發(fā)布時間：2016-09-28 15:28

  本文關(guān)鍵詞：天麻酚性成分對H_2O_2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《云南中醫(yī)學(xué)院》 2013年

天麻酚性成分對H_2O_2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用研究

文金隆  

【摘要】：目的：課題組前期研究證明天麻具有較強(qiáng)的抗腦缺血再灌注損傷作用，并提示其作用機(jī)制與抗氧化損傷有關(guān)，其活性為一組脂溶性酚性成分。本研究以H_2O_2誘導(dǎo)損傷PC12細(xì)胞為細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型，對天麻3個提取物和15份單體成分進(jìn)行活性篩選，探討天麻酚性成分對細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用，并初步探討其可能的作用機(jī)制。 方法： 1、采用RPMI-1640培養(yǎng)基、含10%FBS和0.4%雙抗的常規(guī)培養(yǎng)條件對PC12細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)、傳代和凍存，并以MTT法、細(xì)胞計數(shù)法和臺盼藍(lán)染色計數(shù)法繪制其生長曲線，初步掌握PC12細(xì)胞的體外生長增殖特性。 2、采用細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察和MTT法測定細(xì)胞存活率作為評價指標(biāo)，探討研究用H_2O_2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞氧化損傷模型的適宜濃度。 3、采用細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察和MTT法測定細(xì)胞存活率作為評價指標(biāo)，探討研究用依達(dá)拉奉對H_2O_2誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞氧化損傷模型的有效濃度。 4、采用細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察和MTT法測定細(xì)胞存活率作為評價指標(biāo)，評價天麻3個提取物和15份單體成分對H_2O_2誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞氧化損傷模型的保護(hù)作用。 5、采用DCFH-DA熒光探針法、LDH酶標(biāo)法、硫代巴比妥酸酶標(biāo)法和T-SOD羥胺法，評價天麻活性成分對H_2O_2誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞內(nèi)ROS水平、細(xì)胞外LDH活性、LDH泄漏率、細(xì)胞內(nèi)MDA含量和SOD活性的影響。 結(jié)果： 1、從MTT法繪制的生長曲線得出，在本實驗室96孔板常規(guī)培養(yǎng)的條件下，PC12細(xì)胞數(shù)量以100個/mL接種培養(yǎng)6d未達(dá)到平臺期，100000個/mL細(xì)胞接種3d即達(dá)到平臺期，適宜的細(xì)胞接種濃度為6000、8000和10000個/mL細(xì)胞，確定選擇8000個/mL細(xì)胞的接種濃度在25cm2培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，繪制培養(yǎng)瓶培養(yǎng)PC12細(xì)胞生長曲線。從細(xì)胞計數(shù)法和臺盼藍(lán)染色計數(shù)法繪制的生長曲線得出，以8000個/mL的細(xì)胞濃度接種在25cm2培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)到第4d長至約90%的覆蓋率，第5d時長滿，隨著細(xì)胞數(shù)量的不斷增多、生長空間減少，細(xì)胞發(fā)生接觸抑制和密度抑制。 2、40μmol·L~(-1)-80μmol·L~(-1)的H_2O_2可使PC12細(xì)胞數(shù)量逐漸減少，多數(shù)細(xì)胞突起收回，胞體變圓，部分變圓細(xì)胞成團(tuán)存在，胞體邊緣模糊，折光性減弱，貼壁能力降低；與正常組比較，40μmol·L~(-1)-80μmol·L~(-1)的H_2O_2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞存活率在18.6%-66.0%的損傷（P0.01），氧化損傷PC12細(xì)胞的H_2O_2適宜濃度范圍在40μmol·L~(-1)-80μmol·L~(-1)。 