目的建立一種檢測(cè)生物樣品中淫羊藿次苷Ⅱ的間接競爭酶聯(lián)免疫分析方法(icELISA)。方法制備淫羊藿次苷Ⅱ免疫抗原,免疫6～8周齡雌性BALB/c小鼠,建立并篩選穩(wěn)定分泌淫羊藿次苷Ⅱ單克隆抗體(mAb6A9)的雜交瘤細(xì)胞株,用此細(xì)胞通過小鼠體內(nèi)誘生腹水的方法制備抗體;利用mAb6A9建立檢測(cè)淫羊藿次苷Ⅱ的icELISA方法,并借助超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(UPLC-MS/MS)檢驗(yàn)其可靠性。結(jié)果當(dāng)血清淫羊藿次苷Ⅱ濃度為4.6～50.2 ng·mL^-1時(shí),icELISA法吸光度與濃度呈良好的線性關(guān)系(Y=-1.256 9X + 3.488 8,R²=0.993),IC₅₀為15.2 ng·mL^-1,回收率為86.3%～103.8%。對(duì)淫羊藿次苷Ⅱ的血藥濃度進(jìn)行動(dòng)態(tài)檢測(cè),結(jié)果表明icELISA與UPLC-MS/MS方法具有良好的相關(guān)性(R²=0.998),檢測(cè)結(jié)果無顯著性差異。結(jié)論本研究建立了一種可用于檢測(cè)血清中淫羊藿次苷Ⅱ的icELISA方法,該方法簡便、靈敏,有望用于生物樣品中淫...

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圖1淫羊藿次苷II的icELISA標(biāo)準(zhǔn)抑制曲線

表1?mAb6A9與淫羊藿次苷Ⅱ及其他化合物交叉反應(yīng)化合物IC50/(ng·mL-1)CR/%淫羊藿次苷Ⅱ15.2100.0淫羊藿次苷Ⅰ85.717.7淫羊藿素1598.00.95朝藿定A2156.00.71朝藿定B2253.00.6....

圖2icELISA法和與UPLC-MS/MS測(cè)定ICAII的相關(guān)性

表3icELISA及UPLC-MS/MS法測(cè)定大鼠給藥后血清中淫羊藿次苷Ⅱ濃度含量()ng·mL-1給藥后時(shí)間/minicELISALC-MS518.85±1.0417.87±0.631579.76±4.2378.45±2.75....

本文編號(hào)：3941837