Wilson病(Wilson’s disease)是一種多于青少年期起病的常染色體隱性遺傳銅代謝障礙性疾病,也是目前少數(shù)可以治療的神經(jīng)遺傳病。臨床資料顯示,以肢體扭轉(zhuǎn)、行走和吞咽困難等為主要臨床表現(xiàn)且病程較長(zhǎng)的腦型WD患者常規(guī)驅(qū)銅療效差、病情恢復(fù)慢,學(xué)習(xí)、工作和生活能力嚴(yán)重受限,嚴(yán)重者甚至危及生命。因此,這些難治性腦型WD患者的治療是目前WD臨床診療所面臨的難題。本研究團(tuán)隊(duì)在前期研究中根據(jù)WD中醫(yī)辯證研究結(jié)果,創(chuàng)用通腑養(yǎng)髓方治療腦型WD患者獲得明顯臨床療效,并從神經(jīng)元凋亡和自噬等角度對(duì)其療效機(jī)制進(jìn)行了系列研究。研究發(fā)現(xiàn),除了銅蓄積直接導(dǎo)致神經(jīng)元損傷外,銅藍(lán)蛋白(ceruloplasmin,CP)合成障礙和亞鐵氧化酶活性減低所致的細(xì)胞內(nèi)鐵穩(wěn)態(tài)失衡是難治性腦型WD神經(jīng)元損傷的重要機(jī)制,也是這些患者常規(guī)驅(qū)銅療效不佳的主要原因。近年來(lái)的研究還發(fā)現(xiàn),一種鐵依賴性非程序性細(xì)胞死亡方式——ferroptosis與多種神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病關(guān)系密切,且與腦型WD的神經(jīng)元損傷機(jī)制相契合。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn),泛素結(jié)合蛋白/死骨片1(ubiquitin-binding protein/Sequestosome-...

【文章頁(yè)數(shù)】：94 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮略詞
前言
第一部分 WD模型TX乳鼠皮質(zhì)神經(jīng)元ferroptosis效應(yīng)觀察
    1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 主要試劑
        1.3 試劑配制
        1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 小鼠ATP7b基因檢測(cè)
        2.2 乳鼠皮質(zhì)神經(jīng)元的分離培養(yǎng)和鑒定
        2.3 實(shí)驗(yàn)分組及細(xì)胞處理
        2.4 細(xì)胞收集
        2.5 細(xì)胞生存率檢測(cè)
        2.6 ICP-MS法測(cè)定神經(jīng)元內(nèi)Cu、Fe微量元素含量
        2.7 Elisa法檢測(cè)鐵代謝相關(guān)蛋白DST、TRF、TFR、FE
        2.8 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞ROS水平
        2.9 LDH漏出水平檢測(cè)
        2.10 超氧化物歧化酶SOD水平的檢測(cè)
        2.11 丙二醛MDA水平的檢測(cè)
        2.12 還原型谷胱甘肽GSH含量的檢測(cè)
        2.13 氧化型谷胱甘肽GSSG含量的檢測(cè)
        2.14 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 神經(jīng)元鑒定
        3.2 MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3 ICP-MS檢測(cè)TX乳鼠皮質(zhì)神經(jīng)元內(nèi)銅、鐵元素水平結(jié)果
        3.4 Fer-1對(duì)TX乳鼠皮質(zhì)神經(jīng)元鐵代謝相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        3.5 Fer-1對(duì)TX乳鼠皮質(zhì)神經(jīng)元ROS水平的影響
        3.6 Fer-1對(duì)TX乳鼠皮質(zhì)神經(jīng)元LDH漏出率的影響
        3.7 Fer-1對(duì)TX乳鼠皮質(zhì)神經(jīng)元超氧化物歧化酶SOD的影響
        3.8 Fer-1對(duì)TX乳鼠皮質(zhì)神經(jīng)元丙二醛MDA的影響
        3.9 Fer-1對(duì)TX乳鼠皮質(zhì)神經(jīng)元還原型谷胱甘肽GSH的影響
        3.10 Fer-1對(duì)TX乳鼠皮質(zhì)神經(jīng)元氧化型谷胱甘肽GSSG的影響
    4 討論
    5 小結(jié)
第二部分 通腑養(yǎng)髓方對(duì)WD模型TX乳鼠神經(jīng)元ferroptosis效應(yīng)及p62-Keap1-NRF2 通路蛋白的調(diào)控
    1 實(shí)驗(yàn)材料和器材
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 藥物
        1.3 試劑
        1.4 主要儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 分組
        2.2 通腑養(yǎng)髓方含藥血清的制備
        2.3 Western Blot實(shí)驗(yàn)
        2.4 其他實(shí)驗(yàn)方法
        2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 MTT實(shí)驗(yàn)
        3.2 通腑養(yǎng)髓方對(duì) TX 乳鼠皮質(zhì)神經(jīng)元內(nèi)銅鐵元素的影響
        3.3 通腑養(yǎng)髓方對(duì)TX乳鼠皮質(zhì)神經(jīng)元內(nèi)鐵代謝相關(guān)蛋白的影響
        3.4 通腑養(yǎng)髓方對(duì)TX乳鼠皮質(zhì)神經(jīng)元ROS的影響
        3.5 通腑養(yǎng)髓方對(duì)TX乳鼠皮質(zhì)神經(jīng)元LDH漏出率的影響
        3.6 通腑養(yǎng)髓方對(duì)TX乳鼠皮質(zhì)神經(jīng)元超氧化物歧化酶SOD的影響
        3.7 通腑養(yǎng)髓方對(duì)TX乳鼠皮質(zhì)神經(jīng)元丙二醛MDA的影響
        3.8 通腑養(yǎng)髓方對(duì)TX乳鼠皮質(zhì)神經(jīng)元還原型谷胱甘肽GSH的影響
        3.9 通腑養(yǎng)髓方對(duì)TX乳鼠皮質(zhì)神經(jīng)元氧化型谷胱甘肽GSSG的影響
        3.10 通腑養(yǎng)髓方對(duì)TX乳鼠皮質(zhì)神經(jīng)元內(nèi)p62-Keap1-NRF2通路相關(guān)蛋白的影響
    4 討論
課題總結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號(hào)：3962772