本文關(guān)鍵詞：基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)探討益氣活血方治療心肌缺血的分子機(jī)制研究

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【摘要】：目的：通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)對益氣活血方中黃芪、當(dāng)歸、人參、三七、川芎5味中藥進(jìn)行研究,探討益氣活血方治療心肌缺血的靶點和有效成分,從而進(jìn)一步闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ),并建立藥物成分-靶蛋白-疾病網(wǎng)絡(luò)；通過復(fù)制急性心肌缺血動物模型,加以益氣活血方進(jìn)行藥物干預(yù),探討益氣活血方對心肌缺血大鼠梗死邊緣區(qū)心肌組織中的鈉氫交換體-1(NHE-1)、鈣調(diào)蛋白依賴性激酶Ⅱ(CaMK Ⅱ)、血管內(nèi)皮生長因子受體-2(VEGFR-2)和缺氧誘導(dǎo)因子-α (HIF-la)等相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)的影響。方法：1.通過TCMD2009數(shù)據(jù)庫檢索,整理去除重復(fù)數(shù)據(jù)后,獲得益氣活血方中的有效化學(xué)成分。通過TTD數(shù)據(jù)庫調(diào)研收集與心肌缺血疾病相關(guān)的靶蛋白后,從PDB數(shù)據(jù)庫中下載所有蛋白質(zhì)靶標(biāo)結(jié)構(gòu)。2.益氣活血方中藥成分與靶蛋白的分子對接及網(wǎng)絡(luò)分析：采用Accelrys Discovery Studio軟件對中藥成分和靶蛋白進(jìn)行分子構(gòu)建和分子對接。通過Cytoscape2.8.1軟件,構(gòu)建小分子化學(xué)成分-靶蛋白系統(tǒng)網(wǎng)絡(luò)。運用plugins面板下的network analysis計算網(wǎng)絡(luò)參數(shù)：節(jié)點數(shù)目(number of nodes)、網(wǎng)絡(luò)度(network density、網(wǎng)絡(luò)異質(zhì)性(network heterogeneity)、平均相鄰節(jié)點數(shù)(average number of neighbors)、特征路徑長度(characteristic path length)、最短路徑(shortest paths)、網(wǎng)絡(luò)中心度(network centralization)等,并對這些網(wǎng)絡(luò)參數(shù)進(jìn)行分析。綜上,通過建立的中藥分子一靶標(biāo)蛋白的疾病網(wǎng)絡(luò),預(yù)測益氣活血方藥中治療心肌缺血疾病的活性成分,從而完善益氣活血方作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。3.復(fù)制急性心肌缺血模型后,利用超聲心動儀器檢測7天組、28天組各組大鼠左心室質(zhì)量、左心室容積、左心室內(nèi)徑、左心室射血分?jǐn)?shù)以及左心室短軸縮短率等左心功能指標(biāo)；通過HE病理染色結(jié)果觀察大鼠梗死邊緣區(qū)心肌組織結(jié)構(gòu),以綜合評價心肌缺血動物模型制作的成功以及益氣活血方對心肌缺血大鼠心肌病理組織的影響。采用RT-PCR方法,檢測7天組、28天組梗死邊緣區(qū)心肌組織中VEGFR-2、HIF-1α、CaMKⅡ、NHE-1基因?qū)用姹磉_(dá)的變化情況。采用蛋白免疫印跡(Western blotting, WB)方法檢測VEGFR-2和HIF-1α蛋白在梗死邊緣區(qū)心肌組織中的表達(dá)情況,結(jié)果：1.網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果：分析已建立的益氣活血方中藥分子一靶標(biāo)蛋白的疾病網(wǎng)絡(luò),當(dāng)預(yù)設(shè)網(wǎng)絡(luò)度為大于8時,VEGFR-2、NHE-1、CaMKⅡ、PKC這4個靶蛋白與益氣活血方藥小分子存在較強的作用聯(lián)系,推測益氣活血方能夠通過其中有效成分的協(xié)同作用來發(fā)揮治療心肌缺血疾病的作用效果。2.測定各組大鼠左心功能的結(jié)果：7天、28天的模型組與假手術(shù)組相比,模型組大鼠左心室射血分?jǐn)?shù)(EF%)、左心室短軸率(FS%)明顯降低,左心室質(zhì)量(LVW)、左心室舒張末期內(nèi)徑(LVIDd)、收縮末期內(nèi)徑(LVIDs)、左心室舒張末期容積(EDV)與收縮末期容積(ESV)明顯增大,有顯著性差異(P0.01)；藥物干預(yù)后,7天各給藥組與模型組相比無明顯差異,28天各給藥組與模型組比較,EF%、FS%均升高,LVIDd和LVIDs、LVW、EDV、ESV均降低,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。HE病理染色結(jié)果顯示,7天、28天的模型組大鼠邊緣區(qū)心肌細(xì)胞排列紊亂,紋理走向不確定,部分可見灶性心肌纖維走形中斷,大量炎性細(xì)胞浸潤,心肌纖維著色不均且顆粒樣變性；28天各給藥組與模型組相比,可見心肌細(xì)胞少量排列紊亂,胞漿紋理出現(xiàn)少數(shù)不規(guī)則橫帶,少量炎性細(xì)胞浸潤。3.分子生物學(xué)指標(biāo)結(jié)果：7天的模型組與假手術(shù)組相比,模型組大鼠梗死邊緣區(qū)心肌組織中NHE-1 mRNA、CaMKⅡ mRNA、HIF-1amRNA和蛋白的表達(dá)升高(P0.05),VEGFR-2 mRNA和蛋白的表達(dá)無明顯變化；28天模型組與假手術(shù)組相比,模型組大鼠梗死邊緣區(qū)組織中NHE-1 mRNA、CaMKⅡ mRNA, HIF-lamRNA和蛋白、VEGFR-2 mRNA和蛋白的表達(dá)均升高顯著(P0.01)。