酒精性肝病(Alcoholic liver disease,ALD)是過量飲酒引起的中毒性肝損傷。長期過量飲酒是世界各地常見的保健問題,具有顯著的發(fā)病率和死亡率。酒精性肝病作為全球性的重大疾病,已經(jīng)嚴(yán)重威脅著人們的生命健康。云芝胞內(nèi)糖肽(PSK)是從云芝發(fā)酵菌絲體中提取的細(xì)胞內(nèi)蛋白結(jié)合多糖。本實(shí)驗(yàn)室對其抗酒精性肝損傷的作用已經(jīng)進(jìn)行了初步的研究,進(jìn)行了分離純化,并表征了純化組分的結(jié)構(gòu),但純化后組分的抗酒精性肝損傷活性尚未評價(jià)。因此,本論文通過建立酒精性肝損傷小鼠模型評價(jià)云芝胞內(nèi)糖肽純化組分的抗酒精性肝損傷活性,并通過腸道微生物分析探索PSK-1在酒精性肝損傷小鼠腸道菌群中的作用。主要研究工作如下:(1)采用不同濃度的NaCl溶液,利用AKTA蛋白純化系統(tǒng)、DEAE FF柱對PSK-1進(jìn)行分離,得到PSK-1b和PSK-1c,再通過Superdex 75凝膠柱進(jìn)一步分離得到PSK-1b1和PSK-1c1。(2)建立NIAAA小鼠模型評價(jià)PSK-1b1和PSK-1c1對酒精性肝損傷的防治作用。結(jié)果顯示:PSK-1b1和PSK-1c1均可以顯著的降低血清中ALT和AST的活力;PSK-1b1和...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 酒精性肝損傷
        1.1.1 酒精性肝損傷的流行病學(xué)
        1.1.2 酒精性肝損傷發(fā)病機(jī)制
        1.1.3 酒精性肝病的治療
        1.1.4 酒精性肝損傷動(dòng)物模型
    1.2 藥食用真菌
        1.2.1 云芝研究概況
        1.2.2 云芝多糖
        1.2.3 云芝胞內(nèi)糖肽簡介
        1.2.4 云芝胞內(nèi)糖肽的藥理活性
        1.2.5 云芝胞內(nèi)糖肽的制備
    1.3 立題依據(jù)及研究內(nèi)容
        1.3.1 立題依據(jù)
        1.3.2 研究內(nèi)容
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 PSK-1b1、PSK-1c1的制備
        2.2.2 分離組分的常規(guī)檢測
        2.2.3 酒精性肝損傷小鼠模型建立
        2.2.4 小鼠進(jìn)食量和體重的檢測
        2.2.5 小鼠血清指標(biāo)的檢測
        2.2.6 小鼠肝組織抗氧化指標(biāo)的檢測
        2.2.7 肝組織病理切片及H&E染色
        2.2.8 qRT-PCR法檢測
        2.2.9 免疫印跡法(Westernblot)檢測
    2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第三章 結(jié)果與討論
    3.1 PSK-1b1、PSK-1c1的制備
    3.2 PSK-1b1、PSK-1c1在NIAAA小鼠模型上的活性評價(jià)
        3.2.1 NIAAA小鼠進(jìn)食量及體重變化率
        3.2.2 NIAAA小鼠的肝體比
        3.2.3 NIAAA小鼠模型血清生化指標(biāo)
        3.2.4 NIAAA小鼠肝組織的病理學(xué)組織切片觀察
        3.2.5 PSK-1b1、PSK-1c1對NIAAA小鼠肝組織AMPK通路相關(guān)基因的調(diào)節(jié)
        3.2.6 云芝胞內(nèi)糖肽各組分對NIAAA小鼠肝組織中TLR4通路相關(guān)基因的調(diào)節(jié)..
        3.2.7 云芝胞內(nèi)糖肽各組分對NIAAA小鼠肝組織中CYP2E1轉(zhuǎn)錄水平的影響
        3.2.8 云芝胞內(nèi)糖肽各組分對NIAAA小鼠肝組中氧化酶系轉(zhuǎn)錄水平的影響
        3.2.9 云芝胞內(nèi)糖肽各組分對NIAAA小鼠肝組織中細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄水平的影響
        3.2.10 云芝胞內(nèi)糖肽各組分對NIAAA小鼠肝組織中蛋白表達(dá)的影響
    3.3 云芝胞內(nèi)糖肽分離組分在急性酒精性肝損傷小鼠模型上的活性評價(jià)
        3.3.1 急性ALD小鼠體重變化率
        3.3.2 急性ALD小鼠的肝體比
        3.3.3 急性ALD小鼠模型血清生化指標(biāo)
        3.3.4 急性ALD小鼠模型肝組織抗氧化指標(biāo)
        3.3.5 急性ALD小鼠模型肝組織的病理學(xué)組織切片觀察
        3.3.6 云芝胞內(nèi)糖肽各組分對急性ALD小鼠肝組織AMPK通路相關(guān)基因的影響.
        3.3.7 云芝胞內(nèi)糖肽各組分對急性ALD小鼠肝組織TLR4通路相關(guān)基因的影響
        3.3.8 云芝胞內(nèi)糖肽各組分對急性ALD小鼠肝組織CYP2E1轉(zhuǎn)錄水平的影響
        3.3.9 云芝胞內(nèi)糖肽各組分對急性ALD小鼠肝組織中氧化酶系轉(zhuǎn)錄水平的影響
        3.3.10 云芝胞內(nèi)糖肽各組分對急性ALD小鼠肝組織中細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄水平的影響.
        3.3.11 云芝胞內(nèi)糖肽各組分對急性ALD小鼠肝組織中蛋白表達(dá)的影響
    3.4 PSK-1對急性酒精性肝損傷小鼠腸道微生物的影響
        3.4.1 小鼠糞便DNA純度檢測結(jié)果
        3.4.2 測序數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果
        3.4.3 酒精對小鼠盲腸微生物的影響
        3.4.4 PSK-1對急性酒精肝損傷小鼠盲腸微生物的影響
        3.4.5 PSK-1對小鼠糞便微生物的影響
主要結(jié)論與展望
    主要結(jié)論
    展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄：作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文



本文編號：3902513