愈合率明顯提高(p0.05)。3.創(chuàng)面肉芽組織濕重:用藥后21天,各治療組與模型組相比,一效膏組與康復(fù)新液組小鼠創(chuàng)面塑料環(huán)內(nèi)肉芽組織濕重明顯提高(p0.05)。4.創(chuàng)面bcl-2、bax蛋白表達(dá):各治療組與模型組相比,一效膏組與康復(fù)新液組小鼠創(chuàng)面肉芽組織內(nèi)bcl-2表達(dá)明顯升高(p0.001),而bax表達(dá)明顯降低(p0.001)。5.組織學(xué)觀察:正常組皮下組織切片可見肌纖維排列整齊有序,無炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。模型組肉芽組織增生不明顯,毛細(xì)血管數(shù)量稀疏,排列雜亂,內(nèi)皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞數(shù)量稀少,可見炎性細(xì)胞,瘢痕增生明顯。一效膏組肉芽組織增生較明顯,毛細(xì)血管生成明顯較模型組多,排列整齊,伴有大量成纖維細(xì)胞及少量纖維母細(xì)胞,偶可見少量炎性細(xì)胞,瘢痕增生不明顯�？祻�(fù)新液組毛細(xì)血管生成、成纖維細(xì)胞情況與一效膏組相似,可見少量瘢痕組織。實(shí)驗(yàn)三:1.成纖維細(xì)胞計(jì)數(shù):各治療組與模型組比較,用藥后第7、14、21天,一效膏組與康復(fù)新液組成纖維細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯提高(p0.05)。2.cd34結(jié)果:各時(shí)間點(diǎn),模型組cd34蛋白表達(dá)水平均明顯高于空白組(p0.01);與模型組相比,各治療組cd34蛋白表達(dá)水平明顯提高(p0.01)。3.vegf結(jié)果:免疫組化:各時(shí)間點(diǎn),模型組vegf蛋白表達(dá)水平均明顯高于空白組(p0.05)。與模型組比較,各時(shí)間點(diǎn)一效膏組vegf蛋白表達(dá)均水平均有所提高,其中第7、14天兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),與模型組比較,各時(shí)間點(diǎn)康復(fù)新液組vegf蛋白表達(dá)均有所提高,其中第14天兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。rt-pcr:各時(shí)間點(diǎn)模型組vegfmrna表達(dá)水平均高于空白組(p0.05)。與模型組比較,各時(shí)間點(diǎn)治療組vegfmrna表達(dá)水平均有所提高(p0.05)。4.fgf結(jié)果:免疫組化:各時(shí)間點(diǎn),模型組fgf蛋白表達(dá)水平均明顯高于空白組(p0.01)。與模型組比較,各時(shí)間點(diǎn)一效膏組FGF蛋白表達(dá)均水平均有所提高,其中第14天兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。與模型組比較,各時(shí)間點(diǎn)康復(fù)新液組FGF蛋白表達(dá)均有所提高。RT-PCR:各時(shí)間點(diǎn)模型組FGF mRNA表達(dá)均高于空白組,其中第7天兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與模型組比較,各時(shí)間點(diǎn),一效膏組FGF mRNA表達(dá)均有所提高(P0.01)。與模型組比較,各時(shí)間點(diǎn)康復(fù)新液組FGF mRNA表達(dá)均有所提高。5.TGF-β結(jié)果:免疫組化:各時(shí)間點(diǎn),模型組TGF-β蛋白表達(dá)水平均高于空白組(P0.05)。與模型組比較,各時(shí)間點(diǎn)一效膏組TGF-β蛋白表達(dá)均水平均有所提高,其中第7、14天兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與模型組比較,各時(shí)間點(diǎn)康復(fù)新液組TGF-β蛋白表達(dá)均有所提高,其中第7、14天兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。RT-PCR:各時(shí)間點(diǎn)模型組TGF-βmRNA表達(dá)均高于空白組(P0.05)。與模型組比較,各時(shí)間點(diǎn)一效膏組TGF-βmRNA表達(dá)水平有所提高(P0.05,P0.01)。與模型組比較,康復(fù)新液組TGF-βmRNA表達(dá)水平有所提高,其中第14、21天差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,P0.01)。結(jié)論:1.皮膚缺損疊加激素注射與異物植入的復(fù)合因素造模方法,能有效維持創(chuàng)面慢性皮膚潰瘍的狀態(tài),且符合中醫(yī)外科陰癥瘡瘍的證候特點(diǎn)。2.一效膏能有效促進(jìn)慢性皮膚潰瘍創(chuàng)面的愈合,提高創(chuàng)面愈合率,并能促進(jìn)創(chuàng)面肉芽組織的生成,其作用機(jī)制可能與上調(diào)bcl-2表達(dá)水平,下調(diào)bax表達(dá)水平有關(guān)。3.一效膏能通過上調(diào)VEGF、FGF、TGF-β表達(dá)水平,促進(jìn)創(chuàng)面毛細(xì)血管的新生和成纖維細(xì)胞的增殖,進(jìn)而促進(jìn)慢性皮膚潰瘍創(chuàng)面的愈合。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R269

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本文編號(hào)：1669417