發(fā)布時(shí)間：2017-10-25 01:06

  本文關(guān)鍵詞：基于“痰”致病理論研究橙皮苷對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)蛋白聚糖的作用

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【摘要】：目的：動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是常見(jiàn)心血管疾病的一種,目前已經(jīng)是危險(xiǎn)人類健康的重大疾病之一。在AS的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中,血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移在其中起到重要作用,同時(shí)過(guò)程中伴隨著一系列的炎癥反應(yīng)�，F(xiàn)代研究表明As病變中的脂質(zhì)沉積是繼發(fā)于動(dòng)脈基質(zhì)的改變之后,細(xì)胞外基質(zhì)中蛋白聚糖的堆積導(dǎo)致了脂質(zhì)沉積,進(jìn)而引起AS病變的形成。中醫(yī)中“痰”理論認(rèn)為蛋白聚糖病變與“痰”有密切關(guān)系,化痰方藥在治療AS中有良好的療效。本研究采用氧化型低密度脂蛋白誘導(dǎo)小鼠血管平滑肌細(xì)胞建立AS細(xì)胞模型,探討橙皮苷對(duì)AS模型血管平滑肌細(xì)胞動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)蛋白聚糖表達(dá)與脂質(zhì)代謝的影響。方法：實(shí)驗(yàn)采用MTT法測(cè)定不同濃度氧化型低密度脂蛋白對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響,篩選造模濃度；測(cè)定不同濃度橙皮苷對(duì)氧化型低密度脂蛋白誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響；通過(guò)DMMB法檢測(cè)橙皮苷對(duì)血管平滑肌細(xì)胞生成糖胺聚糖的影響；采用Western Blotting法檢測(cè)橙皮苷對(duì)血管平滑肌細(xì)胞biglycan和decorin蛋白表達(dá)的影響；通過(guò)油紅0染色法檢測(cè)橙皮苷對(duì)血管平滑肌細(xì)胞脂質(zhì)代謝的影響；Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)橙皮苷對(duì)氧化型低密度脂蛋白誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞遷移的影響。結(jié)果：1氧化型低密度脂蛋白可以誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞增殖,50μg/mL的ox-LDL可以誘導(dǎo)AS平滑肌細(xì)胞模型成立。與空白對(duì)照組比較,在25μg/mL——50μg/mL范圍內(nèi),血管平滑肌細(xì)胞的增殖能力明顯上升(P0.01),說(shuō)明在這個(gè)濃度范圍內(nèi)的ox-LDL對(duì)血管平滑肌細(xì)胞的增殖有明顯的促進(jìn)作用。其中,ox-LDL50μg/mL組的促進(jìn)作用明顯強(qiáng)于ox-LDL25μg/mL組,說(shuō)明在25μg/mL——50μg/mL范圍內(nèi),ox-LDL對(duì)血管平滑肌細(xì)胞的增殖能力有濃度依賴關(guān)系。但當(dāng)ox-LDL濃度在75μg/mL——125μg/mL范圍內(nèi)卻表現(xiàn)出抑制血管平滑肌的作用,而且抑制作用較強(qiáng)。說(shuō)明ox-LDL在較低濃度時(shí)對(duì)血管平滑肌細(xì)胞的增殖表現(xiàn)為促進(jìn)作用,當(dāng)濃度升高是反而會(huì)發(fā)揮抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖的作用。2橙皮苷在200——250 μ g/mL濃度范圍內(nèi)對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞的增殖有抑制作用,且濃度越高,抑制作用越明顯。與空白對(duì)照組比較,橙皮苷在50——150 μ g/mL范圍內(nèi)對(duì)平滑肌細(xì)胞的增殖無(wú)明顯作用。說(shuō)明在此濃度范圍內(nèi),橙皮苷對(duì)血管平滑肌細(xì)胞的生長(zhǎng)無(wú)抑制或促進(jìn)作用,對(duì)其生長(zhǎng)無(wú)毒性作用。但隨著橙皮苷濃度達(dá)到200 μ g/mL及以上時(shí),橙皮苷對(duì)低密度脂蛋白誘導(dǎo)的平滑肌細(xì)胞的增殖表現(xiàn)出明顯的抑制作用。3橙皮苷對(duì)血管平滑肌細(xì)胞糖胺聚糖表達(dá)的影響。結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組比較,ox-LDL組中上清液與細(xì)胞層中GAG含量明顯升高(P0.01)。與ox-LDL組比較,加入濃度梯度橙皮苷各組上清液與細(xì)胞層中GAG含量都有明顯降低(P＜0.01),且有濃度依賴性。與空白對(duì)照組比較,ox-LDL組上清液中GAG在總GAG中的比例明顯上升,說(shuō)明ox-LDL可明顯促進(jìn)小鼠血管平滑肌細(xì)胞GAG的表達(dá)及代謝。與ox-LD1。組比較,50μg/mL橙皮苷組作用不明顯,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但100μg/mL橙皮苷組、150μg/mL橙皮苷組均可降低由ox-LDL誘導(dǎo)的小鼠血管平滑肌細(xì)胞GAG的表達(dá)及代謝。但100μg/mL橙皮苷組與150μg/mL橙皮苷組作用強(qiáng)度無(wú)顯著差異。4橙皮苷對(duì)平滑肌細(xì)胞硫酸軟骨素蛋白聚糖biglycan和decorin表達(dá)的影響。結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組比較,ox-LDL組biglycan的表達(dá)量明顯升高(P0.01),decorin的表達(dá)顯著下降；與ox-LDL組比較,50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL橙皮苷組biglycan的表達(dá)量均有所下降(P0.01), decorin的表達(dá)量有所上升(P0.05)。5橙皮苷對(duì)血管平滑肌細(xì)胞脂質(zhì)代謝的影響。