宮頸癌可見于各年齡段的女性,是女性生殖道最常見的惡性腫瘤之一,宮頸癌的預(yù)防與診治一直備受關(guān)注。然而目前臨床上常選用的輔助治療手段--化療卻一直存在著不可忽視的毒副作用及耐藥性等問題。因此,找尋安全性高、能克服多藥耐藥的高效化療藥物迫在眉睫。天然藥物(如抗生素)是抗腫瘤藥物的重要來源之一。很多研究證明莫能菌素具有潛在的抗癌效用,但目前對莫能菌素誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞作用機(jī)制尚不清楚。因此本研究以人宮頸癌Hela細(xì)胞作為研究對象,初步探究莫能菌素誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡的機(jī)制。實(shí)驗(yàn)通過MTT法檢測存活率,分析莫能菌素抑制體外培養(yǎng)的Hela細(xì)胞增殖的作用;應(yīng)用倒置相差顯微鏡觀測Hela細(xì)胞的形態(tài)變化;姬姆薩染色法和吖啶橙染色法檢測Hela細(xì)胞凋亡的細(xì)胞核形態(tài)變化;凋亡鑒定:應(yīng)用瓊脂糖凝膠電泳法檢測莫能菌素對細(xì)胞DNA斷裂的影響,應(yīng)用Annexin V-FITC/PI法分析不同濃度的莫能菌素對Hela細(xì)胞凋亡率的影響;采用caspase活性檢測試劑盒檢測莫能菌素對凋亡相關(guān)caspase酶活性的影響;通過加入不同的caspase抑制劑檢驗(yàn)?zāi)芫貙ela細(xì)胞存活率的影響;通過蛋白質(zhì)印跡檢測藥物處理后凋亡相...

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一部分 前言
    1.1 研究背景
        1.1.1 宮頸癌概述
        1.1.2 莫能菌素研究背景
        1.1.3 細(xì)胞凋亡
    1.2 實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙饬x
    1.3 研究技術(shù)路線
第二部分 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 供試藥物
        2.1.3 試驗(yàn)選用試劑及廠商
        2.1.4 主要儀器及廠商
        2.1.5 實(shí)驗(yàn)試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 MTT法檢測細(xì)胞存活率
        2.2.3 倒置相差顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)的觀察
        2.2.4 姬姆薩染色實(shí)驗(yàn)觀察Hela形態(tài)變化
        2.2.5 吖啶橙染色觀察Hela核形態(tài)變化
        2.2.6 瓊脂糖凝膠電泳
        2.2.7 caspase活性檢測試劑盒檢測caspase酶活性
        2.2.8 外加caspase抑制劑檢測細(xì)胞存活率變化
        2.2.9 Annexin V-FITC/PI雙染法
        2.2.10 蛋白質(zhì)含量檢測所用方法
        2.2.11 JC-1試劑盒檢測線粒體去極化
        2.2.12 活性氧試劑盒檢測細(xì)胞內(nèi)ROS水平變化
    2.3 數(shù)據(jù)處理
第三部分 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論
    3.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1.1 MTT實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞存活率
        3.1.2 倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化
        3.1.3 姬姆薩染色觀察Hela形態(tài)變化
        3.1.4 吖啶橙染色觀察細(xì)胞核形態(tài)變化
        3.1.5 瓊脂糖凝膠電泳
        3.1.6 Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡
        3.1.7 caspase酶活檢測
        3.1.8 外加caspase抑制劑檢測細(xì)胞存活率變化
        3.1.9 蛋白質(zhì)印跡法檢測細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白的變化
        3.1.10 JC-1試劑盒檢測線粒體去極化
        3.1.11 活性氧試劑盒檢測細(xì)胞內(nèi)ROS水平
    3.2 討論
第四部分 結(jié)論及展望
    4.1 結(jié)論
    4.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3931034