本文關(guān)鍵詞： 多發(fā)性硬化 T細(xì)胞亞群 炎癥因子 疏肝健脾固髓方 網(wǎng)絡(luò)藥理　出處：《中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：多發(fā)性硬化是一種T細(xì)胞免疫介導(dǎo)的自身免疫性疾病,由T細(xì)胞分泌的炎癥因子執(zhí)行炎癥過(guò)程,在臨床癥狀的復(fù)發(fā)及緩解占據(jù)重要作用。疏肝健脾固髓方是臨床治療多發(fā)性硬化的經(jīng)驗(yàn)方,在前期的臨床研究中提示有較好的療效。本研究旨在觀察疏肝健脾固髓方對(duì)多發(fā)性硬化T細(xì)胞亞群及其下游炎癥因子的影響,并結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討其治療多發(fā)性硬化的靶點(diǎn)。1.疏肝健脾固髓方對(duì)多發(fā)性硬化患者T細(xì)胞亞群的影響目的：研究疏肝健脾固髓方治療多發(fā)性硬化前后T細(xì)胞亞群的改變。方法：利用中醫(yī)證候調(diào)查表將所有多發(fā)性硬化患者每次就診的中醫(yī)表征進(jìn)行量化處理,對(duì)所有癥狀的出現(xiàn)頻率進(jìn)行統(tǒng)計(jì),研究多發(fā)性硬化的中醫(yī)證候特點(diǎn)。對(duì)所有患者每次就診時(shí)的外周血T細(xì)胞亞群通過(guò)流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè),急性期采用激素沖擊治療,治療前后分別檢測(cè),穩(wěn)定期采用疏肝健脾固髓方加減治療,每3個(gè)月檢測(cè)一次。結(jié)果：男女患者發(fā)病年齡相比較無(wú)顯著差別(P=0.493,P0.05),男女患病人數(shù)比例約為1：3,各年齡段的性別比例無(wú)明顯差別(x2.418,p=0.659,P0.05)。MS患者特有的神經(jīng)功能缺損癥狀以肢體麻木最常見(jiàn),占66.7%；其次為感覺(jué)異常和肢體無(wú)力,各占60.3%。MS患者中醫(yī)癥狀出現(xiàn)頻率在50%以上的癥狀有3項(xiàng),分別為神疲乏力(65.1%)、腰膝酸軟(55.6%)、情緒低落(50.8%)；出現(xiàn)率在40-50%的癥狀有5項(xiàng),分別為汗多(47.6%)怕冷(46%)、多夢(mèng)(46%)、心煩(41.3%)、健忘(41.3%)；出現(xiàn)率在30-40%的癥狀有6項(xiàng),分別為少氣懶言、咽干口燥、大便干結(jié)、大便粘膩、頭昏沉、胸悶；舌象中出現(xiàn)最多的是舌體胖大(12.7%)、舌色淡(60.3%)、苔薄(76.2%)；脈象中出現(xiàn)最多的是脈細(xì)(52.4%),其次為脈沉(44.4%)多發(fā)性硬化患者激素治療后CD3+CD4-CD8-T細(xì)胞與激素治療前相比降低41%,差異有顯著意義(P=0.010,P0.05)；其余各T細(xì)胞亞群均無(wú)顯著性差異(P0.05);CD4+/CD8+T細(xì)胞比值在激素治療前后無(wú)明顯變化(P=0.345,P0.05)。疏肝健脾固髓方治療后CD3+CD4-CD8-T細(xì)胞與治療前相比降低12%,差異有顯著意義(P=0.000,p0.05):CD3+CD4+CD8-T細(xì)胞絕對(duì)值治療后比治療前升高5%,但無(wú)顯著意義(P=0.097,P0.05)；其余各T細(xì)胞亞群均無(wú)顯著性差異(p0.05):CD4+/CD8+T細(xì)胞比值在治療前后無(wú)明顯變化(P=0.206,P0.05)。結(jié)論：(1)各年齡階段中男女患者人數(shù)存在明顯差異,女性患者明顯多于男性,男女比例約為1：3.2,符合相關(guān)文獻(xiàn)的研究。(2)臨床證候研究中出現(xiàn)頻率最高的證候?yàn)槟I精虧虛,其次為肝郁、脾虛,舌脈的表現(xiàn)也是以虛證為主。說(shuō)明多發(fā)性硬化的證候表現(xiàn)是以腎精虧虛為主,肝郁、脾虛等為輔,為疏肝健脾固髓方治療多發(fā)性硬化提供了證候?qū)W依據(jù)。(3)激素和疏肝健脾固髓方治療后CD3+CD4-CD8-T細(xì)胞與治療前相比均顯著降低,推測(cè)其在MS病程中促進(jìn)炎癥的發(fā)生,而激素和疏肝健脾固髓方都能通過(guò)在疾病不同階段顯著改善CD3+CD4-CD8-T細(xì)胞達(dá)到抗炎作用。(4) CD3+CD4+T細(xì)胞亞群作為T(mén)輔助細(xì)胞,代表了免疫應(yīng)答的激活程度,在疏肝健脾固髓方治療后CD3+CD4+ T細(xì)胞絕對(duì)值比治療前有升高趨勢(shì),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.疏肝健脾固髓方對(duì)EAE炎癥因子的影響目的：觀察疏肝健脾固髓方對(duì)多發(fā)性硬化小鼠模型EAE血清炎癥因子的影響。