結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組比較,ox-LDL組細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)明顯增加；與ox-LDL組比較,橙皮苷50μg/mL組細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量無(wú)明顯差異,橙皮苷100μg/mL組細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)明顯下降,橙皮苷150μg/mL組細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)也顯著降低。6橙皮苷對(duì)氧化型低密度脂蛋白誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞遷移的抑制作用。與空白對(duì)照組比較,ox-LDL能夠明顯促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞的遷移(P0.01),證實(shí)了50 μg/mox-LDL可以誘導(dǎo)平滑肌細(xì)胞的遷移,細(xì)胞模型成立。加入橙皮苷進(jìn)行干預(yù),結(jié)果發(fā)現(xiàn),與ox-LDL組相比,各個(gè)濃度橙皮苷組均可明顯抑制血管平滑肌細(xì)胞的遷移(P0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而且,與橙皮苷50 μ g/mL組比較,橙皮苷100μg/mL組和橙皮苷200 μ g/mL組的抑制做用要強(qiáng)。說(shuō)明橙皮苷對(duì)血管平滑肌細(xì)胞的遷移抑制作用可能存在濃度依賴性。但與橙皮苷100 μ g/mL組比較,橙皮苷200μg/mL組抑制作用并不明顯(P0.05),無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義�？赡苷f(shuō)明,橙皮苷對(duì)血管平滑肌細(xì)胞遷移的抑制作用濃度范圍在50μg/mL——200μg/mL,并在100 μ g/mL時(shí)達(dá)到較大程度,在100μg/mL——200μg/mL變化不明顯。結(jié)論:橙皮苷通過(guò)降低糖胺聚糖代謝、抑制biglycan表達(dá)、促進(jìn)decorin表達(dá)等方面調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝,同時(shí)可通過(guò)抑制平滑肌細(xì)胞增殖和遷移,發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。
【關(guān)鍵詞】：橙皮苷 “痰” 動(dòng)脈粥樣硬化 血管平滑肌細(xì)胞 蛋白聚糖 脂質(zhì)
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R259
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-11
• 引言11-12
• 第一章 文獻(xiàn)研究12-21
• 第一節(jié) 中醫(yī)對(duì)痰的認(rèn)識(shí)及現(xiàn)代研究12-14
• 一、痰的概念12
• 二、痰的來(lái)源12
• 三、痰的病因病機(jī)12-13
• 四、痰的實(shí)質(zhì)13-14
• 第二節(jié) 痰與AS關(guān)系研究14-15
• 一、中醫(yī)對(duì)AS的認(rèn)識(shí)14
• 二、病因及病機(jī)14-15
• 三、治則治法15
• 第三節(jié) 西醫(yī)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的認(rèn)識(shí)與研究15-17
• 一、動(dòng)脈粥樣硬化15
• 二、血管平滑肌細(xì)胞與動(dòng)脈粥樣硬化15-16
• 三、ox-LDL與AS16
• 四、炎癥與AS16-17
• 第四節(jié) 動(dòng)脈壁硫酸軟骨素蛋白聚糖與AS的關(guān)系17-19
• 一、蛋白聚糖與糖胺多糖17-18
• 二、動(dòng)脈壁硫酸軟骨素蛋白聚糖在AS中的作用18
• 三、硫酸軟骨素蛋白聚糖biglycan和decorin在AS中的作用18-19
• 第五節(jié) 橙皮苷現(xiàn)代藥理研究進(jìn)展概述19-21
• 一、抗氧化作用19
• 二、對(duì)心血管疾病的作用19-20
• 三、抗腫瘤作用20
• 四、其他作用20-21
• 第二章 實(shí)驗(yàn)部分21-40
• 第一節(jié) AS平滑肌細(xì)胞模型的建立21-25
• 一、實(shí)驗(yàn)材料21-22
• 二、實(shí)驗(yàn)方法22-23
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-24
• 四、討論24-25
• 第二節(jié) 橙皮苷對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響25-27
• 一、實(shí)驗(yàn)材料25
• 二、實(shí)驗(yàn)方法25-26
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-27
• 四、討論27
• 第三節(jié) 橙皮苷對(duì)血管平滑肌細(xì)胞糖胺聚糖表達(dá)的影響27-30
• 一、實(shí)驗(yàn)材料27-28
• 二、實(shí)驗(yàn)方法28
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-29
• 四、討論29-30
• 第四節(jié) 橙皮苷對(duì)平滑肌細(xì)胞硫酸軟骨素蛋白聚糖biglycan和decorin表達(dá)的影響30-35
• 一、實(shí)驗(yàn)材料30-31
• 二、實(shí)驗(yàn)方法31-33
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-34
• 四、討論34-35
• 第五節(jié) 橙皮苷對(duì)血管平滑肌細(xì)胞脂質(zhì)代謝的影響35-37
• 一、實(shí)驗(yàn)材料36
• 二、實(shí)驗(yàn)方法36
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-37
• 四、討論37
• 第六節(jié) 橙皮苷對(duì)血管平滑肌細(xì)胞遷移的影響37-40
• 一、實(shí)驗(yàn)材料38
• 二、實(shí)驗(yàn)方法38
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果38-39
• 四、討論39-40
• 第三章 結(jié)語(yǔ)40-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 附錄46-49
• 致謝49-50
• 統(tǒng)計(jì)學(xué)審核證明50

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