本文關(guān)鍵詞：桑柏生發(fā)方在毛發(fā)再生過程中對(duì)VEGF等細(xì)胞因子的影響　出處：《南京中醫(yī)藥大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的：以名老中醫(yī)驗(yàn)方桑柏生發(fā)方為研究對(duì)象,觀察桑柏生發(fā)方不同提取液對(duì)毛發(fā)再生過程中血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、白細(xì)胞介素1β(interleukin-1 beta, IL-1β)以及腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)的影響,以期探索其生發(fā)的作用機(jī)制,為方劑的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：臨床收集毛發(fā)移植手術(shù)患者枕部頭皮完整毛囊進(jìn)行毛乳頭細(xì)胞的分離和培養(yǎng),取4-6代人毛乳頭細(xì)胞轉(zhuǎn)孔板培養(yǎng),分為四組：桑柏生發(fā)方水提液干預(yù)組,桑柏生發(fā)方醇提液干預(yù)組,陽性對(duì)照組藥物選用2%米諾地爾,空白對(duì)照組不加藥刺激；以四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法測定體外培養(yǎng)的人毛乳頭細(xì)胞的增殖活性；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA法)檢測細(xì)胞上清液VEGF、IL-1β和 TNF-α三種細(xì)胞因子的含量；反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)半定量檢測細(xì)胞VEGF、IL-1β和 TNF-α mRNA表達(dá)；PI染色流式檢測毛乳頭細(xì)胞周期分布的變化；Annexin/PI染色流式檢測細(xì)胞分組間凋亡水平的變化；免疫熒光流式細(xì)胞術(shù)檢測人毛乳頭細(xì)胞IL-1 β受體、TNF-α受體及VEGF受體表達(dá)水平。結(jié)果：建立完善的體外培養(yǎng)毛乳頭細(xì)胞技術(shù)體系,通過MTT檢測結(jié)果得到桑柏生發(fā)方水提液和醇提液刺激人毛乳頭細(xì)胞增殖的最佳濃度分別為0.7g/1和1g/l。 ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與空白對(duì)照組相比,桑柏生發(fā)方水提液組和桑柏生發(fā)方醇提液組均能促進(jìn)人毛乳頭細(xì)胞分泌VEGF (P0.05, P0.01);與陽性對(duì)照組相比,桑柏生發(fā)方水提液刺激細(xì)胞分泌VEGF的作用與之相當(dāng)(P0.05),桑柏生發(fā)方醇提液組能顯著促進(jìn)人毛乳頭細(xì)胞分泌VEGF (P0.05)。與空白對(duì)照組相比,桑柏生發(fā)方水提液組能抑制細(xì)胞分泌IL-1 β(P0.05),醇提液組和陽性對(duì)照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)；與陽性對(duì)照組相比,水提液組能顯著抑制IL-1 β的分泌(P0.05),醇提液組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。與空白對(duì)照組相比,水提液組與醇提液組均能促進(jìn)TNF-α的分泌與表達(dá)(P0.01,P0.05)；與陽性對(duì)照組對(duì)比,桑柏生發(fā)方水提液組與醇提液組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。RT-PCR結(jié)果提示：與空白對(duì)照組相比,桑柏生發(fā)方醇提液組VEGFmRNA表達(dá)量顯著提高(P0.01),桑柏生發(fā)方水提液組VEGFmRNA表達(dá)量與陽性對(duì)照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)；與陽性對(duì)照組相比,桑柏生發(fā)方醇提液提高VEGFmRNA的表達(dá)能力顯著(P0.01)。與空白對(duì)照組相比,桑柏生發(fā)方水提液組與桑柏生發(fā)方醇提液組均能抑制IL-1β mRNA表達(dá)(P0.01);與陽性對(duì)照組相比,桑柏生發(fā)方水提液組和醇提液組抑制IL-1β mRNA表達(dá)能力無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。與空白對(duì)照組相比,桑柏生發(fā)方水提液組對(duì)TNF-α mRNA表達(dá)無影響(P0.05),桑柏生發(fā)方醇提液組能促進(jìn)TNF-α mRNA的表達(dá)(P0.05)；與陽性對(duì)照組對(duì)比,水提液組和醇提液組無差異(P0.05)。細(xì)胞周期與凋亡檢測結(jié)果顯示桑柏生發(fā)方提取液能顯著減少細(xì)胞凋亡,幫助休眠期細(xì)胞重新進(jìn)入生長期,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。流式細(xì)胞表面受體實(shí)驗(yàn)提示：與空白對(duì)照組相比,桑柏生發(fā)方水提液組能促進(jìn)細(xì)胞表面表達(dá)VEGFR的水平(P0.05),桑柏生發(fā)方醇提液組與陽性對(duì)照組細(xì)胞表面表達(dá)VEGFR的水平無差異(P0.05)；與陽性對(duì)照組相比,水提液組能明顯促進(jìn)細(xì)胞表面VEGFR表達(dá)(P0.05),醇提液組無差異(P0.05)；與空白組對(duì)比,桑柏生發(fā)方水提液組、桑柏生發(fā)方醇提液組和陽性對(duì)照組均能抑制人毛乳頭細(xì)胞表面IL-1R的表達(dá)(P0.05)；與陽性對(duì)照組相比,水提液組與醇提液組對(duì)人毛乳頭細(xì)胞表面IL-1β受體表達(dá)的抑制能力無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)；與空白對(duì)照組相比,桑柏生發(fā)方醇提液組能促進(jìn)人毛乳頭細(xì)胞表面TNF-αR的表達(dá)(P0.05),桑柏生發(fā)方水提液組和陽性對(duì)照組對(duì)細(xì)胞表面TNF-αR的影響能力不明顯(P0.05)；與陽性對(duì)照組相比,醇提液組顯著促進(jìn)TNF-αR的表達(dá)(P0.05),水提液組與陽性對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論：桑柏生發(fā)方可能是通過促進(jìn)人毛乳頭細(xì)胞合成和分泌VEGF、促進(jìn)毛囊進(jìn)入遺傳物質(zhì)和蛋白質(zhì)的合成期以及抑制毛乳頭細(xì)胞進(jìn)入早期凋亡達(dá)到刺激人毛乳頭細(xì)胞增殖、促進(jìn)毛發(fā)新生的作用；通過抑制炎癥因子IL-1β的合成和分泌達(dá)到抑制局部炎癥反應(yīng)、促進(jìn)修復(fù)受損毛囊作用；通過促進(jìn)TNF-α的合成和分泌達(dá)到保護(hù)毛囊的作用。
[Abstract]:Objective : To investigate the effects of different extracts of mulberry bark on vascular endothelial growth factor ( VEGF ) , interleukin - 1尾 ( IL - 1尾 ) and tumor necrosis factor - 偽 ( TNF - 偽 ) in hair regeneration by means of MTT assay . Compared with the control group , there was no significant difference in the expression of VEGF mRNA ( P0.05 ) . Compared with the control group , there was no statistical difference between the aqueous extract group and alcohol extract group ( P0.05 ) . Compared with the control group , there was no statistical difference between the aqueous extract group and the alcohol extract group ( P0.05 ) . Compared with the positive control group , the expression of TNF - 偽R in human hair papilla cells was not significantly different between the aqueous extract group and the positive control group ( P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R275

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1361360