藥物干預(yù)后,7天各給藥組與模型組相比,各給藥組的大鼠梗死邊緣區(qū)心肌組織中NHE-1 mRNA、CaMKII mRNA的表達(dá)明顯降低(P0.01), VEGFR-2和HIF-1α的基因和蛋白表達(dá)量均升高,且具有顯著性差異(P0.01)；28天各給藥組與模型組相比,各給藥組的大鼠梗死邊緣區(qū)心肌組織中NHE-1mRNA, CaMKII mRNA、HIF-1αmRNA和蛋白、VEGFR-2 mRNA的基因和蛋白表達(dá)量的表達(dá)均降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：1.網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)通過預(yù)測和分析益氣活血方中藥成分,有助于分析益氣活血方中的有效成分及其治療心肌缺血疾病的相關(guān)靶點。2.益氣活血方可以改善梗死邊緣區(qū)心肌組織血液的供應(yīng),以達(dá)到改善心肌缺血大鼠的左心功能和心臟結(jié)構(gòu)的效果；缺血缺氧情況下,機(jī)體進(jìn)行代償性的鈉氫交換反應(yīng),而益氣活血方可以通過調(diào)控NHE-1、CaMKII基因的表達(dá),抑制梗死邊緣區(qū)心肌組織細(xì)胞中鈣離子超載,改善心肌組織的血管舒張能力、增加心肌血流量,進(jìn)而有可能改善心肌缺血癥狀；同時通過研究發(fā)現(xiàn)益氣活血方可以促進(jìn)VEGFR-2和HIF-1α的基因和蛋白的表達(dá),推測益氣活血方可能可以促進(jìn)心肌缺血大鼠的血管新生與成熟,使缺血心肌組織的血液供應(yīng)得以改善,從而減緩心肌缺血向不良病程的方向發(fā)展。創(chuàng)新點：1.本研究通過將網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)和動物實驗相結(jié)合,從網(wǎng)絡(luò)藥理角度闡釋中藥作用的理論,在分子水平上認(rèn)識益氣活血方治療心肌缺血疾病的作用機(jī)制,同時為益氣活血方多組分、多靶點、多途徑的藥效機(jī)制提供了科學(xué)依據(jù)。2.本研究明確了益氣活血方可以促進(jìn)心肌缺血大鼠心肌組織中血管的新生和成熟,同時可以通過鈣調(diào)蛋白激酶信號通路調(diào)節(jié)CaMKⅡ和NHE-1的基因表達(dá),進(jìn)一步對缺血心肌細(xì)胞進(jìn)行保護(hù)作用,從而改善缺血心肌組織引起的心臟功能障礙,
【關(guān)鍵詞】：網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué) 網(wǎng)絡(luò)分析 心肌缺血 益氣活血方
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R259
【目錄】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 符號說明12-14
• 第一部分 文獻(xiàn)綜述14-31
• 綜述一 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)在中醫(yī)藥領(lǐng)域研究概況14-18
• 1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)基礎(chǔ)14-16
• 2 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)在中醫(yī)藥領(lǐng)域中的探索16
• 3 展望16-18
• 綜述二 心肌缺血疾病藥物治療的理論基礎(chǔ)18-25
• 1 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對心肌缺血的藥物治療18-21
• 2 中醫(yī)藥治療心肌缺血疾病的理論基礎(chǔ)21-24
• 3 展望24-25
• 參考文獻(xiàn)25-31
• 第二部分 實驗研究31-75
• 前言31-32
• 研究一 益氣活血方分子作用于心肌缺血疾病靶點的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究32-39
• 1 材料32
• 2 方法32-33
• 3 結(jié)果33-37
• 4 小結(jié)37-38
• 5 討論38-39
• 研究二 動物實驗研究39-75
• 實驗一 益氣活血方對心肌缺血大鼠左心功能的影響和評價39-53
• 1 材料39-40
• 2 方法40-43
• 3 結(jié)果43-51
• 4 小結(jié)51-52
• 5 討論52-53
• 實驗二 益氣活血方對心肌缺血大鼠邊緣區(qū)心肌組織中NHE-1和CaMKⅡ基因表達(dá)的影響53-62
• 1 材料53-54
• 2 方法54-56
• 3 結(jié)果56-59
• 4 小結(jié)59
• 5 討論59-62
• 實驗三 益氣活血方對心肌缺血大鼠邊緣區(qū)心肌組織中VEGFR-2和HIF-1α的基因和蛋白表達(dá)的影響62-75
• 1 材料62-64
• 2 方法64-65
• 3 結(jié)果65-72
• 4 小結(jié)72
• 5 討論72-75
• 結(jié)語75-76
• 參考文獻(xiàn)76-80
• 致謝80-81
• 個人簡歷81-83
• 附圖83-90
• 附圖一 各組大鼠心電圖83-88
• 附圖二 各組大鼠各時間節(jié)點梗死邊緣區(qū)的病理狀態(tài)(10×40倍)88-90
• 附圖三 各組大鼠超聲心動圖90