方法：通過(guò)設(shè)立激素對(duì)照組、EAE模型組和疏肝健脾固髓方組。觀察疏肝健脾固髓方干預(yù)EAE后各炎癥因子的變化,利用高通量蛋白液相芯片檢測(cè)不同時(shí)間炎癥因子的變化,這些因子為：ⅠL-23、IL-17E/IL-25、GM-CSF、IL-12p70、IL-17F、IL-17A、TNF-a、 1FN-γ、IL-4、IL-10,探討疏肝健脾固髓方對(duì)EAE炎癥因子的影響。結(jié)果：(1)本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用MOG35-55多肽片段誘導(dǎo)C57BL/6小鼠制備慢性遷延型動(dòng)物模型,并觀察了其完整的病程變化,并且觀察到了復(fù)發(fā)緩解的現(xiàn)象。(2)正常腦和脊髓組織中未見(jiàn)血管增生和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),EAE組脊髓組織切片可見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),血管增生并呈袖套樣改變等炎癥表現(xiàn),脊髓炎性反應(yīng)程度明顯較大腦嚴(yán)重。激素組和疏肝健脾固髓方組腦和脊髓組織切片可見(jiàn)微血管增生,但疏肝健脾固髓方組微血管增生更為明顯,且腦組織神經(jīng)細(xì)胞腫脹、呈空泡狀改變。(3)各組炎癥因子在不同時(shí)間的變化：EAE模型組各時(shí)間點(diǎn)之間比較均無(wú)顯著差異；疏肝健脾固髓方組各時(shí)間點(diǎn)之間均無(wú)顯著差異。激素組TNF-a的表達(dá)在4周時(shí)與0周時(shí)相比顯著降低(P=0.030,P0.05),其余各炎癥因子不同時(shí)間無(wú)顯著性差異。(4)在相同時(shí)間各組炎癥因子的變化：造模前(即0周)各炎癥因子在EAE組、激素組、疏肝健脾固髓方組之間,均無(wú)顯著性差異。在造模后4周TNF-a疏肝健脾固髓方組與激素組相比顯著升高(P=0.002,P0.05)。4周時(shí)IFN-y激素組與EAE組相比顯著降低(P=0.029,P0.05)。4周時(shí)IFN-y疏肝健脾固髓方組與EAE組相比顯著降低(P=0.021,P0.05),余炎癥因子無(wú)顯著變化。結(jié)論：(1)通過(guò)對(duì)EAE的長(zhǎng)期觀察,我們選擇造模后14天的EAE小鼠作為開(kāi)始藥物治療的時(shí)間點(diǎn)。并確定在4周時(shí)檢測(cè)TNF-α, IFN-γ作為檢測(cè)較為敏感的時(shí)間和指標(biāo)。(2)提示疏肝健脾固髓方和激素均通過(guò)抑制IFN-γ的表達(dá)產(chǎn)生抗炎作用。(3)提示激素可能通過(guò)降低TNF-α的表達(dá)產(chǎn)生抗炎作用。而疏肝健脾固髓方的抗炎機(jī)制可能與激素組不同,激素對(duì)TNF-α有所降低,而疏肝健脾固髓方對(duì)TNF-α有所升高,但它們的影響都較弱(它們與EAE組比較均無(wú)差異),提示TNF-α在EAE中的作用可能較為復(fù)雜。3.疏肝健脾固髓方治療多發(fā)性硬化的基因靶點(diǎn)研究目的：研究疏肝健脾固髓方治療多發(fā)性硬化疾病的基因靶點(diǎn)。方法：以Multiple sclerosis為疾病名稱,在OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)中查找與之相關(guān)的基因：基于疏肝健脾固髓方的藥物組成,在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中尋找相應(yīng)的靶點(diǎn),將經(jīng)DrugBank數(shù)據(jù)庫(kù)中驗(yàn)證的靶點(diǎn)予以保留,然后將疾病相關(guān)基因及各個(gè)藥方的靶點(diǎn)分別映射于STRING數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建,采用DAVID軟件對(duì)各個(gè)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行功能的富集分析,從KEGG Pathway角度,保留P0.05的結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步功能分析。結(jié)果：Tnf、Stat3、Vegfa、1117a 和 I12ra具有較高的網(wǎng)絡(luò)介數(shù)和網(wǎng)絡(luò)度,在多發(fā)性硬化相關(guān)基因網(wǎng)絡(luò)中有重要的地位。疏肝健脾固髓方作用靶基因T nf、Vegfa在多發(fā)性硬化相關(guān)基因中同時(shí)具有較高的介數(shù)和網(wǎng)絡(luò)度。結(jié)論：疏肝健脾固髓方作用靶基因與多發(fā)性硬化相關(guān)基因存在重疊,這些重疊基因很可能是上述方藥治療多發(fā)硬化的起效點(diǎn)。其中Tnf、Vegfa在多發(fā)性硬化相關(guān)基因中同時(shí)具有較高的介數(shù)和網(wǎng)絡(luò)度,提示這兩個(gè)靶基因可能是疏肝健脾固髓方治療多發(fā)性硬化的關(guān)鍵位點(diǎn)。
