本文關鍵詞：黃連品質(zhì)評價的研究及其應用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《第三軍醫(yī)大學》 2012年

黃連五種單體對3T3-L1脂肪細胞糖脂代謝的影響及機制研究

王慧  

【摘要】：背景和目的 糖尿病是由于體內(nèi)胰島素絕對或相對不足所致的一種內(nèi)分泌代謝性疾病，常伴有高脂血癥。在傳統(tǒng)中醫(yī)中，糖尿病屬消渴病的范疇，歷代醫(yī)書記載了大量治療消渴病的中藥及方劑，目前研究發(fā)現(xiàn)這些中藥方劑大部分含有黃連或其主要成分黃連生物堿。黃連為毛莨科多年生草本植物，其根莖具有降低血糖、調(diào)節(jié)血脂的功效�，F(xiàn)代醫(yī)學研究顯示，黃連的降糖調(diào)脂作用主要與其根莖所含的生物堿小蘗堿、藥根堿、表小蘗堿、巴馬汀、黃連堿等有關。小蘗堿是目前研究最多的黃連生物堿，具有改善高脂血癥和胰島素抵抗等作用�；瘜W分析顯示藥根堿、表小蘗堿、巴馬汀、黃連堿均是異喹啉生物堿，為小蘗堿的同系物，其化學結構與小蘗堿相似，有文獻報道它們具有和小蘗堿相似的生物學功能，但目前為止其作用機制尚不清楚。 過氧化物酶體增殖物激活受體(Peroxisome proliferators-activated receptors,PPARs)是一類由配體激活的核轉錄因子超家族成員,與配體結合后轉錄活性發(fā)生變化,從而導致PPARs靶基因表達的改變,進而引起脂肪生成、脂質(zhì)代謝、胰島素抵抗、糖耐量受損、肥胖等一系列生理活動。肝X受體а(Liver X recepetor aphal,LXRа)的靶基因已發(fā)現(xiàn)了十幾種，其中大部分與糖代謝、炎癥反應、細胞增殖及脂質(zhì)代謝有密切關系，提示LXRа可能廣泛參與了脂質(zhì)代謝紊亂、2型糖尿病及動脈粥樣硬化等多種疾病的發(fā)生發(fā)展。 本研究以3T3-L1脂肪細胞為研究對象，分別檢測黃連五種單體對其葡萄糖攝取和脂肪酸氧化的影響，以及黃連單體處理脂肪細胞后PPARs、LXRα基因和蛋白表達的變化情況，以期明確黃連單體對糖脂代謝的可能作用機制，為黃連生物堿的臨床應用提供實驗依據(jù)。 方法： 1、3T3-L1前脂肪細胞按照ATCC推薦的方法培養(yǎng)，細胞長滿6孔板后加入IBMX(終濃度0.5mmol/L)、地塞米松(終濃度1μmol/L)、胰島素(終濃度10mg/L)誘導分化為脂肪細胞。分化成熟的脂肪細胞采用油紅O染色的方法進行鑒定。 2、將分化成熟的脂肪細胞接種于96孔板，用黃連五種單體誘導細胞12小時、24小時、48小時、72小時，濃度分別為265.65μmol/L、53.75μmol/L、10.75μmol/L、2.15μmol/L、0.45μmol/L，采用空白組和PBS組作為對照組，吞噬MTT后檢測其OD值，每組至少重復3孔。 3、五種單體均選用最適濃度處理3T3-L1脂肪細胞，PBS處理組作為陰性對照共培養(yǎng)48h，[3H]2-DG示蹤檢測3T3-L1脂肪細胞的葡萄糖攝取，14C-palmitic示蹤檢測3T3-L1脂肪細胞的脂肪酸氧化情況。 4、選用黃連五種單體的最適濃度處理細胞48h，采用空白組和PBS組作為對照組，，Real-time PCR檢測其PPARs和LXRα基因表達情況，western blot檢測其PPARs和LXRα蛋白表達的情況。 結果： 1、3T3-L1前脂肪細胞的培養(yǎng)、誘導分化和鑒定實驗：3T3-L1前脂肪細胞在誘導分化為3T3-L1脂肪細胞的過程中，胞漿中脂肪滴有無到有，由小變大，細胞形態(tài)逐漸變圓，在誘導分化至第9-10天左右分化成熟，采用油紅O染色后胞漿中脂肪滴被染成紅色。 2、MTT檢測結果：五種單體的最佳作用時間均為48h，小蘗堿、表小蘗堿的最佳作用濃度均為2.15μmol/L，巴馬汀、黃連堿的最佳作用濃度均為10.75μmol/L，藥根堿的最佳作用濃度為0.45μmol/L。 3、3T3-L1脂肪細胞葡萄糖攝取的結果：實驗顯示胰島素有明顯促進3T3-L1脂肪細胞葡萄糖攝取的作用；小蘗堿、表小蘗堿和巴馬汀在胰島素介導作用下均有促進3T3-L1脂肪細胞葡萄糖攝取的作用；藥根堿和黃連堿對3T3-L1脂肪細胞葡萄糖攝取均沒有統(tǒng)計學意義。 4、3T3-L1脂肪細胞脂肪酸氧化的結果：數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析顯示小蘗堿和藥根堿處理組均具有促進3T3-L1脂肪細胞脂肪酸氧化的作用；表小蘗堿、巴馬汀和黃連堿處理組均對3T3-L1脂肪細胞脂肪酸氧化沒有統(tǒng)計學意義。 5、黃連五種單體對3T3-L1脂肪細胞PPARs和LXRα基因和蛋白表達影響： (1)Real-time PCR結果：與PBS對照組相比，黃連五種單體作用于3T3-L1脂肪細胞后均具有促進PPARα和PPARβ基因表達的作用；小蘗堿、藥根堿還可促進LXRα的基因表達，而小蘗堿、表小蘗堿、巴馬汀對PPARγ的基因表達與PBS對照組比較具有顯著統(tǒng)計學差異。 (2)蛋白表達檢測結果：與PBS對照組相比，小蘗堿和表小蘗堿處理組能夠明顯促進3T3-L1脂肪細胞PPARs和LXRα的蛋白表達水平；藥根堿處理組能夠顯著上調(diào)3T3-L1脂肪細胞PPARα、PPARβ和LXRα的蛋白表達水平；而巴馬汀處理組對3T3-L1脂肪細胞PPARβ和PPARγ蛋白表達水平具有促進作用。 結論： 1、MTT實驗顯示黃連五種單體對3T3-L1脂肪細胞的最佳作用時間均為48h，小蘗堿、表小蘗堿的最佳作用濃度均為2.15μmol/L，巴馬汀、黃連堿的最佳作用濃度均為10.75μmol/L，藥根堿最佳作用濃度為0.45μmol/L。 2、小蘗堿、表小蘗堿和巴馬汀均可促進3T3-L1脂肪細胞的葡萄糖攝取，小蘗堿的作用機制可能與增加PPARs和LXRα基因和蛋白的表達有關；表小蘗堿和巴馬汀可能是通過上調(diào)PPARα、PPARβ和PPARγ表達實現(xiàn)的。 3、小蘗堿和藥根堿對3T3-L1脂肪細胞脂肪酸氧化具有促進作用，小蘗堿的作用機制可能與上調(diào)PPARs和LXRα表達有關，藥根堿可能通過增加PPARα、PPARβ和LXRα的基因和蛋白表達來實現(xiàn)。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R587.1;R285.5
【目錄】：

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  本文關鍵詞：黃連品質(zhì)評價的研究及其應用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：116581