本文關鍵詞：藏藥螃蟹甲對四氯化碳誘導大鼠肝損傷保護作用的研究

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【摘要】：目的1.從螃蟹甲藥材中提取分離與富集總苯乙醇苷,并對總苯乙醇苷作定性及定量分析。2.對螃蟹甲藥材的不同提取部位進行保肝藥效學實驗研究,通過觀察螃蟹甲不同提取部位的藥液對CCl4誘導肝損傷大鼠轉(zhuǎn)氨酶(AST,ALT)水平的影響,篩選出螃蟹甲藥材產(chǎn)生保肝活性的主要有效成分。3.研究螃蟹甲總苯乙醇苷在四氯化碳誘導的肝損傷大鼠體內(nèi)是否能夠發(fā)揮保肝作用及其作用機理。方法1.運用D101型大孔吸附樹脂,從螃蟹甲藥材中提取與富集苯乙醇苷類化合物,選用UV光譜法對其進行定性及定量分析。2.將已經(jīng)飼養(yǎng)一周的Wistar大鼠70只,雌性,隨機分為螃蟹甲25%乙醇洗脫物組、螃蟹甲50%乙醇洗脫物組(200 mL.kg-1)、螃蟹甲水洗脫部位(200 mg.kg-1)、螃蟹甲水提物(200 mL.kg-1)、陽性對照(聯(lián)苯雙酯)200 mL.kg-1及正常對照組(給予生理鹽水),連續(xù)灌胃給藥7 d,第6天正常組腹腔注射橄欖油,其余組腹腔注射15%CCl4橄欖油溶液0.25 mL/200 g(1.25 mL.kg-1)。第6天染毒后2 h及22 h各灌胃一次,觀察大鼠的身體狀態(tài),末次灌胃1 h后眼眶靜脈叢采血0.5 mL于離心管,靜置30min,4500 r·min-1離心10 min,分離血清,稀釋,生化檢測儀檢測各組大鼠的肝功能指標(AST、ALT)。3.60只Wistar大鼠,雌鼠,隨機分為正常組,模型組,聯(lián)苯雙酯組(聯(lián)苯雙酯滴丸100 mL.kg-1),螃蟹甲大孔吸附樹脂50%乙醇洗脫物高,中,低劑量組(400,200,50 mL.kg-1),連續(xù)灌胃給藥4 d,正常組和模型組均給予純化水,第3天給藥1 h后,腹腔注射15%CCl4橄欖油0.25 mL/200 g,正常組腹腔注射橄欖油0.25mL/200 g,染毒2,22 h后再次給藥,末次給藥1 h后,眼眶靜脈叢采血,生化檢測儀測血清中ALT,AST,MDA,SOD水平,處死大鼠剖取肝臟,測肝指數(shù)及肝組織勻漿液中MDA,SOD,谷胱甘肽還原酶(GSH)含量,做肝臟組織病理學檢查。結(jié)果1.根據(jù)課題組前期對螃蟹甲化學成分研究基礎,進一步優(yōu)化d101型大孔吸附樹脂從螃蟹甲水提取物中分離富集各類成分。200-400nm波長紫外掃描,結(jié)果表明大孔樹脂50%乙醇洗脫物(epy-50)與毛蕊花糖苷(acteoside)具有相似紫外掃描圖譜,都在波長為330nm處有相似的吸收峰,且結(jié)合課題組前期采用hplc色譜法從螃蟹甲藥材中分離并鑒定出3個苯乙醇苷類化合物,進一步推斷螃蟹甲藥材中大孔樹脂50%乙醇洗脫物(epy-50)的主要成分是苯乙醇苷類。經(jīng)d101大孔吸附樹脂富集后的螃蟹甲藥材中總苯乙醇苷含量由水提取物中的1.6%提高到21.6%,含量提高了13.5倍。2.螃蟹甲活性篩選實驗表明,與模型組和其他組比較,螃蟹甲總苯乙醇苷能明顯降低ccl4中毒引起的化學性肝損傷大鼠血清中ast和alt的水平(p0.05或p0.01)。3.螃蟹甲總苯乙醇苷保肝機制探究結(jié)果表明,相對于正常組,模型組大鼠血清中ast,alt水平顯著增加(p0.01),肝組織勻漿液中mda含量明顯升高(p0.05),sod,gsh含量明顯降低(p0.05),肝臟指數(shù)顯著增加(p0.01),顯示造模方法較好。與模型組比較,螃蟹甲苯乙醇苷高,中劑量組能顯著降低肝損傷大鼠血清中ast,alt水平(p0.05,p0.01),并顯著減少肝組織中mda含量,提高sod,gsh含量,降低肝指數(shù),改善肝組織病理狀態(tài)。結(jié)論1.d101大孔樹脂能夠成功實現(xiàn)螃蟹甲中總苯乙醇苷的富集。2.本實驗選用ccl4誘導急性肝損傷模型,從實驗結(jié)果可以得出此種模型可以現(xiàn)在引起實驗動物血清中ast、alt水平和肝臟組織勻漿液中mda升高、sod、gsh含量降低、肝臟組織結(jié)構產(chǎn)生病變,是重復性較好的造模方法。以總苯乙醇苷為主要成分的螃蟹甲藥材50%乙醇洗脫物是螃蟹甲具有保肝作用的活性成分。螃蟹甲螃蟹甲總苯乙醇苷能夠顯著降低四氯化碳中毒大鼠血清中的ast,alt(p0.01),是其產(chǎn)生保肝作用的主要活性部位。3.螃蟹甲總苯乙醇苷針對ccl4誘導大鼠急性肝損傷的病理狀態(tài)產(chǎn)生了保護作用,其機制可能與苯乙醇苷類獨特的生物活性相關,抗氧化作用、清除氧自由基、抑制脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA的生成,并相對恢復SOD和GSH水平,使得過氧化與抗氧化體系恢復平衡狀態(tài),降低轉(zhuǎn)氨酶水平等可能是其產(chǎn)生護肝作用的關鍵。本研究結(jié)果為從螃蟹甲及其他含苯乙醇苷類成分的藥用植物中挖掘出具有保肝活性的天然藥物提供了研究基礎和思路。
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R29

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