3、依達(dá)拉奉在0.918mmol·L~(-1)（160μg·mL~(-1)）給藥濃度下對50μmol·L~(-1)H_2O_2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的形態(tài)改善最為明顯。細(xì)胞存活率檢測結(jié)果：與正常組比較，50μmol·L~(-1)H_2O_2損傷PC12細(xì)胞2h后的模型組細(xì)胞存活率為26.9%（P0.01）；與模型組比較，依達(dá)拉奉在給藥濃度達(dá)到0.918mmol/L時提高細(xì)胞存活率10.9個百分點（P0.01）。 4、天麻3個提取物及15份單體中，天麻EtOAc（20μg·mL~(-1)）和8#（80μg·mL~(-1)）對50μmol·L~(-1)H_2O_2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的形態(tài)改善最為明顯。細(xì)胞存活率檢測結(jié)果：與模型組比較，天麻EtOAc（20μg·mL~(-1)）和8#（80μg·mL~(-1)）分別提高細(xì)胞存活率14.7和9.9個百分點（P0.01），1#和6#也提高細(xì)胞存活率（P0.05或P0.01），其同濃度結(jié)果重復(fù)性差。 5、天麻EtOAc和8#對H_2O_2誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞內(nèi)ROS水平、細(xì)胞外LDH活性、LDH泄漏率、細(xì)胞內(nèi)MDA含量和SOD活性測試結(jié)果表明，與模型組比較，天麻EtOAc（80μg·mL~(-1)）和8#（40、80μg·mL~(-1)）受試物組對細(xì)胞產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度降低差異明顯（P0.01）；天麻EtOAc （20、40、80μg·mL~(-1)）受試物組胞外的LDH活性明顯低于模型組（P0.05或P0.01），LDH泄漏率降低差異明顯（P0.05或P0.01），8#（40、80μg·mL~(-1)）受試物組胞外LDH活性明顯高于模型組（P0.05或P0.01），提高LDH泄漏率的差異明顯（P0.01）；天麻EtOAc（20、40、80μg·mL~(-1)）受試物組降低細(xì)胞內(nèi)MDA含量的趨勢明顯，其中40μg·mL~(-1)組降低細(xì)胞內(nèi)MDA含量的差異明顯（P0.05）；天麻EtOAc（20、40μg·mL~(-1)）和8#（20、40μg·mL~(-1)）受試物組提高細(xì)胞內(nèi)的T-SOD活性差異明顯（P0.01），天麻EtOAc和8#的80μg·mL~(-1)給藥組降低細(xì)胞內(nèi)T-SOD活性差異明顯（P0.01）。 結(jié)論： 1、在25cm2培養(yǎng)瓶中以8000個/mL（1600個/cm2）細(xì)胞懸液接種PC12細(xì)胞培養(yǎng)到第4d時的細(xì)胞最適宜細(xì)胞傳代、接種和凍存，其群體倍增時間介于12h至24h之間。 2、采用40μmol·L~(-1)-80μmol·L~(-1)的H_2O_2損傷PC12細(xì)胞2h可復(fù)制PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型。 3、依達(dá)拉奉對H_2O_2損傷PC12細(xì)胞2h造成氧化應(yīng)激損傷模型的較佳保護(hù)濃度為0.918mmol·L~(-1)（160μg·mL~(-1)）。 4、天麻酚性成分8#、1#、6#和天麻EtOAc提取物具有改善氧化損傷PC12細(xì)胞的形態(tài)，提高模型細(xì)胞存活率的作用。 5、天麻EtOAc提取物具有保護(hù)H_2O_2損傷后細(xì)胞膜的完整性、降低損傷后細(xì)胞內(nèi)ROS的水平、提高細(xì)胞內(nèi)SOD活性和抑制脂質(zhì)過氧化的作用；天麻酚性成分8#具有降低H_2O_2損傷后細(xì)胞內(nèi)ROS的水平和提高細(xì)胞內(nèi)SOD活性的作用，在所設(shè)劑量下不是通過保護(hù)細(xì)胞膜的完整性和降低脂質(zhì)過氧化作用發(fā)揮其抗氧化損傷的作用。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：云南中醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R285
【目錄】：

