本文關(guān)鍵詞： COPD 病情綜合評估 JYⅡ號 炎癥反應(yīng) 抗炎　出處：《廣州中醫(yī)藥大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究目的：慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種呼吸系統(tǒng)常見的疾病,具有高發(fā)病率、高致死率和高致殘率特點(diǎn),給社會和患者帶來沉重負(fù)擔(dān)。目前COPD個(gè)體化治療逐漸得到共識,即對患者進(jìn)行治療前病情綜合評估,根據(jù)評估結(jié)果選擇合適的治療方案。本課題組前期研究只表明了健脾益肺Ⅱ號(JYⅡ號)的臨床療效,但未能根據(jù)病情綜合評估方法評價(jià)其對不同組別患者的臨床療效的側(cè)重點(diǎn)。同時(shí),其治療作用基礎(chǔ)尚不明確。基于以上所述,本課題研究旨在通過前期臨床療效的再分析和動物實(shí)驗(yàn)研究,明確JYⅡ號對病情評估后不同組別患者的臨床治療優(yōu)勢,并從炎癥角度探討其作用基礎(chǔ),從而更好地指導(dǎo)COPD I臨床個(gè)體化治療。研究方法：(1)臨床研究方面,根據(jù)2011年COPD全球倡議(修訂版)首次提出的病情綜合評估方法(本研究采用mMRC和氣流受限GOLD分級法),對本課題組2008.1-2009.10收集的263例COPD穩(wěn)定期患者進(jìn)行病情綜合評估,分為A、B、C、D組,觀察JYⅡ號對各組患者急性加重次數(shù)、肺功能、BODE指數(shù)、6分鐘步行距離(6MWD)、SGRQ、中醫(yī)證候計(jì)分等指標(biāo)的影響并對病例進(jìn)行ITT分析。(2)動物實(shí)驗(yàn)研究方面,將75只SD大鼠根據(jù)體重按照隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為五組,分別是正常組、模型組、JYⅡ號高劑量組(20g/kg/d)、JYⅡ號低劑量組(10g/kg/d)和氨茶堿組(60mg/kg/d),通過熏煙(8周)和脂多糖(LPS)滴入氣管法(2次)建立COPD模型大鼠,造模4周后予JYⅡ號和氨茶堿干預(yù)4周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,測定各組大鼠肺功能、觀察肺組織病理變化；酶鏈免疫吸附法測定肺組織和支氣管灌洗液中TNF-α、IL-6和IL-8水平；免疫組織化學(xué)法檢測肺組織中TNF-α表達(dá)；Western blot法觀察HDAC2蛋白、P38MAPK蛋白、磷酸化P38MAPK蛋白、NF-κB P65蛋白、IκB-α蛋白、磷酸化IκB-α蛋白在肺組織中的表達(dá)情況；Real time-PCR方法檢測肺組織中TNF-α蛋白酶體20SmRNA表達(dá)水平。研究結(jié)果：(1)臨床研究方面：①各組急性加重次數(shù)變化情況：與對照組相比,D組中治療組患者治療后的急性加重次數(shù)減少(P＜0.01),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②各組6分鐘步行距離變化情況：與對照組相比,B組中治療組患者治療后、隨訪后6MWD增加(P0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與治療前相比,四組中治療組患者治療后的6MWD均上升(P＜0.05),均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與治療前相比,C組中對照組患者治療后的6MWD下降(F=6.96,P=0.03＜0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,與治療后相比,B組中對照組患者隨訪后的6MWD下降(P＜0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③各組中醫(yī)證候計(jì)分變化情況：與對照組相比,A組中治療組患者隨訪后、C組中治療組患者隨訪后和治療后及D組中治療組患者隨訪后的中醫(yī)證候計(jì)分下降(P＜0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與治療前相比,四組中治療組和對照組患者治療后的中醫(yī)證候計(jì)分下降(P＜0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。④各組SGRQ變化情況：與對照組相比,D組中治療組患者治療后的SGRQ下降(P＜0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與治療前相比,四組中治療組患者治療后的SGRQ下降(P＜0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與治療前相比,A、B、D組中對照組患者治療后的SGRQ下降(P＜0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,與治療后相比,A、B組中對照組患者隨訪后的SGRQ下降(P＜0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)動物實(shí)驗(yàn)研究方面：①大鼠體重變化情況：與正常組相比,模型組體重減輕(P＜0.05),實(shí)驗(yàn)前后體重差值減小(P＜0.05),無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組相比,藥物干預(yù)組的體重和實(shí)驗(yàn)前后體重差值無明顯差異(P＞0.05),無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②肺功能指標(biāo)：與正常組相比,模型組大鼠TLC指標(biāo)升高(P＜0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組相比,藥物干預(yù)組TLC指標(biāo)無明顯差異(P＞0.05),無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與正常組相比,模型組大鼠RI和FEV0.1/FVC無明顯差異(P＞0.05),無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組相比,藥物干預(yù)組RI和FEV0.1/FVC無明顯差異(P＞0.05),無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③肺組織HE染色：與正常組相比,模型組大鼠支氣管粘膜上皮腫脹、紊亂,杯狀細(xì)胞增多,周圍淋巴細(xì)胞浸潤,肺泡壁變薄,肺泡腔明顯擴(kuò)大,部分肺泡融合形成肺大泡。