目的:研究表明,動(dòng)脈粥樣硬化癥(AS)與內(nèi)皮細(xì)胞衰老密切相關(guān),我們的前期研究發(fā)現(xiàn)山核桃葉總黃酮具有抗氧化、調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖等作用,在調(diào)控細(xì)胞成熟和衰老方面中具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。本研究以血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)衰老為細(xì)胞模型,探討山核桃葉總黃酮(TFs)的抗衰老作用,并以miR-34a/SIRT1調(diào)控通路為基礎(chǔ)探索其治療AS的內(nèi)在機(jī)制,為進(jìn)一步發(fā)掘AS的治療靶點(diǎn),開發(fā)有效藥物,豐富中醫(yī)藥治療機(jī)理,為AS的防治探索一條新的思路和途徑。方法:體外培養(yǎng)HUVECs細(xì)胞株,用Ang Ⅱ誘導(dǎo)建立衰老細(xì)胞模型。采用MTS法檢測細(xì)胞存活率,β-半乳糖苷酶檢測內(nèi)皮細(xì)胞衰老程度,流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期,硝酸還原酶法檢測NO含量,熒光定量PCR檢測miRNA和mRNAs的表達(dá),采用Western blotting技術(shù)檢測細(xì)胞中蛋白表達(dá)水平。并用miR-34a模擬物(miR-34amimic)、miR-34a 抑制劑(miR-34a inhibitor)和 SIRT1 抑制劑(NAM)轉(zhuǎn)染HUVEC細(xì)胞,探討miR-34a/SIRT1信號(hào)通路在山核桃葉總黃酮抗內(nèi)皮細(xì)胞衰老過程...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１－ａｌ染色觀察Ａｎｌｌ對ＨＵＶＥＣｓ的影響皿ｘ４００，?＂＝４

ｐ－ｇａｌ是公認(rèn)的鑒定細(xì)胞衰老的生物學(xué)標(biāo)志。衰老細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)Ｐ－ｇａｌ異常高表??達(dá)。Ｐ－ｇａｌ染色法結(jié)果表明，空白對照組幾乎不出現(xiàn)藍(lán)色的Ｐ－ｇａｌ染色陽性細(xì)胞，??而Ａｎ班誘導(dǎo)姐細(xì)胞藍(lán)染陽性細(xì)胞顯著增加（戶＜０．０５），見圖１－１，表１－４。??攻—聲?Ｖ?壬袁巧’，乂；＇?：Ｖ....

圖１－５山核桃葉總黃麗干預(yù)對細(xì)胞周期的影響批＝４）??

期細(xì)胞比例明盧增加，Ｓ期細(xì)胞比例減少。山核桃葉總黃麗預(yù)處理組與模型組相??比較Ｇ０／Ｇ１期細(xì)胞比例減少，Ｓ期細(xì)胞比例增加，且在山核桃葉總黃砸２．５ｎｇ／ｍＬ??濃度作用最明顯。見圖１－５，表＾７。??〇?〇??Ａ?導(dǎo)—?穿—??Ｉ?Ｈ?Ｉ?Ｉ?曠?Ｉ??謬實(shí)－ｆｔ?麵胃－?ｉ?．....

圖1-1miR-34a的相對表達(dá)量

衰老細(xì)胞給與不同濃度山核桃葉總黃麗預(yù)處理后，巧光定量ＰＣ民檢測ｉＲ－３４ａ、Ｐ５３、ＳＩＲＴ１、Ｅ２Ｆ１的相對表達(dá)量。結(jié)果顯示，與空白對照組相型組細(xì)胞中ｍｉＲ－３４ａ、Ｐ５３的相對表達(dá)量明顯增加，山核桃葉總黃麗能顯ｉＲ－３４ａ、Ｐ５３的表達(dá)量，在２．５帖ＺｍＬ時(shí)作用最明顯。與空白....

圖1-9SIRTImRNA的相對表達(dá)量

圖１－１０?Ｅ２Ｆ１?ｍＲＮＡ的相對表達(dá)量??核桃葉總黃酬對ＳＩ民Ｔ１、乙醜化Ｐ５３、Ｐ２１、ｃｄｋ２蛋白表達(dá)水平的影響??通過前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，２．５＾ｉｇ／ｍＬ濃度的山核桃葉總黃禍對緩解ＨＵＶＥＣ作用較明顯�，F(xiàn)綜合考慮后選用２．５帖／ｍＬ濃度的山核桃葉總黃麗進(jìn)行衰蛋白的檢測。....

本文編號(hào)：3952452