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3 樂楓;錢耀明;張嘯剛;;益氣活血方促進(jìn)混合痔術(shù)后創(chuàng)面愈合的臨床研究[J];河北中醫(yī);2006年07期

4 王玉中;孫素珍;;“益氣活血方”治療糖尿病視網(wǎng)膜病變30例[J];江蘇中醫(yī)藥;2007年02期

5 溫興韜;江正志;溫興禹;;自擬益氣活血方治療急性腦梗死患者51例臨床觀察[J];安徽醫(yī)藥;2009年10期

6 農(nóng)田泉;黃建東;;益氣活血方治療腦梗塞臨床研究[J];遼寧中醫(yī)雜志;2010年10期

7 安建峰;張金虎;汪靜;;益氣活血方對實驗性高脂血癥大鼠血脂及載脂蛋白的影響[J];陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2010年05期

8 張明雪;張玉梅;Esther Jun;何偉;車紅花;顧平;;Effects of Yiqi Huoxue Recipe(益氣活血方)and Coxsackie Virus B Type 3 on the Expression of Ribosomal Protein S20 in Rat Cardiac Myocytes[J];Chinese Journal of Integrative Medicine;2011年05期

9 楊紅;齊聰;周華;;益氣活血方治療卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫術(shù)后復(fù)發(fā)118例[J];上海中醫(yī)藥雜志;2011年08期

