本文關(guān)鍵詞：黃連品質(zhì)評價的研究及其應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《第三軍醫(yī)大學(xué)》 2012年

黃連五種單體對3T3-L1脂肪細(xì)胞糖脂代謝的影響及機(jī)制研究

王慧  

【摘要】：背景和目的 糖尿病是由于體內(nèi)胰島素絕對或相對不足所致的一種內(nèi)分泌代謝性疾病，常伴有高脂血癥。在傳統(tǒng)中醫(yī)中，糖尿病屬消渴病的范疇，歷代醫(yī)書記載了大量治療消渴病的中藥及方劑，目前研究發(fā)現(xiàn)這些中藥方劑大部分含有黃連或其主要成分黃連生物堿。黃連為毛莨科多年生草本植物，其根莖具有降低血糖、調(diào)節(jié)血脂的功效�，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究顯示，黃連的降糖調(diào)脂作用主要與其根莖所含的生物堿小蘗堿、藥根堿、表小蘗堿、巴馬汀、黃連堿等有關(guān)。小蘗堿是目前研究最多的黃連生物堿，具有改善高脂血癥和胰島素抵抗等作用。化學(xué)分析顯示藥根堿、表小蘗堿、巴馬汀、黃連堿均是異喹啉生物堿，為小蘗堿的同系物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)與小蘗堿相似，有文獻(xiàn)報道它們具有和小蘗堿相似的生物學(xué)功能，但目前為止其作用機(jī)制尚不清楚。 過氧化物酶體增殖物激活受體(Peroxisome proliferators-activated receptors,PPARs)是一類由配體激活的核轉(zhuǎn)錄因子超家族成員,與配體結(jié)合后轉(zhuǎn)錄活性發(fā)生變化,從而導(dǎo)致PPARs靶基因表達(dá)的改變,進(jìn)而引起脂肪生成、脂質(zhì)代謝、胰島素抵抗、糖耐量受損、肥胖等一系列生理活動。肝X受體а(Liver X recepetor aphal,LXRа)的靶基因已發(fā)現(xiàn)了十幾種，其中大部分與糖代謝、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖及脂質(zhì)代謝有密切關(guān)系，提示LXRа可能廣泛參與了脂質(zhì)代謝紊亂、2型糖尿病及動脈粥樣硬化等多種疾病的發(fā)生發(fā)展。 本研究以3T3-L1脂肪細(xì)胞為研究對象，分別檢測黃連五種單體對其葡萄糖攝取和脂肪酸氧化的影響，以及黃連單體處理脂肪細(xì)胞后PPARs、LXRα基因和蛋白表達(dá)的變化情況，以期明確黃連單體對糖脂代謝的可能作用機(jī)制，為黃連生物堿的臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。 方法： 1、3T3-L1前脂肪細(xì)胞按照ATCC推薦的方法培養(yǎng)，細(xì)胞長滿6孔板后加入IBMX(終濃度0.5mmol/L)、地塞米松(終濃度1μmol/L)、胰島素(終濃度10mg/L)誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞。分化成熟的脂肪細(xì)胞采用油紅O染色的方法進(jìn)行鑒定。 2、將分化成熟的脂肪細(xì)胞接種于96孔板，用黃連五種單體誘導(dǎo)細(xì)胞12小時、24小時、48小時、72小時，濃度分別為265.65μmol/L、53.75μmol/L、10.75μmol/L、2.15μmol/L、0.45μmol/L，采用空白組和PBS組作為對照組，吞噬MTT后檢測其OD值，每組至少重復(fù)3孔。 3、五種單體均選用最適濃度處理3T3-L1脂肪細(xì)胞，PBS處理組作為陰性對照共培養(yǎng)48h，[3H]2-DG示蹤檢測3T3-L1脂肪細(xì)胞的葡萄糖攝取，14C-palmitic示蹤檢測3T3-L1脂肪細(xì)胞的脂肪酸氧化情況。 4、選用黃連五種單體的最適濃度處理細(xì)胞48h，采用空白組和PBS組作為對照組，，Real-time PCR檢測其PPARs和LXRα基因表達(dá)情況，western blot檢測其PPARs和LXRα蛋白表達(dá)的情況。 