下載全文 更多同類文獻(xiàn)

CAJ全文下載

(如何獲取全文？ 歡迎：購買知網(wǎng)充值卡、在線充值、在線咨詢)

CAJViewer閱讀器支持CAJ、PDF文件格式

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 舒桂華;朱玲玲;徐向明;郭錫熔;李述庭;;丹參對缺氧缺血新生大鼠腦皮質(zhì)氧化還原因子-1蛋白和凋亡細(xì)胞的影響[J];新生兒科雜志;2005年06期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 王志平;孫紅斌;;氧自由基與缺血性卒中[J];西南軍醫(yī);2010年03期

2 吳士珍;賈振華;梁俊清;袁國強(qiáng);李娟;魏聰;;中藥抗缺氧損傷作用的研究進(jìn)展[J];遼寧中醫(yī)雜志;2010年01期

3 張翠英;王雅莉;魏志萍;丁少芳;;腦苷肌肽、復(fù)方丹參聯(lián)合應(yīng)用治療新生兒缺氧缺血性腦病的臨床療效觀察[J];青海醫(yī)藥雜志;2007年12期

4 張春霞;胡利民;康立源;劉利萍;郭虹;;腦缺血氧化應(yīng)激損傷及中藥拮抗作用研究進(jìn)展[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2007年12期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 吳士珍;通心絡(luò)對動物缺氧耐受力及血管內(nèi)皮功能影響的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2009年

【二級參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳惠金,周建德,周澤漢,周偉,吳圣楣;新生大鼠腦缺氧缺血損傷模型的制備[J];上海實驗動物科學(xué);1999年03期

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳靜,唐小卿,胡志蘋,潘淵明,馮鑒強(qiáng),鐘女奇,余惠旻,陳培熹;姜黃素對MPP~+誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡的影響[J];中國藥理學(xué)通報;2005年03期

2 季清洲,茹柄根;神經(jīng)生長抑制因子在體外可抑制嗜鉻細(xì)胞瘤株P(guān)C12[J];科學(xué)通報;2001年19期

3 魏東,萬琪,孫文萍,李珂,張瑞國;缺血再灌注損傷中PC12細(xì)胞胞質(zhì)Ca~(2+)濃度變化和NF-κB的表達(dá)[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2004年12期

4 胡建國,富賽里,李瑩,徐曉明,陸佩華;GAP-43干擾RNA表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2005年06期

5 康靜瓊,阮旭中,王開顏,王偉,張?zhí)K明,朱遂強(qiáng);c-fos反義寡核苷酸對谷氨酸誘導(dǎo)PC12及海馬神經(jīng)元凋亡的影響[J];卒中與神經(jīng)疾病;2001年04期

6 寧玉萍,李寶芹,謝安木,王玉凱,劉焯霖;parkin基因的表達(dá)與PC12細(xì)胞凋亡的關(guān)系[J];中華神經(jīng)科雜志;2004年04期

7 王澤劍,陳紅專,陸陽;人參炔醇對神經(jīng)細(xì)胞的營養(yǎng)和保護(hù)作用[J];中國藥學(xué)雜志;2005年14期

8 張磊;陳秋惠;常明;侯澍;李紅杰;樸燕潔;胡林森;;蛋白酶體抑制劑誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡作用的研究[J];中國老年學(xué)雜志;2006年12期

9 李朝暉;王芬;劉水平;劉艷艷;競花蘭;;過氧化氫誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的模型的建立[J];法醫(yī)學(xué)雜志;2007年03期

10 周進(jìn);羅曉光;張朝東;;Transwell培養(yǎng)體系中受損PC12細(xì)胞促進(jìn)骨髓間質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化(英文)[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2007年37期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 黃小平;劉曉丹;鄧常清;;黃芪總苷和三七總皂苷的有效成分配伍方對PC12細(xì)胞氧化損傷模型細(xì)胞凋亡和活性氧、線粒體膜電位的影響[A];中南地區(qū)第八屆生理學(xué)學(xué)術(shù)大會論文摘要匯編[C];2012年

2 張華;晏寧;代政偉;孟濤;晏勇;;胰島素樣生長因子-1對PC12細(xì)胞β-淀粉樣前體蛋白裂解酶1的影響[A];2011全國老年癡呆與衰老相關(guān)疾病學(xué)術(shù)會議第三屆山東省神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師（學(xué)術(shù)）論壇論文匯編[C];2011年

3 洪浩;劉國卿;;燈盞乙素對氧化應(yīng)激誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[A];中國藥理學(xué)會制藥工業(yè)專業(yè)委員會第十一屆學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2004年

4 王媛媛;張琦;彭洋;吳艷娜;宋君秋;劉艷霞;;卡托普利抗高糖誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞氧化損傷作用及其作用機(jī)制[A];中國藥理學(xué)會第十一次全國學(xué)術(shù)會議�？痆C];2011年

5 陸茵;趙萬洲;常在;陳文星;;葡萄籽原花青素抑制致癌物所致細(xì)胞氧化和DNA損傷的保護(hù)作用[A];2003全國中青年藥理學(xué)英文學(xué)術(shù)報告會論文摘要匯編[C];2003年

6 張衛(wèi)芳;胡長平;;Selaginellin保護(hù)高糖誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷和凋亡[A];傳承與發(fā)展，，創(chuàng)湖南省生理科學(xué)事業(yè)的新高——湖南省生理科學(xué)會2011年度學(xué)術(shù)年會論文摘要匯編[C];2011年

