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基于NF-κB信號通路及miRNA155探討新風膠囊改善強直性脊柱炎活動期患者血瘀狀態(tài)的機制

發(fā)布時間:2017-11-18 15:22

  本文關鍵詞:基于NF-κB信號通路及miRNA155探討新風膠囊改善強直性脊柱炎活動期患者血瘀狀態(tài)的機制


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【摘要】:1目的觀察強直性脊柱炎(AS)活動期患者血瘀狀態(tài)相關指標變化,AS活動期患者外周血腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-4、IL-10、IL-17、核因子(NF-κB)信號通路相關指標、mi RNA155表達變化,及中藥新風膠囊(XFC)對上述指標的影響,探討XFC對AS活動期患者血瘀狀態(tài)作用機制。2方法2.1理論研究通過對強直性脊柱炎活動期患者血液狀態(tài)的基礎理論及其與脾腎關系的分析,闡明AS活動期患者血瘀狀態(tài)基本病因病機,為AS活動期患者血瘀狀態(tài)從脾腎論治提供一定的理論依據。2.2臨床研究將60例強直性脊柱炎活動期患者按隨機數字表法分為研究組(新風膠囊組)和對照組(柳氮磺吡啶組)各30例。新風膠囊組服用新風膠囊(XFC),每日3次,每次3粒,連續(xù)服用12周;柳氮磺吡啶組服用柳氮磺吡啶(SASP),每次4片,每天2次,療程同XFC組。采用Sysmex K-4500型全自動血液分析儀檢測血小板(PLT)、凝血常規(guī);采用ELISA檢測AS活動期患者外周血血清中血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列環(huán)素F1(6-keto-PGF1)、血小板顆粒膜蛋白-140(GMP140)、血小板活化因子(PAF)、血管內皮生長因子(VEGF)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-4、IL-10、IL-17、核因子激活劑(Act1),NF-κB抑制蛋白(IκBα),IκB激酶(IKKβ),核因子p65(NF-κBp65)和核因子p50(NF-κBp50)。采用實時熒光定量PCR(RT-PCR)檢測Act1、IκBα、IKKβ、NF-κBp65、NF-κBp50 m RNA變化,采用蛋白免疫印跡法(Western blotting)檢測NF-κBp65、NF-κBp50表達。采用一步法實時熒光定量PCR檢測試劑盒檢測mi RNA155。采用魏氏法測定血沉(ESR),采用日立7060型全自動生化分析儀檢測C反應蛋白(CRP),同時觀察AS患者臨床癥狀體征及中醫(yī)癥狀積分、血瘀癥狀積分及生活質量的變化。采用SPSS19.0統計軟件分析,比較兩組治療后的療效及治療前后相關指標變化情況。3結果3.1理論研究結果3.1.1強直性脊柱炎血瘀理論研究瘀血是“痹證”重要的致病特點,故痹前已有瘀,無瘀不成痹,瘀久必成痹;另強直性脊柱炎病程較長,久病邪入經絡,故“久痹必瘀”。故“痹”與“瘀”密不可分。寒、濕、痰、熱等邪均可致痹,脾腎虧虛也可致瘀,故AS血瘀狀態(tài)的病因當歸為邪實(風、寒、濕、痰、瘀等)和正虛(多為腎脾虧虛)兩個方面,F代研究認為AS血瘀形成的基礎主要與微循環(huán)障礙(血流緩慢、紅細胞聚集)、血液流變學異常(纖維蛋白原、紅細胞壓積等增高)、凝血-纖溶系統失衡(血小板聚集和活化、GMP140等)、血管內皮細胞(血管內皮細胞、血小板活化因子、VEGF等)有關。3.1.2從脾腎論治強直性脊柱炎血瘀療效確切“痹”與“瘀”互為因果,互相影響,且與脾腎密切相關。鑒于此,治療強直性脊柱炎血瘀時當注意重視健脾補腎、活血通絡。健脾一方面使氣血生化有源,填補腎精,扶助正氣以祛邪,另一方面可助血運行,改善血瘀;“祛瘀生新”,而活血通絡可使?jié)、痰、瘀?邪去有路,“邪去不傷正”,F代研究也發(fā)現從脾腎論治AS血瘀臨床療效確切。3.2臨床研究結果3.2.1AS組PLT、凝血常規(guī)變化與正常范圍[(125-300)×109/L]相比,AS組PLT比正常范圍高的共45人,占整個AS組的75%;纖維蛋白原(FBG)比正常范圍[(2-4)g/L]高的有40人,占整個AS組的66.7%;D-D二聚體(D-D)比正常范圍[(0-0.55)mg/L]高的有37人,占整個AS組的61.7%;PLT、FBG、D-D三者平均異常率為67.7%。