[Abstract]:Multiple sclerosis is a T cell mediated autoimmune diseases, inflammatory cytokines secreted by T cells in the implementation of the inflammatory process, clinical symptoms of relapse and remission occupy an important role. Shuganjianpi solid marrow side experience side clinical treatment of multiple sclerosis, the clinical study in the early stage of tips has a good effect. The purpose of this study was to observe effect of Shuganjianpi Decoction on solid spinal multiple sclerosis T cell subsets and inflammatory factors, and combined with the network to explore the pharmacological target in the treatment of multiple sclerosis.1. Shuganjianpi solid marrow Decoction on multiple sclerosis patients affected T cell subsets to before and after the multiple sclerosis T cell subsets changes of Shuganjianpi solid myeloid treatment. Methods: using the questionnaire of TCM Syndromes of TCM will characterize all patients with multiple sclerosis each visit were quantified, for all symptoms Frequency statistics, the characteristics of TCM Syndrome Study of multiple sclerosis. For all patients at each visit the T cell subsets in peripheral blood were detected by flowcytometry, the acute phase with corticosteroid therapy, were measured before and after treatment, stable period with Shuganjianpi Decoction in the treatment of spinal fixation, every 3 months a male and female patients. Results: the age of onset compared with no significant difference (P=0.493, P0.05), the number of male and female prevalence ratio is about 1:3, there was no significant difference in the sex ratio of all ages (x2.418, p=0.659, P0.05).MS in patients with nerve function characteristic of defect with the most common symptoms, limb numbness accounted for 66.7%; secondly paresthesia and limb weakness, the TCM symptoms of 60.3%.MS patients have symptoms for more than 50% have 3, respectively, lassitude, soreness and weakness of waist and knees (65.1%) (55.6%), depression (50.8%); the occurrence rate of symptoms in 40-50% 5, 鍒嗗埆涓烘睏澶，

本文編號(hào)：1467205