7 王洪彬;王瀟;王海龍;鄧玉林;;PC12細(xì)胞重離子輻射生物學(xué)效應(yīng)的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究[A];全國生物醫(yī)藥色譜學(xué)術(shù)交流會（2010景德鎮(zhèn)）論文集[C];2010年

8 ;自噬改變在錳誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞毒性中的作用[A];中國毒理學(xué)會第三屆中青年學(xué)者科技論壇暨2011年全國前列腺藥理毒理學(xué)研討會論文集[C];2011年

9 鄒莉波;王力華;紀(jì)雪飛;楊柏珍;遲天燕;汪毅;魏末;;文冠果殼苷對同型半胱氨酸誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究[A];2011全國老年癡呆與衰老相關(guān)疾病學(xué)術(shù)會議第三屆山東省神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師（學(xué)術(shù)）論壇論文匯編[C];2011年

10 陳雪梅;鄒飛;陳斯?jié)?羅炳德;萬為人;王斌;;Hsp90在細(xì)胞氧化應(yīng)激耐受中的作用[A];中國生理學(xué)會第六屆應(yīng)用生理學(xué)委員會全國學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2003年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 快樂時光;[N];中國計算機(jī)報;2002年

2 劉佚;[N];農(nóng)村醫(yī)藥報（漢）;2007年

3 柴巍中;[N];健康報;2007年

4 ;[N];中國計算機(jī)報;2002年

5 邱邱;[N];電腦報;2002年

6 本期專家：阿龍 Bill;[N];電腦報;2003年

7 古維康;[N];健康報;2006年

8 辛冰、孟繁修;[N];中國計算機(jī)報;2002年

9 楊簡;[N];北京科技報;2004年

10 劉暢;[N];中國中醫(yī)藥報;2007年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 郭春燕;幾種中藥活性成分對H_2O_2誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞氧化損傷的影響及其機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

2 蔣紅;硫酸黏菌素誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

3 肖海兵;丙炔苯丙胺對MPP~+誘導(dǎo)的帕金森病PC12細(xì)胞模型的保護(hù)機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2011年

4 肖海兵;丙炔苯丙胺對MPP~+誘導(dǎo)的帕金森病PC12細(xì)胞模型的保護(hù)機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2011年

5 莫鎮(zhèn)濤;β-細(xì)辛醚對缺糖缺氧PC12細(xì)胞自噬的影響[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2012年

6 張付;甲基苯丙胺對PC12細(xì)胞的毒性損傷、蛋白質(zhì)硝基化、L-257抗損傷等作用的機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

7 劉炎;Grp75細(xì)胞保護(hù)效應(yīng)的機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2003年

8 郭麗萍;胰島素可抵抗MPP～+誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞的凋亡及其機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

9 劉莉;幾種小分子對NGF誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞軸突生長作用的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2012年

10 陸嫻婷;典型有機(jī)磷和擬除蟲菊酯對PC12胞毒性的氧化應(yīng)激機(jī)制及對映體選擇性[D];浙江大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊娟;白藜蘆醇對同型半胱氨酸誘導(dǎo)PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激保護(hù)作用的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2012年

2 文金隆;天麻酚性成分對H_2O_2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用研究[D];云南中醫(yī)學(xué)院;2013年

3 朱婷鴿;尿酸減輕6-OHDA介導(dǎo)PC12細(xì)胞氧化損傷作用機(jī)制的研究[D];蘇州大學(xué);2011年

4 劉曉丹;黃芪總苷有效成分和三七總皂苷有效成分配伍抗PC12細(xì)胞氧化損傷作用的研究[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2012年

5 曹霞飛;白藜蘆醇對甲醛誘導(dǎo)PC12細(xì)胞氧化損傷的影響[D];南華大學(xué);2010年

6 王艷;天麻素對脂多糖誘導(dǎo)PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激保護(hù)作用的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2012年

7 張白帆;自噬在酒精致PC12細(xì)胞損傷中的保護(hù)作用[D];河南大學(xué);2012年

8 周清;Exendin-4對甲基乙二醛誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

9 徐玲;6-氟基丁基苯酞對H_2O_2誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];河南大學(xué);2010年

10 王媛媛;卡托普利抗高糖誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞氧化損傷作用及其作用機(jī)制的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2011年

  本文關(guān)鍵詞：天麻酚性成分對H_2O_2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：125607