目的:體外研究蒲公英萜醇(Taraxerol)對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞的抑制作用,并探討可能的分子機(jī)制。方法:采用噻唑藍(lán)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)蒲公英萜醇對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-231增殖能力的影響,篩選出對(duì)藥物敏感的細(xì)胞以及合適的濃度和時(shí)間進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn);應(yīng)用平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)蒲公英萜醇對(duì)細(xì)胞的集落形成能力影響；采用DCFH-DA熒光染色法觀察細(xì)胞內(nèi)活性氧生成量變化;利用Hoechst熒光染色檢測(cè)在蒲公英萜醇的作用下,乳腺癌細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化；通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率;應(yīng)用吖啶橙染色、透射電鏡、免疫熒光染色觀察蒲公英萜醇處理后細(xì)胞發(fā)生自噬的情況;利用Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)蒲公英萜醇用藥后細(xì)胞凋亡和自噬相關(guān)蛋白表達(dá)以及相關(guān)信號(hào)通路的變化情況。結(jié)果:MTT結(jié)果顯示蒲公英萜醇對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞沒(méi)有明顯影響,MCF-7細(xì)胞的增殖能力受到顯著抑制且呈濃度依賴性;顯微鏡下觀察用藥后MCF-7細(xì)胞數(shù)量減少;平板克隆實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示蒲公英萜醇可顯著抑制MCF-7細(xì)胞克隆形成能力;DCFH-DA染色結(jié)果顯示,用藥組細(xì)胞內(nèi)ROS水平升高;Hoechst實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,蒲公英萜醇用藥組細(xì)胞出現(xiàn)凋...

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．不同途徑的凋亡通路示意圖??（摘自?Ｔｈｅ?ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ?ｏｆ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ：?ｔｈｅｒｅ?ｉｓ?ｍｏｒｅ?ｔｏ?ｌｉｆｅ?ｔｈａｎ?Ｂｄ２．０ｎｃｏｇｅｎｅ．２００３?Ｎｏｖ?２４；?２２??（５３）：８５６８－８０．）??

圖１．不同途徑的凋亡通路示意圖???ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ?ｏｆ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ：?ｔｈｅｒｅ?ｉｓ?ｍｏｒｅ?ｔｏ?ｌｉｆｅ?ｔｈａｎ?Ｂｄ２．０ｎｃｏｇｅｎｅ．２００３（５３）：８５６８－８０．）??現(xiàn)代生命科學(xué)在細(xì)胞凋亡研究后的又一較熱門(mén)的研宄領(lǐng)域。學(xué)家Ｃ．ｄｅ?Ｄｕｖｅ....

圖２．哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)３種主要自噬形式??（摘自?Ａｕｔｏｐｈａｇｙ?ａｎｄ?ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ?ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ：?Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ?ＭＨＣ?ｃｌａｓｓ?ｌｌ?ａｎｔｉｇｅｎ?ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ?ｗｉｔｈ??ｓｔｒｅｓｓ．Ｐｒｏｃ?Ｎａｔｌ?Ａｃａｄ?Ｓｃｉ?Ｕ?Ｓ?Ａ．２００５?Ｍａｙ?３１?；ｌ０２（２２）：７７７９－８０．）??

延邊大學(xué)碩士學(xué)位論自嗤（ｃｈａｐｅｒｏｎｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄＡｕｔｏｐｈａｇｙ，ＣＭＡ）?［２義巨自嗤是指非溶酶體來(lái)源的膜結(jié)構(gòu)的自噬泡，將細(xì)胞質(zhì)中的可溶性蛋白和變性受損的細(xì)胞器進(jìn)行包裹，自與溶酶體發(fā)生融合，進(jìn)而將待降解的物質(zhì)底物運(yùn)輸至溶酶體進(jìn)行降解加工。其負(fù)責(zé)降解細(xì)胞中穩(wěn)定存在的....

圖３．?ＭＴＴ法檢測(cè)蒲公英萜醇對(duì)乳腺癌細(xì)胞ＭＤＡ－ＭＢ－２３１和ＭＣＦ－７增殖的影響??

（１２．５、２５、５０、１００和?２００＾ｌｍｏｌ／Ｌ）分別處理乳腺癌細(xì)胞ＭＣＦ－７和ＭＤＡ－ＭＢ－２３１??一定時(shí)間后（２４，?４８和７２ｈ），結(jié)果顯示，給藥４８ｈ后，蒲公英萜醇對(duì)ＭＣＦ－７細(xì)胞??顯示出明顯的抑制作用，且呈劑量依賴性（圖３）。當(dāng)蒲公英萜醇濃度為１００?ｐｍｏｌ....

圖４．顯微鏡觀察蒲公英？ｇ醇對(duì)ＭＣＦ－７細(xì)胞形態(tài)變化的影響（２００Ｘ）??

Ｃｏｎｔｒｏｌ組細(xì)胞成團(tuán)生長(zhǎng)，連接緊密，形態(tài)飽滿。用藥組細(xì)胞的數(shù)量減少，且??形態(tài)發(fā)生了一定變化：細(xì)胞連接逐漸分散，形態(tài)不規(guī)則，貼壁能力降低。提示蒲公??英萜醇處理細(xì)胞后對(duì)ＭＣＦ－７細(xì)胞造成了一定損傷（圖４）。??Ｔａｒａｘｅｒｏｌ??Ｃｏｎｔｒｏｌ?５０｜ｊＩＶＩ?１００｜ｊＭ....

本文編號(hào)：3900440