本文關(guān)鍵詞： 糖尿病 中醫(yī)藥 降糖消渴顆粒 PI3K信號通路 糖脂代謝　出處：《北京中醫(yī)藥大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景胰島素抵抗是多種疾病共同的病理生理基礎(chǔ),如2型糖尿病、肥胖、高血脂癥、冠心病等。提高胰島素的敏感性、改善胰島素抵抗是防治2型糖尿病、高血脂癥、肥胖等內(nèi)分泌疾病的重要課題�；诟鶕�(jù)多年臨床經(jīng)驗,對大量文獻(xiàn)的梳理總結(jié),高思華教授提出肝脾腎同治法辨證治療2型糖尿病的治療理念。以健脾益氣,養(yǎng)肝滋腎,佐以活血清熱為治療原則,創(chuàng)制了臨床驗方降糖消渴顆粒。前期實驗和臨床觀察都證實本方在糾正糖脂代謝方面的有效性。自發(fā)型糖尿病小鼠KK-Ay因其皮毛顯色基因Ay突變,具有遺傳易感性和環(huán)境敏感性,通過飲食誘導(dǎo)可自發(fā)出現(xiàn)高血糖、肥胖、高胰島素血癥等,更容易被誘發(fā)內(nèi)分泌紊亂,出現(xiàn)代謝綜合癥。作為肥胖的2型糖尿病模型,具有典型的胰島素抵抗病理改變,是最接近人類2型糖尿病的小鼠模型。骨骼肌作為胰島素最大的靶器官,承擔(dān)著70%以上的糖代謝。故我們選用KK-Ay小鼠的骨骼肌作為研究介體,對降糖消渴顆粒的降糖機(jī)制進(jìn)行深層探索。研究目的和意義觀察降糖消渴顆粒對KK-Ay2型糖尿病模型小鼠體重、糖脂代謝和骨骼肌中PI-3K通路的影響,探討降糖消渴顆粒在調(diào)控糖脂代謝方面可能的藥效機(jī)制。研究方法選用8周齡KK-Ay小鼠高脂飼料喂養(yǎng),至12周齡,篩選空腹血糖≥14mmol/l的小鼠50只,按對照組、降糖消渴顆粒高、中、低劑量組和陽性藥組5組,給藥10周,每周檢測小鼠進(jìn)食量、體重、空腹血糖,第4周和第10周檢測小鼠糖耐量。實驗結(jié)束取材,檢測血糖、血清胰島素、血紅蛋白、血脂4項及游離脂肪酸水平,用實時熒光定量PCR檢測胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路PI-3K通路中相關(guān)基因IRS-1、PI3K、AKT、GLUT4、 GSK-3p的RNA水平,用Western Blot檢測骨骼肌的上述因子的蛋白表達(dá)。研究結(jié)果各劑量降糖消渴顆粒對小鼠的攝食量有降低的趨勢,KK-Ay糖尿病模型小鼠的體重都持續(xù)地上升,降糖消渴顆粒各劑量組均可以明顯減輕KK-Ay小鼠的體重,在第8周后才開始顯現(xiàn)且以高劑量效果最好。降糖消渴顆粒在給藥4周后能明顯降低KK-Ay小鼠空腹血糖作用,其中以中劑量組效果最為顯著。降糖消渴顆粒可以降低KK-Ay糖尿病模型小鼠的糖化血紅蛋白水平,以中劑量效果最好。降糖消渴顆粒可以提高KK-Ay糖尿病模型小鼠的胰島素敏感性,以高劑量效果最好。降糖消渴顆粒干預(yù)10周,高劑量表現(xiàn)出改善糖耐量作用。降糖消渴顆粒各組對KK-Ay小鼠血TG、TC、HDL-C和LDL-C的明顯改善作用,降糖消渴顆粒中低劑量對FFA水平具有的改善作用。實時熒光定量PCR結(jié)果顯示,降糖消渴顆粒各劑量組對IRS-1mRNA, PI3K mRNA, AKTmRNA, Glut4mRNA表達(dá)亦均有升高趨勢,對GSK-3βmRNA具有降低作用。其中,對提高IRS-1mRNA、PI3mRNA、Glut4mRNA,降低GSK-3βmRNA的水平,高劑量組最好；對提高AKT mRNA的水平,中劑量藥效最好。Western blot結(jié)果顯示,KK-Ay小鼠骨骼肌組織IRS-1、PI3K, AKT, p-AKT, Glut4的蛋白表達(dá)均有升高趨勢,而對GSK-3β則有降低作用。其中,對提高IRS-1、PI3K、 AKT、p-AKT、Glut4,降低GSK-3β的蛋白表達(dá),其降糖消渴顆粒高劑量藥效最好；但是p-AKT/AKT的比值,發(fā)現(xiàn)降糖消渴顆粒低劑量對于發(fā)揮AKT的活性效果最好。結(jié)論1.降糖消渴顆粒促進(jìn)KK-Ay小鼠的體重降低和糖脂代謝改善,能抑制小鼠攝食量有關(guān)；能控制FBG并改善糖耐量,降低HDL-C、LDL-C、TG、TC和FFA水平。2. 降糖消渴顆粒改善KK-Ay糖尿病模型小鼠糖脂代謝的作用機(jī)理之一在于提高KK-Ay小鼠骨骼肌中IRS-1,PI3K, AKT和Glut4 mRNA和蛋白的表達(dá),降低GSK-3β mRNA和蛋白表達(dá),從而改善骨骼肌的胰島素抵抗。本研究的創(chuàng)新之處：1.首次在中醫(yī)理論層面探討了肝脾腎的功能失調(diào)與2型糖尿病的胰島素抵抗之間的密切聯(lián)系,從糾正骨骼肌胰島素抵抗的角度體現(xiàn)了肝脾腎同調(diào)在2型糖尿病治療中的重要意義。2.首次運(yùn)用降糖消渴顆粒干預(yù)自發(fā)型糖尿病模型KK-Ay小鼠,觀察其對肥胖型2型糖尿病小鼠模型的藥效作用,揭示肝脾腎同調(diào)法對肥胖型2型糖尿病糖脂代謝紊亂的治療作用。3.將中醫(yī)臟腑相關(guān)理論與胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)PI3K通路聯(lián)系起來,應(yīng)用KK-Ay自發(fā)型糖尿病小鼠模型,觀察基于肝脾腎三臟同調(diào)理論的組方“降糖消渴顆粒”在糖脂代謝等方面的藥學(xué)作用。并在此基礎(chǔ)上,通過研究降糖消渴顆粒對胰島素信號通路PI3K通路中關(guān)鍵因子基因及蛋白的影響,探討降糖消渴顆粒對骨骼肌PI3K信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響,從而揭示其可能的作用機(jī)制,并為立足肝脾腎三臟同治辨證治療糖尿病的理論提供新的實驗數(shù)據(jù)支持。4.首次用不同劑量的降糖消渴顆粒干預(yù)2型糖尿病模型小鼠,發(fā)現(xiàn)高劑量組對體重及胰島素抵抗改善效果最為顯著,而中劑量組對空腹血糖及血紅蛋白水平改善藥效最佳,而在降低游離性脂肪酸方面低劑量組效果最為顯著,說明以降糖消渴顆粒為代表的中藥復(fù)方在治病過程中不存在劑量依賴性關(guān)系。
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【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R259

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本文編號：1496527