目的:本課題旨在建立適用于翼首草總苷中環(huán)烯醚萜苷類主要成分馬錢苷、吳茱萸苷、獐牙菜苷及活性單體馬錢苷元吸收機(jī)理研究的Caco-2細(xì)胞單層模型。同時基于分子對接技術(shù)探討P-gp及MRP2轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抑制劑與馬錢苷元的結(jié)合方式及作用力。研究翼首草總苷提取物中馬錢苷、吳茱萸苷、獐牙菜苷及活性單體馬錢苷元在Caco-2細(xì)胞單層模型中的滲透及跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制,為進(jìn)一步深入了解翼首草總苷在體內(nèi)的吸收過程以及生物利用度等提供實驗依據(jù),并為馬錢苷、吳茱萸苷、獐牙菜苷及含這三種成分的中藥新劑型的研制提供科學(xué)依據(jù)。方法:1.培養(yǎng)Caco-2細(xì)胞,建立并評價Caco-2細(xì)胞單層模型:取對數(shù)生長期Caco-2細(xì)胞用完全培養(yǎng)基將細(xì)胞懸浮,以1×10⁵個/ml密度接種到12孔Transwell板上。于AP側(cè)加入含細(xì)胞懸浮液的DMEM 0.5ml,于BL側(cè)加入1.5ml培養(yǎng)基。第一周隔天換液1次,一周后每天換液一次,并在接種后的21天內(nèi)測定其跨膜電阻值(TEER),考察模型的完整性及緊密性。通過考察相關(guān)標(biāo)志物在Caco-2細(xì)胞模型上的滲透率,評價Caco-2細(xì)胞單層模型的通透性。2.采用分子對接技術(shù)預(yù)...

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮略詞表
前言
    1 研究背景
        1.1 Caco-2細(xì)胞單層模型
        1.2 Caco-2細(xì)胞模型在藥物轉(zhuǎn)運(yùn)方式上的應(yīng)用研究
        1.3 翼首草研究進(jìn)展及工作基礎(chǔ)
    2 研究思路
        2.1 課題噬待解決的問題
        2.2 本課題研究思路
第一部分 Caco-2細(xì)胞單層模型的構(gòu)建及評價
    1 實驗材料
        1.1 實驗儀器
        1.2 實驗試劑
        1.3 細(xì)胞株
    2 實驗方法
        2.1 Caco-2細(xì)胞單層模型的建立
        2.2 Caco-2細(xì)胞單層模型的評價
        2.3 數(shù)據(jù)處理
        2.4 統(tǒng)計分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 形態(tài)學(xué)觀察
        3.2 完整性及緊密性驗證
        3.3 穩(wěn)定性考察
        3.4 通透性檢測
    4 小結(jié)
第二部分 基于分子對接與Caco-2細(xì)胞模型研究馬錢苷元的轉(zhuǎn)運(yùn)特性
    1 實驗材料
        1.1 實驗儀器及試劑
    2 實驗方法
        2.1 分子對接考察馬錢苷元與P-gp及MRP2的結(jié)合方式
        2.2 馬錢苷元對Caco-2細(xì)胞毒性的考察及供側(cè)濃度的確立
        2.3 樣品配制
        2.4 馬錢苷元的雙向轉(zhuǎn)運(yùn)實驗
        2.5 HPLC分析方法的建立
        2.6 數(shù)據(jù)處理
        2.7 統(tǒng)計分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 馬錢苷元與P-gp及維拉帕米分子對接結(jié)果
        3.2 馬錢苷元與MRP2蛋白及環(huán)孢素A分子對接結(jié)果
        3.3 馬錢苷元對Caco-2細(xì)胞毒性及供側(cè)濃度考察
        3.4 馬錢苷元的雙向轉(zhuǎn)運(yùn)實驗
        3.5 HPLC方法學(xué)考察
    4 小結(jié)
第三部分 基于Caco-2細(xì)胞單層模型研究翼首草總苷轉(zhuǎn)運(yùn)特性
    1 實驗材料
        1.1 實驗儀器及試劑
        1.2 實驗藥物
    2 實驗方法
        2.1 Caco-2細(xì)胞單層模型的建立
        2.2 翼首草總苷對Caco-2細(xì)胞毒性的考察
        2.3 樣品配制
        2.4 翼首草總苷的雙向轉(zhuǎn)運(yùn)實驗
        2.5 樣品處理
        2.6 HPLC方法學(xué)考察
        2.7 數(shù)據(jù)處理
        2.8 統(tǒng)計分析
    3 結(jié)果
        3.1 翼首草總苷對Caco-2細(xì)胞毒性的考察
        3.2 翼首草總苷的雙向轉(zhuǎn)運(yùn)
        3.3 HPLC分析方法學(xué)考察
    4 小結(jié)
討論
結(jié)論
問題與展望
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
在校期間公開發(fā)表的學(xué)術(shù)論文、專著及科研成果



本文編號：3915816