結(jié)果： 1、3T3-L1前脂肪細(xì)胞的培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化和鑒定實驗：3T3-L1前脂肪細(xì)胞在誘導(dǎo)分化為3T3-L1脂肪細(xì)胞的過程中，胞漿中脂肪滴有無到有，由小變大，細(xì)胞形態(tài)逐漸變圓，在誘導(dǎo)分化至第9-10天左右分化成熟，采用油紅O染色后胞漿中脂肪滴被染成紅色。 2、MTT檢測結(jié)果：五種單體的最佳作用時間均為48h，小蘗堿、表小蘗堿的最佳作用濃度均為2.15μmol/L，巴馬汀、黃連堿的最佳作用濃度均為10.75μmol/L，藥根堿的最佳作用濃度為0.45μmol/L。 3、3T3-L1脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取的結(jié)果：實驗顯示胰島素有明顯促進(jìn)3T3-L1脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取的作用；小蘗堿、表小蘗堿和巴馬汀在胰島素介導(dǎo)作用下均有促進(jìn)3T3-L1脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取的作用；藥根堿和黃連堿對3T3-L1脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取均沒有統(tǒng)計學(xué)意義。 4、3T3-L1脂肪細(xì)胞脂肪酸氧化的結(jié)果：數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析顯示小蘗堿和藥根堿處理組均具有促進(jìn)3T3-L1脂肪細(xì)胞脂肪酸氧化的作用；表小蘗堿、巴馬汀和黃連堿處理組均對3T3-L1脂肪細(xì)胞脂肪酸氧化沒有統(tǒng)計學(xué)意義。 5、黃連五種單體對3T3-L1脂肪細(xì)胞PPARs和LXRα基因和蛋白表達(dá)影響： (1)Real-time PCR結(jié)果：與PBS對照組相比，黃連五種單體作用于3T3-L1脂肪細(xì)胞后均具有促進(jìn)PPARα和PPARβ基因表達(dá)的作用；小蘗堿、藥根堿還可促進(jìn)LXRα的基因表達(dá)，而小蘗堿、表小蘗堿、巴馬汀對PPARγ的基因表達(dá)與PBS對照組比較具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。 (2)蛋白表達(dá)檢測結(jié)果：與PBS對照組相比，小蘗堿和表小蘗堿處理組能夠明顯促進(jìn)3T3-L1脂肪細(xì)胞PPARs和LXRα的蛋白表達(dá)水平；藥根堿處理組能夠顯著上調(diào)3T3-L1脂肪細(xì)胞PPARα、PPARβ和LXRα的蛋白表達(dá)水平；而巴馬汀處理組對3T3-L1脂肪細(xì)胞PPARβ和PPARγ蛋白表達(dá)水平具有促進(jìn)作用。 結(jié)論： 1、MTT實驗顯示黃連五種單體對3T3-L1脂肪細(xì)胞的最佳作用時間均為48h，小蘗堿、表小蘗堿的最佳作用濃度均為2.15μmol/L，巴馬汀、黃連堿的最佳作用濃度均為10.75μmol/L，藥根堿最佳作用濃度為0.45μmol/L。 2、小蘗堿、表小蘗堿和巴馬汀均可促進(jìn)3T3-L1脂肪細(xì)胞的葡萄糖攝取，小蘗堿的作用機(jī)制可能與增加PPARs和LXRα基因和蛋白的表達(dá)有關(guān)；表小蘗堿和巴馬汀可能是通過上調(diào)PPARα、PPARβ和PPARγ表達(dá)實現(xiàn)的。 3、小蘗堿和藥根堿對3T3-L1脂肪細(xì)胞脂肪酸氧化具有促進(jìn)作用，小蘗堿的作用機(jī)制可能與上調(diào)PPARs和LXRα表達(dá)有關(guān)，藥根堿可能通過增加PPARα、PPARβ和LXRα的基因和蛋白表達(dá)來實現(xiàn)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R587.1;R285.5
【目錄】：