按照上述方法發(fā)現部分凝血酶時間(PT)、活化的凝血酶時間(APTT)、凝血酶時間(TT)異常率分別為8.3%、6.7%、5%,此三者的平均異常率為6.7%。3.2.2AS組凝血-纖溶相關指標及NF-κB信號通路相關指標變化與正常組相比,AS組血清中TXB2、GMP140、PAF、VEGF、TNF-α、IL-17、Act1、IκBα、IKKβ、NF-κBp65、NF-κBp50的含量明顯升高,6-keto-PGF1、IL-4、IL-10含量明顯降低。與正常組相比,AS活動期患者IκBα、NF-κBp65、NF-κBp50 m RNA明顯升高。與正常組相比,AS活動期患者NF-κBp65、NF-κBp50蛋白表達明顯升高。3.2.3AS組mi RNA155表達及與疾病相關性分析與正常組相比,AS活動期患者mi RNA155呈高表達,且與TNF-α、ESR、NF-κBp65呈正相關。3.2.4AS組凝血-纖溶指標與NF-κB信號通路/mi RNA155的相關性AS組PLT與TNF-α、IL-17、NF-κB p65呈正相關,FBG與NF-κBp50呈正相關,D-D與mi RNA155呈正相關,TXB2與IL-17、NF-κB p65呈正相關,GMP140與NF-κBp65呈正相關,VEGF與mi RNA155呈正相關。3.2.5 AS組凝血-纖溶指標與活動性、臨床癥狀體征的相關性分析AS組PLT、D-D與ESR、BASDAI呈正相關,TXB2與BASDAI呈正相關,GMP140與ESR呈正相關,VEGF與VAS、BASDAI呈正相關。3.2.6AS組凝血-纖溶指標與中醫(yī)癥狀積分的相關性分析相關性分析結果顯示AS組PLT與脊背疼痛、腰脊受限、中醫(yī)癥狀總積分呈正相關,FBG與脊背疼痛呈正相關,D-D與腰膝酸軟、中醫(yī)癥狀總積分呈正相關,GMP140與腰脊受限、肢體困重呈正相關,VEGF與中醫(yī)癥狀總積分呈正相關。3.2.7 AS組凝血-纖溶指標與血瘀癥狀積分的相關性分析AS組PLT與關節(jié)刺痛、血瘀癥狀總積分呈正相關,FBG與血瘀癥狀總積分呈正相關。3.3新風膠囊臨床療效XFC組BASDAI50顯著高于SASP組。XFC組中醫(yī)癥候療效總有效率為83.3%,顯著高于SASP組。3.4新風膠囊對AS活動期患者具有以下作用新風膠囊顯著降低PLT、FBG、D-D、TXB2、GMP140、PAF、VEGF、IL-17,升高6-keto-PGF1、IL-4、IL-10,調節(jié)細胞因子,改善AS活動期患者血瘀狀態(tài);新風膠囊顯著降低IκBα、NF-κBp65、NF-κBp50含量,Act1、IκBα、NF-κBp65、NF-κBp50的m RNA及NF-κBp65、NF-κBp50蛋白表達,提示XFC顯著抑制NF-κB信號通路過度活化;新風膠囊顯著降低AS活動期患者的mi RNA155表達;新風膠囊可顯著降低AS活動期患者的BASDAI、BASFI、BAS-G,改善患者的臨床癥狀;新風膠囊可顯著降低AS活動期患者體倦乏力、腰脊活動受限、晨僵、腰膝酸軟、肢體困重、少氣懶言、面色萎黃、食少納呆、食少腹脹、中醫(yī)癥狀總積分,改善患者中醫(yī)癥狀;新風膠囊可顯著降低AS活動期患者關節(jié)刺痛、唇色、皮下瘀斑及血瘀癥狀總積分,改善患者血瘀狀態(tài);新風膠囊可顯著升高生理職能(RP)、社會功能(SF)、身體疼痛(BP)、精力(VT)、心理健康(MH)積分,改善患者生活質量。4結論4.1AS活動期患者血瘀狀態(tài)表現與正常范圍相比,AS活動期患者中PLT、FBG、D-D異常率分別為75%、66.7%、61.7%,AS活動期患者存在血瘀狀態(tài),以PLT、FBG、D-D三者異常升高為主要表現。4.2新風膠囊對AS活動期患者療效新風膠囊雖在ASAS20、改善臨床癥狀方面及部分實驗室指標方面與柳氮磺吡啶相似,但在改善中醫(yī)癥狀總積分、血瘀癥狀總積分、患者精力及心理健康狀態(tài)顯著優(yōu)于柳氮磺吡啶組。4.3新風膠囊改善強直性脊柱炎活動期患者血瘀狀態(tài)機制新風膠囊調節(jié)細胞因子、凝血-纖溶系統紊亂;新風膠囊顯著抑制NF-κB活化和mi RNA155表達,進一步調節(jié)細胞因子、凝血-纖溶系統失衡,改善血瘀狀態(tài)。
【學位授予單位】:安徽中醫(yī)藥大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2016
【分類號】:R259

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本文編號:1200245

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