目的:研究表明,動脈粥樣硬化癥(AS)與內(nèi)皮細胞衰老密切相關(guān),我們的前期研究發(fā)現(xiàn)山核桃葉總黃酮具有抗氧化、調(diào)節(jié)細胞增殖等作用,在調(diào)控細胞成熟和衰老方面中具有潛在的應(yīng)用價值。本研究以血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)衰老為細胞模型,探討山核桃葉總黃酮(TFs)的抗衰老作用,并以miR-34a/SIRT1調(diào)控通路為基礎(chǔ)探索其治療AS的內(nèi)在機制,為進一步發(fā)掘AS的治療靶點,開發(fā)有效藥物,豐富中醫(yī)藥治療機理,為AS的防治探索一條新的思路和途徑。方法:體外培養(yǎng)HUVECs細胞株,用Ang Ⅱ誘導(dǎo)建立衰老細胞模型。采用MTS法檢測細胞存活率,β-半乳糖苷酶檢測內(nèi)皮細胞衰老程度,流式細胞術(shù)分析細胞周期,硝酸還原酶法檢測NO含量,熒光定量PCR檢測miRNA和mRNAs的表達,采用Western blotting技術(shù)檢測細胞中蛋白表達水平。并用miR-34a模擬物(miR-34amimic)、miR-34a 抑制劑(miR-34a inhibitor)和 SIRT1 抑制劑(NAM)轉(zhuǎn)染HUVEC細胞,探討miR-34a/SIRT1信號通路在山核桃葉總黃酮抗內(nèi)皮細胞衰老過程...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１－ａｌ染色觀察Ａｎｌｌ對ＨＵＶＥＣｓ的影響皿ｘ４００，?＂＝４

ｐ－ｇａｌ是公認的鑒定細胞衰老的生物學標志。衰老細胞會出現(xiàn)Ｐ－ｇａｌ異常高表??達。Ｐ－ｇａｌ染色法結(jié)果表明，空白對照組幾乎不出現(xiàn)藍色的Ｐ－ｇａｌ染色陽性細胞，??而Ａｎ班誘導(dǎo)姐細胞藍染陽性細胞顯著增加（戶＜０．０５），見圖１－１，表１－４。??攻—聲?Ｖ?壬袁巧’，乂；＇?：Ｖ....

圖１－５山核桃葉總黃麗干預(yù)對細胞周期的影響批＝４）??

期細胞比例明盧增加，Ｓ期細胞比例減少。山核桃葉總黃麗預(yù)處理組與模型組相??比較Ｇ０／Ｇ１期細胞比例減少，Ｓ期細胞比例增加，且在山核桃葉總黃砸２．５ｎｇ／ｍＬ??濃度作用最明顯。見圖１－５，表＾７。??〇?〇??Ａ?導(dǎo)—?穿—??Ｉ?Ｈ?Ｉ?Ｉ?曠?Ｉ??謬實－ｆｔ?麵胃－?ｉ?．....

圖1-1miR-34a的相對表達量

衰老細胞給與不同濃度山核桃葉總黃麗預(yù)處理后，巧光定量ＰＣ民檢測ｉＲ－３４ａ、Ｐ５３、ＳＩＲＴ１、Ｅ２Ｆ１的相對表達量。結(jié)果顯示，與空白對照組相型組細胞中ｍｉＲ－３４ａ、Ｐ５３的相對表達量明顯增加，山核桃葉總黃麗能顯ｉＲ－３４ａ、Ｐ５３的表達量，在２．５帖ＺｍＬ時作用最明顯。與空白....

圖1-9SIRTImRNA的相對表達量

圖１－１０?Ｅ２Ｆ１?ｍＲＮＡ的相對表達量??核桃葉總黃酬對ＳＩ民Ｔ１、乙醜化Ｐ５３、Ｐ２１、ｃｄｋ２蛋白表達水平的影響??通過前期實驗結(jié)果顯示，２．５＾ｉｇ／ｍＬ濃度的山核桃葉總黃禍對緩解ＨＵＶＥＣ作用較明顯�，F(xiàn)綜合考慮后選用２．５帖／ｍＬ濃度的山核桃葉總黃麗進行衰蛋白的檢測。....

本文編號：3952452