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9 姜錦鵬;韋習(xí)會;陳杰;陸天水;池豪;趙茹茜;;日糧添加脂肪細(xì)胞膜蛋白抗體對豬胴體品質(zhì)和脂肪代謝相關(guān)激素和酶活性的影響[A];全國動物生理生化第九次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2006年

10 尹丙姣;;跨膜型和分泌型TNF-α在脂肪細(xì)胞胰島素抵抗中的作用[A];第六屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2008年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 記者李紅;[N];科技日報;2002年

2 中華醫(yī)學(xué)會北京分會 方紅娟;[N];健康報;2011年

3 本報記者 王彩麗;[N];衛(wèi)生與生活報;2006年

4 記者 付東紅;[N];健康報;2009年

5 中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會會長 王隴德;[N];保健時報;2008年

6 ;[N];中國醫(yī)藥報;2003年

7 記者 王心見;[N];科技日報;2003年

8 采寫 本報記者 郭靜 通訊員 王軍 肖金 受訪專家 武警廣東省總隊醫(yī)院美容中心主任、主任醫(yī)師 譚新東;[N];廣東科技報;2008年

9 本報記者 趙安平;[N];健康時報;2003年

10 封祥;[N];大眾科技報;2004年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 蔣小飛;8-烷基黃連堿同系物的合成與藥理活性[D];西南大學(xué);2011年

2 陳西平;影響黃連在復(fù)方中功效發(fā)揮方向的多因素研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2011年

3 時麗麗;丹酚酸A、黃連堿對糖代謝的作用及機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

4 陳紅英;黃連化學(xué)成分的分離及其降糖活性研究[D];西南大學(xué);2012年

5 李佳川;基于本草知識的酒蒸黃連“止消渴”系統(tǒng)研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2011年

6 錢淑文;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞過程中的基本特征及機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

7 羅肖;BAMBI在人脂肪細(xì)胞形成中的作用及機(jī)理研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2011年

8 吳金鳳;黃連生物堿降低卷煙煙氣中有害成分的作用及機(jī)理研究[D];西南大學(xué);2012年

9 葉峰;3T3-L1細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞的蛋白質(zhì)組學(xué)及其部分相關(guān)蛋白功能的研究[D];中南大學(xué);2011年

10 張春平;不同外源物質(zhì)提高鹽脅迫下黃連種子及幼苗抗逆性機(jī)理研究[D];西南大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王慧;黃連五種單體對3T3-L1脂肪細(xì)胞糖脂代謝的影響及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2012年

2 龐雪;基于相似結(jié)構(gòu)特征的黃連混合生物堿轉(zhuǎn)化為單體黃連堿的研究[D];長春工業(yè)大學(xué);2011年

3 廉如;人脂聯(lián)素球狀結(jié)構(gòu)域（gAd）促進(jìn)3T3-L1脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取的代謝機(jī)制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

4 蘇頡;HCG對3T3-L1脂肪細(xì)胞PPARγ及Adiponectin mRNA表達(dá)的影響[D];鄭州大學(xué);2010年

5 陳軍;不同光照對黃連質(zhì)量和產(chǎn)量的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2011年

6 秦英楠;人脂肪細(xì)胞對HepG2細(xì)胞載脂蛋白A5表達(dá)的影響及其機(jī)制[D];中南大學(xué);2010年

7 徐琛瑋;DHA對脂肪細(xì)胞凋亡調(diào)控作用機(jī)制研究[D];寧波大學(xué);2011年

8 李娟娟;運(yùn)動對胰島素抵抗大鼠脂肪細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4的影響[D];武漢大學(xué);2005年

9 周源;黃連降糖作用在糖尿病治療中的應(yīng)用與思考[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2011年

10 文隆;胰島素對人網(wǎng)膜脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素分泌的影響及干預(yù)研究[D];中南大學(xué);2007年

  本文關(guān)鍵詞：黃連品質(zhì)評價的研究及其應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：116581