藥物干預(yù)組較模型組肺組織病理損害有所改善。④肺組織及肺泡灌洗液中炎癥因子表達(dá)：與正常組相比,模型組大鼠肺組織中的TNF-α/IL-6、IL-8含量均升高(P＜0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與模型組相比,JYⅡ-H組和氨茶堿組大鼠肺組織中的TNF-α、IL-6、IL-8含量降低(P＜0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與模型組相比,JYⅡ-L組肺組織中的TNF-α、IL-6、IL-8含量無明顯差異(P＞0.05),無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與正常組相比,模型組BALF中TNF-α含量升高(P＜0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與模型組相比,JYⅡ-H和氨茶堿可使BALF中的TNF-α含量降低(P＜0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,JYα-L對BALF中的TNF-α含量影響作用不顯著(P＞0.05),無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑤免疫組化結(jié)果：正常大鼠肺組織內(nèi)大氣道上皮細(xì)胞TNF-α表達(dá)水平較低,而模型組則為強(qiáng)陽性表達(dá),氣道上皮細(xì)胞出現(xiàn)大量的棕褐色顆粒。JYⅡ號組和氨茶堿組呈陽性表達(dá),氣道上皮細(xì)胞表現(xiàn)為棕黃色顆粒。與正常組相比,模型組肺組織中TNF-α表達(dá)水平增加(P＜0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與模型組相比,JYⅡ-H和氨茶堿可使肺組織中TNF-α表達(dá)水平降低(P＜0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而JYⅡ-L對肺組織中TNF-α表達(dá)水平影響作用不顯著(P＞0.05),無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑥Western blot和Real time-PCR結(jié)果示：與正常組相比,模型組大鼠肺組織P38蛋白、p-P38蛋白表達(dá)及兩者比值均升高,NF-κB P65蛋白表達(dá)增加,IκB-α蛋白表達(dá)減少,p-IκB-α蛋白表達(dá)增加,p-IκB/IκB比值增大,HDAC2蛋白表達(dá)降低,P＜0.05,均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組相比,藥物干預(yù)組P38蛋白表達(dá)無顯著差異(P＞0.05),無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組相比,JYⅡ-H組和氨茶堿組p-P38蛋白表達(dá)和p-P38/P38比值均降低,NF-κB P65蛋白表達(dá)減少,IκB-α蛋白表達(dá)增加,P-I κB-α蛋白表達(dá)減少,p-I κ B/I κ B比值減小,HDAC2蛋白表達(dá)升高,P＜0.05,存在著顯著差異,與模型組相比,JYⅡ-L組p-P38蛋白、NF-κ B P65蛋白、I κB-α蛋白、p-IκB-α蛋白、HDAC2蛋白表達(dá)及p-I κB/IκB比值、p-P38/P38比值無明顯差異(P＞0.05),無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與正常組相比,模型組蛋白酶體20S mRNA和TNF-α mRNA表達(dá)水平升高(P＜0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與模型組相比,JYⅡ-H組蛋白酶體20S mRNA表達(dá)水平降低(P＜0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而JYⅡ-L組和氨茶堿組蛋白酶體20S mRNA表達(dá)水平無明顯差異(P＞0.05),無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與模型組相比,JYⅡ-H組和氨茶堿組TNF-α mRNA表達(dá)水平降低(P＜0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,JYⅡ-L組TNF-α mRNA表達(dá)水平無明顯差異(P＞0.05),無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究結(jié)論：(1)臨床研究方面：JYⅡ號對高風(fēng)險(xiǎn)的COPD患者療效顯著,一方面改善C組患者臨床癥狀,另一方面提高D組患者生活質(zhì)量；對低風(fēng)險(xiǎn)的COPD患者作用表現(xiàn)為改善A組患者的臨床癥狀,提高B組患者運(yùn)動耐力。(2)動物實(shí)驗(yàn)研究方面：①香煙煙熏(8周)及LPS氣管內(nèi)滴入(2次)可誘導(dǎo)大鼠發(fā)生COPD病理改變和炎癥反應(yīng)。炎癥反應(yīng)參與了COPD的發(fā)生發(fā)展過程。②P38MAPK信號通路、NF-κB信號通路和HDAC2蛋白共同介導(dǎo)了COPD炎癥反應(yīng),合成多種炎性細(xì)胞因子,參與了COPD的發(fā)生發(fā)展過程；同時(shí)蛋白酶體20S參與了NF-κB信號通路的激活,HDAC2蛋白表達(dá)減少可能間接促進(jìn)了NF-κB信號通路介導(dǎo)炎癥因子的轉(zhuǎn)錄。③JYⅡ號對COPD炎癥反應(yīng)有一定的抑制作用,可能是通過抑制P38MAPK信號通路和NF-κB信號通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)實(shí)現(xiàn)的,同時(shí)JYⅡ號還可增強(qiáng)HDAC2蛋白表達(dá),減少蛋白酶體20S基因轉(zhuǎn)錄,間接抑制NF-κB信號通路的激活。(3)以健脾為中心的扶正補(bǔ)益類中藥復(fù)方亦可能通過抗炎作用治療COPD穩(wěn)定期的慢性炎癥。
[Abstract]:The aim of this study was to evaluate the clinical efficacy of JY 鈪，

本文編號：1454873