10 李曉星;胡杰林;尤敏;趙瑞珍;韓存恩;譚萬初;;解毒益氣活血方抑制血管生成的實驗研究[J];中醫(yī)臨床研究;2012年08期

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1 齊聰;楊紅;周華;;益氣活血方干預(yù)卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫術(shù)后復(fù)發(fā)的臨床療效分析[A];第十次全國中醫(yī)婦科學(xué)術(shù)大會論文集[C];2010年

2 任怡;齊聰;;益氣活血方治療復(fù)發(fā)性卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫的臨床療效觀察[A];第九次全國中醫(yī)婦科學(xué)術(shù)大會論文集[C];2009年

3 李翠屏;鄭吉民;彭力宏;;益氣活血方對大鼠皮層神經(jīng)元缺氧凋亡影響的藥理學(xué)研究[A];首屆中國中醫(yī)藥實驗動物科技交流會論文匯編[C];2002年

4 江宇泳;王憲波;王融冰;;益氣活血方抗大鼠肝纖維化的實驗研究[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會第二十二屆全國脾胃病學(xué)術(shù)交流會暨2010年脾胃病診療新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2010年

5 張敏;杜錦輝;;益氣活血方對幽門結(jié)扎胃潰瘍作用的實驗研究[A];第二十次全國中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會議暨消化疾病診治進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2008年

6 任鈞國;江麗娟;李軍梅;李鴻海;劉建勛;;益氣活血方對自發(fā)性高血壓左心室肥厚大鼠心肌纖維化的影響[A];第十二次全國中西醫(yī)結(jié)合微循環(huán)學(xué)術(shù)會議會議指南及論文摘要[C];2012年

7 張璐;吳彩鳳;金基成;殷惠軍;;益氣活血方對急性心肌梗死大鼠心肌缺血損傷的影響[A];第一屆全國中西醫(yī)結(jié)合心血管病中青年醫(yī)師論壇論文匯編[C];2008年

8 江毅;程偉;;益氣活血方及其拆方對人血管平滑肌細(xì)胞增殖影響的觀察[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會心病分會第十次全國中醫(yī)心病學(xué)術(shù)年會暨吉林省中醫(yī)藥學(xué)會心病第二次學(xué)術(shù)會議論文精選[C];2008年

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1 馮磊;益氣活血方可提高腫瘤患者對射線耐受性[N];中國中醫(yī)藥報;2008年

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2 鄭乘龍;益氣活血方對心梗大鼠代謝影響及其作用機(jī)制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

3 程偉;從細(xì)胞周期調(diào)控探討益氣活血方防治球囊損傷血管狹窄的機(jī)理[D];湖北中醫(yī)學(xué)院;2006年

4 田昕;益氣活血方對動脈粥樣硬化家兔干預(yù)作用的實驗研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2007年

5 張效科;益氣活血方對糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)結(jié)構(gòu)和功能影響的實驗研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2004年

6 劉玉霞;益氣活血方對冠心病前臨床心衰階段神經(jīng)內(nèi)分泌影響的臨床研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2015年

7 黃鳳;經(jīng)穴注射BMSCs聯(lián)合益氣活血方對DM后肢缺血大鼠血管再生作用機(jī)制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2014年

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1 吳佳妮;基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)探討益氣活血方治療心肌缺血的分子機(jī)制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

2 文軍;益氣活血方治療椎—基底動脈供血不足性眩暈的臨床研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2009年

3 張燕;益氣活血方防治小兒反復(fù)呼吸道感染的機(jī)理研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2006年

4 石穎;中藥復(fù)方益氣活血方抗肝癌作用及機(jī)理研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2004年

5 莫小琴;益氣活血方治療慢性乙型肝炎的臨床研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2008年

6 湯微;益氣活血方對糖尿病視網(wǎng)膜病變眼底血流動力學(xué)的影響[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2011年

7 劉舸;益氣活血方對消化性潰瘍病變黏膜環(huán)氧合酶-1和環(huán)氧合酶-2的調(diào)節(jié)作用研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2012年

8 惲海峰;益氣活血方對胃黏膜保護(hù)作用的臨床與實驗研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2007年

9 康日艷;益氣活血方治療慢性充血性心力衰竭的臨床研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2011年

10 韓霏;益氣活血方對實驗小鼠急性心肌缺血損傷的影響[D];延邊大學(xué);2012年

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本文編號：1086551