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第36卷第6期2011年3月

Vol.36，Issue6March，2011

體重隨機分為4組，即模型組、陽性對照組、赤芍和

白芍給藥組。各給藥組大鼠適應性飼養(yǎng)3d后灌胃給予實驗供試液，給藥劑量折合成生藥量為15g·kg－1;陽性對照組灌胃給予阿司匹林50mg·kg－1，

－1

給藥容積0.01mL·g，供試液均用雙蒸水配制，模型組灌服同容積生理鹽水，連續(xù)給藥6d。第6d

給藥1h后，分別在每鼠右后足趾皮下注射1%角叉菜膠混懸液0.1mL，分別于致炎前及致炎后30min，1，2，3h分別測定足趾體積并計算腫脹度［6］。各組大鼠致炎3h后分別于腹主動脈收集血液，至4000r·min－1離心10室溫下靜置2h析出血清，min，取上層淡黃色透明血清－80℃保存。取100μL解凍后血清加入400μL乙腈-甲醇(3∶1)混合溶液沉淀蛋白，4℃下12000r·min－1離MS分析。心15min，移取上清液供UPLC-2.2色譜條件與質譜條件色譜條件:WatersHSST3色譜柱(2.1mm×100mm，1.7μm);流動相5mmol·L－1乙酸銨水溶液(含0.1%甲酸，A)-乙腈(B)，0～1min，98%A;1～3min，98%～梯度洗脫，50%A;3～12min，50%～40%A;12～16min，40%～10%A;16～20min，10%～98%A。流速0.3mL·min

;柱溫45℃;進樣量5μL。

質譜條件:電噴霧離子源(ESI)，正離子模式;

－1

－1

圖1MS代謝指紋總離子流圖大鼠血清樣品的UPLC-

2.3

±s表示，數(shù)據(jù)處理藥理實驗數(shù)據(jù)以x珋采用

統(tǒng)計學軟件SPSS12.0的獨立樣本t檢驗進行組間MS數(shù)據(jù)通過m/z識別、MassLynx軟差異比較。LC-件匹配、歸一化等計算過程得到矩陣，導入SMCA-P12.0(Umetrics，Umea，瑞典)軟件中進行主成分分

DA)。析(PCA)與偏最小二乘判別分析(PLS-

33.1響

結果

赤芍和白芍對大鼠角叉菜膠致足趾腫脹的影

實驗結果表明大鼠連續(xù)給藥6d后，赤芍和白

鞘氣(N2)流速30L·min;輔助氣(N2)流速10L

·min－1;毛細管電壓38.00V，毛細管溫度300℃，毛細管源內電壓5.00kV，掃描范圍m/z100～

1000.00�？傠x子流圖見圖1

。

表1

組別模型赤芍給藥白芍給藥阿司匹林

劑量/g·kg－1

－15150．2

0.5h23．84±10．3911．70±5．952)

12．71±4．832)11．24±6．242)

芍提取物在0.5～1h對大鼠角叉菜膠致足趾腫脹均有較好的抑制作用，與模型組相比有顯著性差異，但組間無明顯差別;在2～3h僅赤芍提取物對大鼠角叉菜膠致足趾腫脹有較好的抑制作用，與對照組相比有顯著性差異，見表1。

腫脹率/%

1h28．26±10．1416．91±7．341)19．32±9．631)13．72±6．612)

2h25．33±13．598．13±8．272)21．51±17．169．05±6．542)

3h17．53±11．006．51±8．031)17．85±15．526．96±5．832)

±s，n=10)赤芍和白芍對大鼠足趾腫脹的影響(x珋

2)

P＜0.01。注:與模型組相比1)P＜0.05，

3.2

赤芍和白芍對角叉菜膠致足趾腫脹大鼠血清MS結果進行PCA和PLS-DA代謝物的影響將LC-分析。模型組與赤芍和白芍給藥組樣本點完全分

離，且各組內樣本點聚集較好，說明大鼠口服給予赤芍和白芍提取物后機體生理及物質代謝狀況已經(jīng)發(fā)生明顯改變，并根據(jù)其變化可以將各組樣品進行區(qū)

分，結果見圖2。給予白芍提取物3h后代謝物組輪

廓更趨近模型組成分區(qū)間，與藥理實驗結果一致。使用變量重要性投影(VIP)評價潛在的生物標

DA計算VIP值，識物，利用PLS-取大鼠血清代謝物譜中VIP值大于1的變量為生物標示物，共發(fā)現(xiàn)

691個。通過HMDB［7］網(wǎng)站檢索，初步鑒定部分可

69

5·

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