本文關(guān)鍵詞：刺血療法對DEN誘導(dǎo)的HCC大鼠VEGF、TGF-β1的影響

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【摘要】：刺血療法是中醫(yī)針灸的傳統(tǒng)方法之一,是指利用三棱針或其它針具刺破人體血絡(luò),放出適量血液以防治疾病的方法,具有活血通絡(luò)、祛瘀生新、消癩散結(jié)、清熱解毒等功效。在臨床上,筆者導(dǎo)師發(fā)現(xiàn)刺血療法可以有效防治慢性肝病及肝硬化向肝癌的進展。課題組前期實驗結(jié)果表明,刺血療法可以逆轉(zhuǎn)脂肪肝及肝纖維化,本研究在其基礎(chǔ)上,深入探討刺血療法預(yù)防原發(fā)性肝癌(Hepatic cellular cancer, HCC)的療效及機制。結(jié)合相關(guān)文獻,課題組設(shè)計本實驗,以二乙基亞硝胺(Diethylnitrosamine, DEN)化學(xué)法誘導(dǎo)建立HCC大鼠模型,通過觀察刺血療法對模型大鼠肝臟病理形態(tài)、腫瘤標記物及腫瘤血管生成促進因予的影響,探討其預(yù)防肝癌的內(nèi)在機制,以期為臨床早期干預(yù)肝癌提供一種新方法。目的本實驗以腹腔注射DEN制備HCC大鼠模型,在造模的同時,刺血預(yù)防組給予太沖、足三里、陽陵泉穴淺表血絡(luò)刺血,造模結(jié)束后,觀察刺血對大鼠肝臟病理組織形態(tài)學(xué)、肝指數(shù)、肝臟腫瘤標記物甲胎蛋白異質(zhì)體(Alpha-fetoprotein heteroplasmon-L3, AFP-L3)和a-L-巖藻糖苷酶(a-L-fucosidase, AFU)、腫瘤血管生長因子血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor, VEGF)和轉(zhuǎn)化生長因子-β1 (Transforming growth factor-beta 1, TGF-β1)的影響,以探討刺血對HCC大鼠的預(yù)防作用及作用機制。方法將40只雄性Wistar大鼠,隨機分為3組,正常組(10只)、模型組(15只)、刺血預(yù)防組(15只)。模型組和刺血預(yù)防組腹腔注射DEN誘導(dǎo)建立HCC大鼠模型,2次/周,連續(xù)4周后改為1次/周,至13周止。自造模開始,刺血預(yù)防組即選取太沖、足三里、陽陵泉穴刺血,2次/周,至13周止,每次出血量0.2-0.3ml。造模結(jié)束后,10%水合氯醛溶液腹腔注射麻醉大鼠,取血和肝組織進行檢測。稱肝質(zhì)量,計算肝指數(shù)；HE染色法觀察大鼠肝臟病理形態(tài)學(xué)變化；EILSA法檢測血清AFP-L3、AFU、 VEGF、TGF-β1以及肝組織VEGF、TGF-β1的表達。結(jié)果1.肝組織病理形態(tài)學(xué)變化：HE染色顯示正常組大鼠肝小梁、肝竇排列正常,肝細胞形態(tài)正常；模型組大鼠癌變細胞深染,細胞核多形,異型增生結(jié)節(jié)多,間質(zhì)血竇豐富,部分可見大片壞死；刺血預(yù)防組大鼠癌細胞數(shù)量明顯減少,細胞染色相對均勻,僅見少量結(jié)節(jié)形成。2.體質(zhì)量、肝質(zhì)量及肝指數(shù)變化：與正常組相比,模型組大鼠體質(zhì)量明顯減輕(P0.01),肝質(zhì)量和肝指數(shù)均顯著增加(P0.01),刺血預(yù)防組大鼠體質(zhì)量減輕(P0.01),肝質(zhì)量和肝指數(shù)均略微增加,其中肝質(zhì)量的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),肝指數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；與模型組相比,刺血預(yù)防組大鼠體質(zhì)量增加(P0.05),肝質(zhì)量和肝指數(shù)均明顯下降(P0.05,P0.01)。3.血清AFP-L3、AFU表達情況：與正常組比較,模型組大鼠血清AFP-L3、AFU含量極明顯增高(P0.01),刺血預(yù)防組大鼠血清AFP-L3、AFU含量增加(P0.05)；與模型組比較,刺血預(yù)防組大鼠血清AFP-L3、AFU含量均顯著降低(P0.01,P0.05)。4.血清和肝組織VEGF、TGF-β1表達情況：模型組大鼠與正常組相比,血清和肝組織VEGF、TGF-β1水平極顯著升高(P0.01)；刺血預(yù)防組大鼠與正常組相比,血清和肝組織VEGF、TGF-β1水平一定程度上升高(P0.05)；刺血預(yù)防組大鼠與模型組相比,VEGF、TGF-β1在血清和肝組織中含量均明顯降低,其中VEGF的表達在肝組織中下調(diào)最多(P0.01), TGF-β1的表達在血清中下調(diào)最快(P0.01)。結(jié)論1.本課題采用DEN改良法誘導(dǎo)建立HCC大鼠模型,造模方法可靠。2.太沖、足三里、陽陵泉穴刺血能改善大鼠肝臟病理形態(tài),降低肝指數(shù),減輕細胞癌變程度。3.太沖、足三里、陽陵泉穴刺血可有效降低HCC大鼠腫瘤標記物血清AFP-L3和AFU的含量；顯著下調(diào)血清和肝臟中腫瘤血管生長因子VEGF和TGF-β1的表達水平。4.本課題研究結(jié)果表明,刺血療法對HCC大鼠具有預(yù)防作用,可以延緩肝臟癌變進程,其內(nèi)在機制可能與下調(diào)腫瘤血管生成促進因子VEGF、TGF-β1的表達水平,抑制腫瘤新生血管形成有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R245

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本文編號：1171450